Определение биомолекул — ХИМИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЖИВОГО — БИОЛОГИЯ Том 1 — Biological Science — руководство по общей биологии — Тейлор Д.

3.7. Определение биомолекул

В этом разделе мы опишем некоторые простые опыты, с помощью которых можно определять различные вещества, играющие в клетках важную биологическую роль. Существуют и более сложные методы идентификации и разделения клеточных компонентов. Первое место среди них занимают хроматография и электрофорез; их мы рассмотрим в приложении (т. 3).

Желательно сначала освоить методику анализов, работая с чистыми образцами веществ, подлежащих определению. Овладев методикой и научившись различать соответствующие изменения окраски, можно затем приступить к исследованию различных тканей.

Опыт 3.1. Определение биомолекул в чистом виде

ВНИМАНИЕ! При всех описанных здесь анализах нагревание следует проводить на водяной бане при температуре кипения воды. Прямое нагревание пробирок на огне недопустимо.

Материалы и оборудование

Лакмусовая бумага

Пробирки

Штатив для пробирок

Бунзеновская горелка

Пипетки

Шпатель

Шприц (1 мл)

Раствор иода в йодистом калии

Реактив Бенедикта

Разбавленная серная кислота

Гидрокабронат натрия (питьевая сода)

Судан III

Реактив Миллона

Реактив Фелинга

5%-ный раствор гидроксида калия

1%-ный раствор сульфата меди

Раствор дихлорфенолиндофенола (ДХФИФ)

1%-ный раствор крахмала (желательно из кукурузной муки)

Углеводы

РЕДУЦИРУЮЩИЕ САХАРА. К редуцирующим сахарам относятся все моносахариды, например глюкоза и фруктоза, и некоторые дисахариды, например мальтоза. Среди наиболее распространенных сахаров единственный нередуцирующий сахар — это сахароза (дисахарид). Используйте для анализа 0,1—1%-ные растворы сахарозы.

ПРИМЕЧАНИЕ. Реакция полуколичественная, иначе говоря, она позволяет лишь грубо оценить количество редуцирующего сахара, присутствующего во взятой пробе. Окраска осадка переходит от зеленой к желтой, оранжевой и кирпично-красной с увеличением количества редуцирующего сахара. (Зеленый цвет — это результат смешения появившегося желтого осадка с синим раствором сульфата меди.)

ПРИМЕЧАНИЕ. Реакция Фелинга не столь удобна, как реакция Бенедикта, потому что реактивы А и В приходится до анализа хранить отдельно. Чувствительность ее также ниже.

НЕРЕДУЦИРУЮЩИЕ САХАРА. Наиболее распространенный из нередуцирующих сахаров — это сахароза, относящаяся к дисахаридам. Если известно, что редуцирующие сахара в исследуемом растворе отсутствуют (т. е. если предыдущая реакция дала для этого раствора отрицательный результат), то появление кирпично-красного осадка в реакции, описанной ниже, свидетельствует о присутствии какого-то нередуцирующего сахара. Если же было доказано, что в исследуемом растворе содержатся редуцирующие сахара, то в описанной ниже реакции будет получен более обильный осадок, нежели в предыдущей реакции, при наличии в растворе также и какого-либо нередуцирующего сахара.

КРАХМАЛ. Растворим в воде очень слабо, образует в ней коллоидные суспензии. Анализ можно проводить как с суспензией, так и с сухим крахмалом.

ЦЕЛЛЮЛОЗА И ЛИГНИН. См. приложение 2 (окрашивание) в т. 3.

ЛИПИДЫ. К липидам относятся масла (например, кукурузное и оливковое), жиры и воска.

Белки

Для этих анализов очень подходит альбумин куриного яйца

Витамин С (аскорбиновая кислота)

Данный метод можно при необходимости использовать для количественного определения. В этом случае указанные объемы следует отмерять очень точно. Подходящим источником витамина С может служить свежий апельсиновый или лимонный сок в смеси с дистиллированной водой (1:1). Можно использовать также имеющиеся в продаже таблетки витамина С.

ДНК

См. табл. 5.5.

3.15. Как можно определить концентрацию аскорбиновой кислоты в полученной пробе?

3.16. Вам даны три раствора сахара: в одном содержится глюкоза, в другом — смесь глюкозы и сахарозы, в третьем — сахароза.

а) Как вы определите, какой сахар содержится в каждом из этих растворов?

б) Кратко опишите дальнейшие процедуры, с помощью которых можно подтвердить правильность вашего ответа (допустим, что в вашем распоряжении имеется нужный прибор и что время позволяет провести такие определения).

3.17. Как можно приготовить 100 мл 10%-ного раствора глюкозы?

3.18. В вашем распоряжении имеются в качестве исходных растворов 10%-ный раствор глюкозы и 2%-ный раствор сахарозы. Как можно приготовить из них 100 мл смеси с конечной концентрацией 1% сахарозы и 1% глюкозы?

Опыт 3. 2. Определение биомолекул в тканях

Биохимику часто приходится выявлять присутствие тех или иных биомолекул или определять их количество в живых тканях, т. е. вести качественный или количественный анализ. Иногда эти определения можно выполнять непосредственно на самой ткани, но нередко им должен предшествовать тот или иной процесс экстракции или очистки.

Полезно потренироваться на каких-либо обычных пищевых продуктах или на растительном материале, определяя в них те биомолекулы, о которых шла речь в опыте 3.1. Там, где это возможно, мы предлагаем процедуру экстрагирования, которая позволит использовать для анализа чистый бесцветный раствор. Усвоив смысл таких процедур, студент сможет при необходимости сам предложить аналогичные методики.

Материалы и оборудование

Все, что перечислено в опыте 3.1 (от начала и до раствора ДХФИФ)

Ступка с пестиком

Микроскоп

Предметные и покровные стекла

Лезвие бритвы

Часовое стекло

Раствор

Шульца

Флороглюцин + концентрированная соляная кислота

Клубень картофеля

Яблоко

Вата

Одревесневший стебель

Семена/орехи

Намоченный горох

Бобы

Микроскопическое исследование тонких срезов ткани

Метод пригоден для знакомства с теми отложениями запасных веществ, которые можно видеть под микроскопом, например с крахмальными зернами в клубне картофеля.

Микроскопическое исследование срезов с соответствующим окрашиванием или какой-либо иной химической обработкой

Метод пригоден для выявления перечисленных ниже веществ.

Редуцирующие сахара. Поместить срез в несколько капель реактива Бенедикта и осторожно нагреть до кипения; при необходимости добавить воды, чтобы предотвратить высыхание.

Крахмал. Поместить в разбавленный раствор I₂/КI.

Белок. Поместить срез в несколько капель реактива Миллона и осторожно нагреть до кипения; при необходимости добавить воды, чтобы предотвратить высыхание.

Масла и жиры. Окрасить исследуемый материал, например семена, Суданом III, после чего промыть водой и(или) 70%-ным спиртом. Приготовить срезы и заключить в соответствующую среду.

Целлюлоза, лигнин и т. п. См. табл. 5.5.

Исследование прозрачных водных растворов

Обесцветить ткань, если в этом есть необходимость. Присутствующие в ткани пигменты могут мешать цветным реакциям, но обычно эти пигменты легко удалить из ткани органическими растворителями, например 80%-ным этанолом или 80%-ным пропаноном (ацетоном) (беречь от соприкосновения с открытым огнем). Следует, однако, помнить, что эти растворители могут удалять из ткани липиды и растворимые сахара. Методика пригодна для извлечения хлорофилла из листьев.

Гомогенизация материала. Сахара и белки. Кусочки предназначенного для исследования материала растереть в кашицу с небольшим количеством воды при помощи ступки или миксера. Растертый материал процедить через несколько слоев тонкой кисеи или нейлона, предварительно смоченных водой, и либо отфильтровать, либо отцентрифугировать для удаления твердых частиц. Это может и не потребоваться, если суспензия окажется высокодисперсной и практически бесцветной. Прозрачный раствор анализируют как обычно, а если нужно, приготовляют из него соответствующие разведения. Твердый осадок, если он представляет интерес, также может быть подвергнут анализу.

Липиды. Растереть материал, перенести в пробирку и вскипятить. Липиды отделяются в виде капелек масла. Провести окрашивание Суданом III. Можно вместо этого приготовить эмульсию из тонко наструганного ядра ореха или других пищевых продуктов (которые могут быть и окрашенными) и провести эмульсионную пробу.

Описанная методика пригодна для выявления в различных материалах указанных ниже веществ.

Исследуемые материалы можно подразделить на фракции и затем каждую такую фракцию, например семена, мякоть плодов, кожуру или сок, исследовать по отдельности.

методика проведения, результаты, норма и отклонения

В статье рассмотрим, что такое проба Бенедикта.

Сдавать кал на углеводы периодически полезно каждому ребенку. Хотя бы изредка делать это нужно даже взрослым, потому что копрограмма позволяет получить полноценную информацию и вовремя диагностировать определенные патологии, нарушения и развитие болезней. Одним из самых распространенных исследовательских методов для выявления у ребенка в кале углеводов является проба Бенедикта.

Показания к проведению

Проба на содержание в кале углеводов обладает самостоятельным значением при диагностике, однако часто применяется наряду с копрограммой, анализами на кишечный дисбактериоз и наследственным маркером непереносимости лактозы. Исследование назначается для выявления лактазной недостаточности у грудничков и определения у взрослых происхождения болей в животе, чрезмерного метеоризма или хронического поноса.

Типы лактазной недостаточности

В кале углеводы преобладают в форме молочного сахара (лактозы). Определенная доля лактозы остается в нерасщепленном виде в кишечном просвете, именно она вызывает развитие поноса, удержание жидкости, спастические боли в зоне живота и чрезмерное образование газов. В результате формируется лактазная недостаточность, характеризующаяся уменьшением активности этого фермента.

Активность ее у взрослых в норме равна примерно 8 % от начальной степени. По выраженности классифицируются частичная (гиполактазия) и полная (алактазия) лактазная недостаточность. Заболевание по происхождению может быть врожденным (первичным) или приобретенным (вторичным). Второй вариант нарушения формируется, когда повреждаются энтероциты.

Особенности исследования

Проба Бенедикта имеет целью исследование масс кала на дисахара, сахара, природный дисахар (мальтозу), поли- и моносахариды. Самыми опасными являются восстанавливающие дисахариды – галактоза, лактоза и мальтоза.

Исследование кала у грудничков на углеводы определяет наличие или отсутствие нарушений процессов всасывания или расщепления углеводов и лактозы.

Существует два фермента (лактоза и лактаза), которые тесно взаимосвязаны. Если ребенок ощущает нехватку лактазы, которая расщепляет лактозу, то грудное молоко в рационе малыша не всасывается в полном объеме и усваивается не до конца. На этом фоне происходит развитие лактозной непереносимости, заключающейся в неспособности организма обрабатывать лактозу, из-за чего провоцируются определенные нарушения.

Методика проведения

Для того, чтобы подтвердить лактазную недостаточность, чаще всего используют определение концентрации углеводов в кале пробой Бенедикта. Такое исследование позволяет получить сведения об общей способности организма к усвоению сахаров. Методика пробы Бенедикта основывается на проведении реакции, которая позволяет установить наличие углеводов со способностью восстановления меди посредством редуцирующих веществ из степени окисления 2+ в 1+. Эти функции есть у мальтозы, фруктозы, галактозы, лактозы и глюкозы. Сроки проведения исследования колеблются от одного до двух суток.

Рекомендации по забору биоматериала

Для сдачи пробы Бенедикта нужен кал пациента. У ребенка сбирать его следует соответствующим образом. Для анализа подходит материал, собранный с учетом нескольких рекомендаций.

Поэтому нужно ознакомиться заранее с правилами сбора испражнений. Но в них нет ничего сложного. Следует придерживаться следующих простых правил:

• для выхода испражнений нельзя пользоваться клизмой;
• не давать слабительное ребенку;
• образцы следует доставить для анализа максимум через четыре часа после взятия;
• за два-три дня до забора образцов нельзя давать лекарственные препараты;
• придерживаться установленного режима кормления;
• для анализа понадобится как минимум одна чайная ложка биоматериала;
• в питание перед анализом не добавляются новые продукты;
• биоматериал нужно приносить в специальной стерильной емкости, приобрести ее можно в аптеке;
• не подойдут образцы из памперса или пеленки, так как есть вероятность получения неправильных результатов, из-за чего исследование материала на углеводы будет неправильным.

Только при соблюдении этих рекомендаций количество углеводов будет отражать реальное положение дел. В кале углеводы могут поведать об определенных дефектах, с которыми необходимо сразу же бороться. При превышении нормы и содержании их в большем количестве, чем полагается, специалист назначит пациенту индивидуальную терапию.

Какова норма пробы Бенедикта?

Результаты, норма и отклонения

В кале углеводы присутствуют почти всегда. Но существует конкретная норма их наличия. В фекалиях может быть патологический уровень, когда нужно оперативно начинать лечиться.

Сверить результат можно или по таблице, или обратившись к врачу после того, как он получит сведения о копрограмме. Углеводы в результатах указываются в процентах.

Норма пробы Бенедикта у грудничка интересует многих родителей.

Для малыша в возрасте от трех месяцев до года показателем нормы выступает значение от 0 до 0,25 %. Результат более 0,25 % является патологией, небольшое отклонение при этом – 0,3-0,5, среднее – свыше 0,6, высокое – больше 1 %. Результаты у грудных детей от рождения до трех месяцев могут быть ложноположительными. У детей после года и взрослых в норме углеводы не обнаруживаются.

Анализ «проба Бенедикта» имеет очень простую расшифровку, поэтому родители могут сами догадаться, показатели в норме или же понадобится пролечиться и восстановить систему пищеварения.

Нужно понимать, что высокое содержание углеводов – не диагноз, а результат исследования. Диагностировать по нему лактазную недостаточность окончательно нельзя. Такое нарушение характерно для дисбаланса микрофлоры и не сформированной ферментальной системы. Главная задача специалиста состоит в том, чтобы привести в норму работу системы пищеварения. Как это будет сделано, определяется особенностями детского организма и конкретной ситуацией.

Терапия нарушений нормы

Определение углеводов в кале выступает довольно специфическим тестом, поскольку данный способ не позволяет дифференцировать разные виды непереносимости углеводов из-за дисахаридазной недостаточности. У исследования есть самостоятельное диагностическое значение при контроле выбора диеты, нужной пациенту и скрининге недостаточности лактазы.

С результатом анализа нужно обратиться к терапевту, гастроэнтерологу или педиатру. Обычно лечащий врач после этого направляет пациента на дополнительные исследования – водородный тест и копрограмму. Чтобы скорректировать небольшие отклонения, важно привести в норму питание посредством адаптированных или безлактозных смесей питания, содержащих мало лактозы и исключить аллергены из рациона.

Мы рассмотрели, что представляет собой проба Бенедикта.

методика проведения, результаты, норма и отклонения. Норма углеводов в кале у грудничка. Расшифровка анализа на лактазную недостаточность Что означают результаты

На углеводы является лабораторным исследованием, довольно часто назначаемым педиатрами для выявления лактазной недостаточности у грудничков. Прежде чем приступить к описанию этой процедуры, следует разобраться в том, для выявления какого недуга она предназначена.

Что это?

Лактозой называют углевод группы дисахаридов, содержащийся в молоке (в том числе и грудном) и молочных продуктах.

Для того чтобы лактоза могла полностью усвоиться организмом грудного ребенка, должно произойти ее расщепление до моносахаридов, пригодных к всасыванию структурами тонкого кишечника.

За расщепление лактозы отвечает пищеварительный фермент лактаза, синтезируемый организмом именно для этой цели. Если лактаза вырабатывается в недостаточном количестве или не выделяется совсем, у малыша развивается лактозная недостаточность.

Вследствие этого лактоза, оставшаяся непереваренной и не усвоившаяся в тонком кишечнике, отправляется в толстую кишку, где, став отличной питательной средой, провоцирует бурный рост обитающих в ней бактерий, которые способствуют разжижению каловых масс и выделению избыточного количества газов.

Из-за высокого содержания кислоты в стуле всасывающая способность кишечных стенок нарушается. В результате большая часть ферментов и питательных веществ (представленных витаминами, белками, макро- и микроэлементами, жирами, углеводами), содержащихся в грудном молоке, не усваивается организмом грудничка.

Лактазную недостаточность медики часто называют синонимичным термином «лактозная непереносимость», означающим, что человеческий организм либо не усваивает, либо не переносит лактозу, содержащуюся в любых молочных продуктах. Это явление может встречаться и у взрослых людей, но они – в отличие от грудничков – имеют возможность избавиться от этой проблемы путем полного отказа от молочных блюд.

Для малышей грудного возраста материнское молоко является единственной доступной для них пищей, поэтому своевременное выявление лактазной недостаточности и назначение соответствующего лечения поможет избежать задержек в их физическом и психическом развитии.

Для того чтобы убедиться в наличии или отсутствии лактозной непереносимости у грудного ребенка, выполняют анализ кала на содержание углеводов.

Это исследование, именуемое также методом Бенедикта, направлено на выявление в испражнениях малыша редуцирующих сахаров, наделенных способностью восстанавливать гидроксид меди (II) до оксида меди (I). Эти сахара представлены:

• глюкозой;
• лактозой;
• галактозой;
• мальтозой.

В каловых массах грудничка чаще всего обнаруживают лактозу и простые сахара (галактозу и глюкозу), являющиеся продуктами ее расщепления. Метод Бенедикта позволяет установить, нормально ли в организме грудного ребенка протекают процессы всасывания и расщепления углеводов.

Показания

Показанием к выполнению на углеводы является наличие у ребенка определенных симптомов, указывающих на .

Они могут быть представлены:

• Явной задержкой физического и психического развития малыша, обусловленной недостаточным усваиванием питательных веществ, возникающим на фоне энзимопатии (так называют патологию, возникающую из-за недостатка или полного отсутствия клеточных ферментов, отвечающих за пищеварительные процессы). Чтобы своевременно обнаружить эту патологию, грудничка необходимо регулярно взвешивать, сравнивая прибавку в весе с показателями нормы. Слишком медленное увеличение антропометрических показателей ребенка является поводом для тревоги.
• и на поверхности кожных покровов.
• Наличием частого (от восьми до десяти раз в течение суток) водянистого или пенистого стула, обладающего резким кислым запахом, довольно обильного и содержащего значительное количество слизи и непереваренных комочков пищи.
• Возникновением железодефицитной анемии (заявляющей о себе бледностью слизистых оболочек и кожных покровов), обусловленной нарушенной всасываемостью кишечника, плохо поддающейся терапии.
• Наличием частых запоров.
• Беспокойным поведением малыша: почувствовав голод, он требует грудь, но, едва начав сосать, тут же ее бросает и заливается плачем. В результате процесс кормления сильно затягивается, принося мучение и ребенку, и его маме.
• Сильными болями в животике насытившегося малыша. Боли могут быть спровоцированы возникновением колик и чрезмерным скоплением газов, под воздействием которых животик начинает громко урчать и раздуваться.

Возникновение вышеописанных симптомов является поводом к посещению педиатра, который даст направление на анализ каловых масс на углеводы.

Исследование каловых масс на углеводы может быть назначено и взрослым пациентам:

• Страдающим хроническим панкреатитом – заболеванием, характеризующимся дефицитом панкреатических ферментов, вследствие которого сложные углеводы перестают расщепляться и всасываться. Оказавшись в толстом кишечнике и подвергнувшись брожению, они выводятся из организма вместе с испражнениями. у таких больных выявляет наличие амилореи – чрезвычайно высокого содержания в нем непереваренного крахмала.
• Жалующимся на внезапную потерю веса, на сильную диарею, характеризующуюся резким запахом каловых масс и на непереносимость пищевой нагрузки, поскольку во всех этих случаях нарушенное усвоение углеводов может быть обусловлено недостаточной эффективностью пристеночного пищеварения, спровоцированного повреждением слизистых оболочек тонкого кишечника.

Что показывает анализ кала на углеводы?

Первоочередной задачей этого анализа является определение количества углеводов в каловых массах грудничка. Помимо этого данное исследование позволяет:

• определить уровень кислотности кала;
• оценить количество лейкоцитов и С-реактивного воспалительного белка;
• выявить наличие жирных кислот в ходе оптической микроскопии.

Получив результаты исследования, лечащий врач обязательно сравнит их с самочувствием малыша. Даже наличие отклонений от нормы – на фоне удовлетворительного состояния ребенка и при нормальных прибавках в весе – не является основанием для назначения лечения.

В этом случае педиатр предпочтет тактику наблюдения за малышом, обязательно назначив повторное выполнение анализа каловых масс на углеводы, а также тест на их кислотность.

Подготовка

Достоверность результата, при котором количество углеводов соответствует своему истинному значению, зависит от правильности сбора биологического материала.

• Кормление грудничка перед выполнением анализа должно быть таким же, как обычно.
  В этот момент не стоит вводить в его рацион каких-либо новых продуктов. Это же требование касается рациона мамы, кормящей малыша своим молоком. Игнорирование этого условия может исказить результаты исследования.
• Опорожнение кишечника должно произойти естественным путем
  : без применения слабительного препарата или выполнения клизмы.
• На достоверность результата могут повлиять различные лекарства
  , поэтому за трое суток до выполнения анализа необходимо полностью отказаться от их использования.
• Недопустимо собирать каловые массы с поверхности тканевой пеленки или подгузника
  , поскольку их жидкая часть, необходимая для анализа, просто впитается в их материал. Чтобы собрать кал, необходимо положить малыша на стерильную клеенку и после дефекации очень быстро собрать с нее небольшое количество каловых масс.
• Если малыш уже умеет сидеть, кал может быть собран и из горшка
  (предварительно вымытого с мылом и ошпаренного кипятком).
• Самой удобной емкостью для транспортировки каловых масс является стерильная пластиковая баночка
  , плотно закрывающаяся крышка которой снабжена ложкой, предназначенной для сбора биоматериала. Купить ее можно в любом аптечном киоске.
• Доставить собранный биоматериал в лабораторию необходимо в течение четырех часов после дефекации.
  Результат исследования становится известен через два дня.

Значение нормы и расшифровка

Анализ каловых масс на углеводы, являющийся доступным и достаточно простым, выполняется по отношению ко всем малышам грудного возраста.

• Занимаясь расшифровкой анализа, педиатр в первую очередь обращает внимание на количество углеводов.
  Этот показатель является основным, поскольку при лактазной недостаточности организм грудного ребенка утрачивает способность расщеплять их. Оставшись непереваренными, углеводы выводятся из организма грудничка вместе с каловыми массами. В испражнениях новорожденных содержание углеводов не должно превышать 1%. По мере роста ребенка это значение должно постепенно снижаться. Показателем нормы для младенцев, не достигших шестимесячного возраста, является значение, равное 0,5-0,6%. У грудничков старше шести месяцев и до года оно не должно быть выше 0,25%.
• Полезная микрофлора толстого кишечника обладает способностью частично переваривать лактозу.
  Уксусная и молочная кислоты, образующиеся в процессе ее расщепления, существенно повышают кислотность каловых масс. Нормальный уровень кислотности кала не должен составлять менее 5,5. Показатель, равный 5,5 и ниже является основанием для подозрений на лактазную недостаточность.
• Повышенное количество лейкоцитов и С-реактивного воспалительного белка в каловых массах свидетельствует о наличии воспалительных процессов в кишечнике
  , виновницей возникновения которых может быть непереносимость лактозы.
• Наличие значительного количества жирных кислот в каловых массах может быть следствием нарушений
  , сопровождающих процесс всасывания питательных веществ, являющихся непременными спутниками лактазной недостаточности.

Основанием для диагностирования недостаточности лактазы является результат анализа, подтверждающий высокое (более 1%) содержание углеводов в каловых массах грудничка, сочетающийся с наличием развернутой клинической картины патологии. В этом случае ребенку назначают курс соответствующего лечения.

Возросшая кислотность каловых масс – вкупе с увеличением количества С-реактивного воспалительного белка, жирных кислот и лейкоцитов – может стать следствием не только лактазной недостаточности, но и других патологий, нарушающих работу пищеварительной системы.

На углеводы помогает с высокой долей вероятности убедиться в наличии лактазной недостаточности, не давая возможности установить ее тип и причину возникновения.

При подозрении на врожденную лактазную недостаточность грудничкам проводят генетический тест, состоящий в поиске генов, являющихся виновниками крайне низкой выработки лактазы.

Чаще всего непереносимость лактозы возникает вследствие (нарушения пищеварения, обусловленного повреждением ворсинок тонкого кишечника продуктами, содержащими глютен и белки злаковых культур), всевозможных и на белок коровьего молока.

Все эти патологии сначала нарушают функционирование тонкой кишки, после чего организм утрачивает способность расщеплять и усваивать молочный сахар.

Дополнительное обследование

Диагностировать лактазную недостаточность на основании одних только клинических проявлений, не являющихся строго специфичными, невозможно. Поэтому помимо анализа каловых масс на углеводы может потребоваться выполнение целого ряда дополнительных исследований.

Занимаясь диагностикой лактазной недостаточности у взрослых, анализ кала на углеводы дополняют проведением:

• респираторных тестов, состоящих в определении количества водорода и метана в выдыхаемом воздухе. Поскольку именно эти газы образуются в процессе частичного расщепления лактозы полезными бактериями, обитающими в кишечнике;
• слизистых оболочек кишечника.

Вышеназванные диагностические методы при обследовании маленьких детей применяются чрезвычайно редко.

Поскольку непереносимость лактозы характеризуется нарушением всасывания многих нутриентов (биологически значимых химических элементов, необходимых человеческому организму для осуществления нормальной жизнедеятельности) структурами тонкого кишечника, грудничку может быть назначен общий анализ крови. Снижение уровня гемоглобина укажет на то, что в организме ребенка нарушен процесс всасывания железа.

Причины отклонений

• Повышенное содержание углеводов в каловых массах может быть следствием не только лактазной недостаточности, но и нарушений, сопровождающих усвоение других сахаров.
• Получение ложноположительного результата может быть спровоцировано приемом некоторых лекарственных средств (например, антибиотиков и салицилатов) и аскорбиновой кислоты.
• Ложноотрицательный результат может стать следствием кормления (незадолго до выполнения анализа) грудничка смесью с низким содержанием лактозы.

Определение содержания углеводов в кале, используемое для диагностики мальабсорбции углеводов.

Лактоза – это молочный сахар, составляющий около 99% всех углеводов любого молока. Под действием фермента лактазы в желудочно-кишечном тракте лактоза расщепляется на глюкозу и галактозу, после чего происходит всасывание этих моносахаров. Если нерасщепленной лактозы в кишечнике слишком много (активность расщепляющей лактазы снижена), а молочнокислых бактерий недостаточно, то непереваренная лактоза провоцирует поступление воды из организма в полость кишечника, в результате чего возникает жидкий стул (диарея), боли, урчание, вздутие живота. Такое состояние называется лактазной недостаточностью (лактозной непереносимостью, ЛН).

Основными симптомами у грудных детей являются срыгивания, связанные с повышением внутрибрюшного давления, частый, жидкий, пенистый с кислым запахом стул, боли в животе, беспокойство после приёма молока, при сохранении хорошего аппетита, низкая прибавка в весе. У взрослых заболевание проявляется вздутием живота, диареей, тошнотой, болями в животе, которые развиваются после приема в пищу молочных продуктов.

Формы непереносимости лактозы

Фермент лактаза вырабатывается ворсинками тонкого кишечника – энтероцитами. Нарушение выработки лактазы может быть вызвано тремя основными причинами:

Расходный материал:
контейнер для кала.
Хранение:
при tº +4 +8 ºС не более 24 часов.
Транспортировка
при tº +2 +8 ºС в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

Общие показания:

Референсные пределы:
˂0,25%

Кал собирается после самопроизвольной дефекации в одноразовый пластиковый контейнер с герметичной крышкой. Следует избегать примеси к калу мочи и отделяемого половых органов. Недопустимо собирать кал с тканевой поверхности, памперсов.

Необходимо проводить исследование до назначения безлактозной диеты.

Лактоза

– это молочный сахар, составляющий около 99% всех углеводов любого молока. Под действием фермента лактазы в желудочно-кишечном тракте лактоза расщепляется на глюкозу и галактозу, после чего происходит всасывание этих моносахаров. Если нерасщепленной лактозы в кишечнике слишком много (активность расщепляющей лактазы снижена), а молочнокислых бактерий недостаточно, то непереваренная лактоза провоцирует поступление воды из организма в полость кишечника, в результате чего возникает жидкий стул (диарея), боли, урчание, вздутие живота. Такое состояние называется лактазной недостаточностью (лактозной непереносимостью, ЛН).

Основными симптомами у грудных детей являются срыгивания, связанные с повышением внутрибрюшного давления, частый, жидкий, пенистый с кислым запахом стул, боли в животе, беспокойство после приёма молока, при сохранении хорошего аппетита, низкая прибавка в весе. У взрослых заболевание проявляется вздутием живота, диареей, тошнотой, болями в животе, которые развиваются после приема в пищу молочных продуктов.

Формы непереносимости лактозы

Фермент лактаза вырабатывается ворсинками тонкого кишечника – энтероцитами. Нарушение выработки лактазы может быть вызвано тремя основными причинами:

1. Генетические дефекты у детей первого года жизни, или первичная лактазная недостаточность.
2. Физиологическая незрелость ферментной системы у детей грудного возраста.
3. Повреждение энтероцитов в результате заболеваний кишечника (воспаление, опухоли, пищевая аллергия) – вторичная лактазная недостаточность.

Показания к обследованию:

• Клинические симптомы лактазной недостаточности: повышенное газообразование в кишечнике (метеоризм, вздутие кишечника, боли в животе), у детей грудного возраста частые срыгивания.
• Осмотическая («бродильная») диарея после приёма молока или содержащих лактозу молочных продуктов (частый, жидкий, пенистый с кислым запахом стул, боли в животе, беспокойство ребёнка после приёма молока, сохранение хорошего аппетита).
• Недостаточная прибавка массы тела у детей грудного возраста.
• Дисбиотические изменения микрофлоры кишечника.
• Дифференциальная диагностика лактозной непереносимости и других заболеваний желудочно-кишечного тракта у взрослых
• Контроль эффективности лечения ЛН

Правила хранения:

Хранение: при tº +4 +8 ºС не более 24 часов.

Правила транспортировки:

При tº +2 +8 ºС в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

В этой статье:

У маленьких детей часто встречаются проблемы с пищеварением. Чтобы выяснить их происхождение и подобрать лечебную тактику, врачи назначают различные диагностические исследования. Кал на углеводы у грудничка исследуется в случае подозрения на наличие у ребенка лактазной недостаточности.

Проведение исследования позволяет с высокой точностью определить причины нарушения работы пищеварительного тракта у грудничков, а именно — оценить процесс расщепления и усвоения углеводов.

Как правило, этот анализ проводится на первом году жизни ребенка, так как в большинстве случаев признаки со временем проходят, и пищеварение малыша приходит в норму.

Для чего сдавать анализ

Исследование кала на углеводы проводится в случае нарушения всасывания лактозы или непереносимости грудничком пищевых продуктов, которые содержат молочный сахар. Анализ определяет норму содержания углеводов в кале новорожденного, что исключительно важно для детей первого года жизни, поскольку в этот период их основным питанием является .

Если в результате диагностики будут обнаружены повышенные углеводы в кале грудничка, скорее всего, речь идет о том, что детский организм не способен усваивать лактозу или молочный сахар. Это является признаком угрозы для его здоровья и развития.

Мало того, что это заболевание вызывает выраженный дискомфорт у малыша (боли в животе, и повышенное газообразование), лактазная недостаточность еще и лишает его возможности полноценно усваивать питательные вещества из молока. А это становится причиной недостаточного , отставания в физическом развитии и пр. Вот почему необходимо провести анализ, и если углеводы в кале у грудничка повышены — искать причины этого состояния.

Показания

Основным показанием к анализу кала на углеводы у грудничков, как было сказано выше, является подозрение на наличие лактазной недостаточности.

Об этом могут свидетельствовать следующие признаки:

• Отставание в физическом развитии. Симптом говорит о том, что в кале новорожденного содержание углеводов повышено на фоне энзимопатии — недостаточного усвоения питательных веществ организмом. В этом случае рекомендуется систематически и рост ребенка, и если он не соответствует возрастным критериям — обращаться к специалистам.
• Частый и обильный стул (до 8 раз в сутки), иногда с кислым запахом и слизью.
• , колики, вздутие живота.
• на кожных покровах.
• Сложно поддающаяся терапии железодефицитная анемия.

Все эти симптомы нельзя оставлять без внимания. Но диагностировать лактазную недостаточность только на основании клинических признаков заболевания неправильно. Подтвердить диагноз может проведение анализа кала на углеводы у грудничков и его расшифровка специалистом.

Подготовка к анализу кала на углеводы

Чтобы исследование было достоверным, то есть нормы углеводов в кале новорожденного соответствовали своему настоящему значению, нужно правильно собрать биологический материал для анализа.

Важно брать каловые массы не из ребенка, а с чистой клеенки или другой не впитывающей поверхности, сразу же после того, как малыш опорожнил кишечник. Для исследования достаточно кала в количестве чайной ложки, при этом следует собирать его жидкую часть.

Перед проведением анализа малыш должен получать то же питание, что и обычно. Не нужно вводить в его рацион нового или нарушать кормящей маме. В противном случае, результат анализа может быть далек от истины.

Дефекация ребенка должна быть самопроизвольной. Каловые массы для анализа собирают в специальную стерильную пластиковую емкость, которая герметично закрывается. Приобрести ее можно в любой аптеке.

Контейнер с собранным материалом для исследования необходимо доставить в лабораторию в течение 4 часов. О результатах анализа обычно становится известно спустя 2 дня.

Расшифровка

Норма углеводов в кале у грудничка составляет от 0 до 0,25 %. Незначительным отклонением исследования считаются показатели 0,3-0,5 %. В этом случае ничего предпринимать не нужно.

Средним отклонением от нормы содержания углеводов в кале у грудничка является показатель 0,6-1 %. В этой ситуации может быть рекомендовано наблюдение и тест на кислотность каловых масс.

Поводом для тревоги является повышенное содержание углеводов в кале новорожденного — более 1-1,65 %. Такое состояние требует лечения.

Отклонения от нормы

Обследование детей, не достигших трехмесячного возраста, практически не позволяет определить рекомендованной нормы углеводов в кале у грудного ребенка. В столь нежном возрасте в пищеварительном тракте еще только формируется микробная биопленка, и происходит развитие ферментативных процессов в кишечнике. Вот почему при повышенных углеводах в кале у новорожденного волноваться не стоит. Ни в коем случае нельзя прекращать грудное вскармливание. Скорее всего, в дальнейшем анализ придется повторить.

Различные отклонения от нормы уровня углеводов в кале у грудничка обычно свидетельствуют о таких состояниях, как или незрелость ферментативных систем пищеварительного тракта. В этом случае педиатр может назначить дополнительные исследования и провести лечебно-профилактические мероприятия, направленные на коррекцию микробиологических нарушений в кишечнике малыша.

Заниматься самолечением было бы неправильным, особенно, если результат анализа на углеводы в кале у грудничка более 2,0 %.

Необходимость в определении количества углеводов в каловых массах малыша требуется 1 новорожденному из 15. Это исследование не всегда дает положительный результат.

Своевременное определение нормы углеводов в кале для младенца является важным диагностическим мероприятием, которое становится верным шагом к выздоровлению, если будут обнаружены какие-либо патологии. Поэтому тревожиться о том, что ребенку назначен этот анализ, не нужно.

Полезное видео о лактазной недостаточности

В статье рассмотрим, что такое проба Бенедикта.

Сдавать кал на углеводы периодически полезно каждому ребенку. Хотя бы изредка делать это нужно даже взрослым, потому что копрограмма позволяет получить полноценную информацию и вовремя диагностировать определенные патологии, нарушения и развитие болезней. Одним из самых распространенных исследовательских методов для выявления у ребенка в кале углеводов является проба Бенедикта.

Показания к проведению

Проба на содержание в кале углеводов обладает самостоятельным значением при диагностике, однако часто применяется наряду с копрограммой, анализами на кишечный дисбактериоз и наследственным маркером непереносимости лактозы. Исследование назначается для выявления лактазной недостаточности у грудничков и определения у взрослых происхождения болей в животе, чрезмерного метеоризма или хронического поноса.

Типы лактазной недостаточности

В кале углеводы преобладают в форме молочного сахара (лактозы). Определенная доля лактозы остается в нерасщепленном виде в кишечном просвете, именно она вызывает развитие поноса, удержание жидкости, спастические боли в зоне живота и чрезмерное образование газов. В результате формируется лактазная недостаточность, характеризующаяся уменьшением активности этого фермента.

Активность ее у взрослых в норме равна примерно 8 % от начальной степени. По выраженности классифицируются частичная (гиполактазия) и полная (алактазия) лактазная недостаточность. Заболевание по происхождению может быть врожденным (первичным) или приобретенным (вторичным). Второй вариант нарушения формируется, когда повреждаются энтероциты.

Особенности исследования

Проба Бенедикта имеет целью исследование масс кала на дисахара, сахара, природный дисахар (мальтозу), поли- и моносахариды. Самыми опасными являются восстанавливающие дисахариды — галактоза, лактоза и мальтоза.

Исследование определяет наличие или отсутствие нарушений процессов всасывания или расщепления углеводов и лактозы.

Существует два фермента (лактоза и лактаза), которые тесно взаимосвязаны. Если ребенок ощущает нехватку лактазы, которая расщепляет лактозу, то грудное молоко в рационе малыша не всасывается в полном объеме и усваивается не до конца. На этом фоне происходит развитие заключающейся в неспособности организма обрабатывать лактозу, из-за чего провоцируются определенные нарушения.

Методика проведения

Для того, чтобы подтвердить лактазную недостаточность, чаще всего используют определение концентрации углеводов в кале пробой Бенедикта. Такое исследование позволяет получить сведения об общей способности организма к усвоению сахаров. Методика пробы Бенедикта основывается на проведении реакции, которая позволяет установить наличие углеводов со способностью восстановления меди посредством редуцирующих веществ из степени окисления 2+ в 1+. Эти функции есть у мальтозы, фруктозы, галактозы, лактозы и глюкозы. Сроки проведения исследования колеблются от одного до двух суток.

Для сдачи пробы Бенедикта нужен кал пациента. У ребенка сбирать его следует соответствующим образом. Для анализа подходит материал, собранный с учетом нескольких рекомендаций.

Поэтому нужно ознакомиться заранее с правилами сбора испражнений. Но в них нет ничего сложного. Следует придерживаться следующих простых правил:

• для выхода испражнений нельзя пользоваться клизмой;
• не давать слабительное ребенку;
• образцы следует доставить для анализа максимум через четыре часа после взятия;
• за два-три дня до забора образцов нельзя давать лекарственные препараты;
• придерживаться установленного режима кормления;
• для анализа понадобится как минимум одна чайная ложка биоматериала;
• в питание перед анализом не добавляются новые продукты;
• биоматериал нужно приносить в специальной стерильной емкости, приобрести ее можно в аптеке;
• не подойдут образцы из памперса или пеленки, так как есть вероятность получения неправильных результатов, из-за чего исследование материала на углеводы будет неправильным.

Только при соблюдении этих рекомендаций количество углеводов будет отражать реальное положение дел. В кале углеводы могут поведать об определенных дефектах, с которыми необходимо сразу же бороться. При превышении нормы и содержании их в большем количестве, чем полагается, специалист назначит пациенту индивидуальную терапию.

Какова норма пробы Бенедикта?

Результаты, норма и отклонения

В кале углеводы присутствуют почти всегда. Но существует конкретная норма их наличия. В фекалиях может быть патологический уровень, когда нужно оперативно начинать лечиться.

Сверить результат можно или по таблице, или обратившись к врачу после того, как он получит сведения о копрограмме. Углеводы в результатах указываются в процентах.

Норма пробы Бенедикта у грудничка интересует многих родителей.

Для малыша в возрасте от трех месяцев до года показателем нормы выступает значение от 0 до 0,25 %. Результат более 0,25 % является патологией, небольшое отклонение при этом — 0,3-0,5, среднее — свыше 0,6, высокое — больше 1 %. Результаты у грудных детей от рождения до трех месяцев могут быть ложноположительными. У детей после года и взрослых в норме углеводы не обнаруживаются.

Анализ «проба Бенедикта» имеет очень простую расшифровку, поэтому родители могут сами догадаться, показатели в норме или же понадобится пролечиться и восстановить систему пищеварения.

Нужно понимать, что высокое содержание углеводов — не диагноз, а результат исследования. Диагностировать по нему лактазную недостаточность окончательно нельзя. Такое нарушение характерно для дисбаланса микрофлоры и не сформированной ферментальной системы. Главная задача специалиста состоит в том, чтобы привести в норму работу системы пищеварения. Как это будет сделано, определяется особенностями детского организма и конкретной ситуацией.

Терапия нарушений нормы

Определение углеводов в кале выступает довольно специфическим тестом, поскольку данный способ не позволяет дифференцировать разные виды непереносимости углеводов из-за дисахаридазной недостаточности. У исследования есть самостоятельное диагностическое значение при контроле выбора диеты, нужной пациенту и скрининге недостаточности лактазы.

С результатом анализа нужно обратиться к терапевту, гастроэнтерологу или педиатру. Обычно лечащий врач после этого направляет пациента на дополнительные исследования — водородный тест и копрограмму. Чтобы скорректировать небольшие отклонения, важно привести в норму питание посредством адаптированных или безлактозных смесей питания, содержащих мало лактозы и исключить аллергены из рациона.

Мы рассмотрели, что представляет собой проба Бенедикта.

У многих грудничков возникают проблемы с пищеварением, и грудное молоко или смесь усваиваются не полностью. Очень важно вовремя пройти обследование и определить причину болей в животике, комковатого, с зеленью или слизью стула. Часто педиатр выдает направление на анализ биоматериала на углеводы. Что показывает такое исследование, и в каких случаях его назначают?

Анализ назначается при проблемах с усвоением грудного молока или молочной смеси

Зачем назначают исследование биоматериала на углеводы?

Как правило, анализ кала на углеводы (или проба Бенедикта) призван выявить у ребенка первого года жизни признаки лактазной недостаточности. Это состояние означает, что ЖКТ малыша не может полноценно усвоить грудное молоко, главным углеводом которого является лактоза (молочный сахар). Это вещество представляет собой дисахарид, который в норме в тонком кишечнике расщепляется на моносахариды, удобные для дальнейшего усваивания.

Чтобы расщепить лактозу в организме малыша, вырабатывается особый фермент – лактаза. При ее недостатке молочный сахар не расщепляется, а оседает в просвете кишечника. Это чревато задержкой жидкости, диареей, газообразованием и возникновением коликов в животе. Ферментная недостаточность особо критична в грудничковом возрасте, поскольку основным видом питания малыша является молоко.

Лактазная недостаточность может быть врожденной и приобретенной. Первичная возникает у ребенка при нарушениях внутриутробного развития, а вторичная – вследствие дисбактериоза, перенесенных заболеваний (ротавируса), лямблиоза, энтерита или аллергии.

При обнаружении данной патологии крохе назначают прием ферментов или переводят на специальное безлактозное питание.

Подготовка грудничка к исследованию и правила сбора кала

Специальной подготовки ребенка к анализу не требуется. Важно, чтобы кал, собранный для анализа, был в стерильной емкости с плотно завинчивающейся крышкой. Лучше всего с этой целью использовать пластиковую баночку с ложкой, в которую удобно собрать жидкие фрагменты стула – такой контейнер можно приобрести в аптеке (подробнее в статье: ). При сборе анализа следует учитывать следующие нюансы:

1. Биоматериал должен быть доставлен в лабораторию не позднее, чем через 4 часа после акта дефекации.
2. Желательно собирать кал с клеенки, а не с одноразового подгузника или пеленки, так как для этого исследования необходима жидкая составляющая образца. Если малыш пользуется горшком, чашу следует предварительно вымыть и ошпарить кипятком.
3. Перед сбором кала ребенок должен получать питание по обычной схеме, тогда результат будет максимально точным. Если перекормить кроху, анализ может оказаться ложноположительным, если недокормить, или дать низкоуглеводную смесь – ложноотрицательным.

Перед сдачей анализов в питании грудничка не должно быть никаких изменений

Норма содержания углеводов и расшифровка результатов

Углеводы в каловых массах в норме могут присутствовать почти у всех грудничков, однако их содержание должно быть в установленных рамках. Референсное (нормальное) значение – до 0,25%. Однако при расшифровке результатов стоит учитывать следующие нюансы:

• У новорожденных и грудничков в 2-3 месяца значения могут превышать норму, поскольку в этом возрасте секреция ферментов и пищеварение находятся на стадии формирования.
• Если результаты анализа показывают, что процент углеводов в кале до 0,6 – беспокоиться не стоит. Специалисты считают, что эти цифры можно условно считать нормой.
• При значении от 0,7 до 1,0% лечения не назначают, если у ребенка нет проблем с животиком. Таких малышей берут под контроль, им рекомендуется пройти повторное исследование. Если результат остается в тех же пределах, педиатр может назначить ферменты, например Лактаза Бэби.
• Свыше 1% углеводов в кале говорит о высокой вероятности наличия у малыша лактазной недостаточности (подробнее в статье: ). Косвенным подтверждением диагноза будет повышенная кислотность каловых масс, если значение pH ниже, чем 5,5.

Тест Бенедикта – принцип, подготовка, процедура и интерпретация результатов

Последнее обновление: 10 августа 2022 г. Сагар Арьял

Тест Бенедикта используется для определения простых углеводов. Тест Бенедикта идентифицирует редуцирующие сахара (моносахариды и некоторые дисахариды), которые имеют свободные кетоновые или альдегидные функциональные группы. Раствор Бенедикта можно использовать для проверки наличия глюкозы в моче.

Некоторые сахара, такие как глюкоза, называются восстанавливающими сахарами, потому что они способны передавать водороды (электроны) другим соединениям, процесс, называемый восстановлением. Когда восстанавливающие сахара смешивают с реагентом Бенедикта и нагревают, реакция восстановления вызывает изменение цвета реагента Бенедикта. Цвет варьируется от зеленого до темно-красного (кирпичный) или ржаво-коричневого, в зависимости от количества и вида сахара.

Количественный реагент Бенедикта содержит тиоцианат калия и используется для определения количества редуцирующего сахара. Этот раствор образует осадок тиоцианата меди белого цвета, который можно использовать для титрования. Титрование следует повторить с 1% раствором глюкозы вместо образца для калибровки

Принцип теста Бенедикта

При нагревании раствора Бенедикта и простых углеводов раствор меняет цвет на оранжево-красный/кирпично-красный. Эта реакция обусловлена ​​восстановительным свойством простых углеводов. Ионы меди (II) в растворе Бенедикта восстанавливаются до ионов меди (I), что вызывает изменение цвета.

Образовавшийся красный оксид меди(I) нерастворим в воде и осаждается из раствора. Это объясняет образование осадка. По мере увеличения концентрации редуцирующего сахара конечный цвет становится ближе к кирпично-красному и тем больше образуется осадка. Иногда из раствора выпадает твердое вещество кирпично-красного цвета, оксид меди, который собирается на дне пробирки.

Карбонат натрия обеспечивает щелочные условия, необходимые для окислительно-восстановительной реакции. Цитрат натрия образует комплексы с ионами меди (II), поэтому они не разрушаются до ионов меди (I) во время хранения.

Сложные углеводы, такие как крахмалы, НЕ ДАЮТ положительной реакции на тест Бенедикта, если только они не расщепляются при нагревании или пищеварении (попробуйте пожевать крекеры, а затем провести тест). Столовый сахар (дисахарид) является невосстанавливающим сахаром и также не реагирует ни с йодом, ни с реагентом Бенедикта. Сахар необходимо разложить на составляющие глюкозу и фруктозу, тогда тест на глюкозу будет положительным, а тест на крахмал все равно будет отрицательным.

Состав и приготовление раствора Бенедикта

Раствор Бенедикта представляет собой темно-синий щелочной раствор, используемый для определения наличия альдегидной функциональной группы – CHO.

Карбонат натрия безводный = 100 г
Цитрат натрия – 173 г
Пентагидрат сульфата меди(II) = 17,3 г 17,3 г пентагидрата сульфата меди(II).

Процедура теста Бенедикта

1. Приблизительно 1 мл образца помещают в чистую пробирку.
2. В пробирку помещают 2 мл (10 капель) реактива Бенедикта (CuSO4).
3. Затем раствор нагревают на кипящей водяной бане в течение 3-5 минут.
4. Наблюдайте за изменением цвета раствора в пробирках или образованием осадка.

Интерпретация результата теста Бенедикта

Если цвет при кипячении меняется на зеленый, значит, в растворе содержится от 0,1 до 0,5 процента сахара.
Если он меняет цвет на желтый, то в нем содержится от 0,5 до 1 процента сахара.
Если он становится оранжевым, это означает, что присутствует от 1 до 1,5 процентов сахара.
Если цвет меняется на красный, значит, присутствует от 1,5 до 2,0 процентов сахара.
А если цвет меняется на кирпично-красный, значит, в растворе присутствует более 2 процентов сахара.

Положительный тест Бенедикта: Образование красноватого осадка в течение трех минут. Присутствуют редуцирующие сахара. Пример: Глюкоза
Отрицательный тест Бенедикта: Цвет не меняется (остается синим). Редуцирующие сахара отсутствуют. Пример: сахароза.

Ссылки

1. Национальные институты здравоохранения, Тестирование на липиды, белки и углеводы — раствор Бенедикта.
2. Государственный университет Фейетвилля – Биологические молекулы: углеводы, липиды, белки.
3. Harper College – тест Бенедикта.
4. Национальная биохимическая корпорация — РЕШЕНИЕ БЕНЕДИКТА (MB4755).
5. Научная олимпиада. Использование раствора Бенедикта.
6. Великолепный студент-биолог, 2015 – Тесты пищевых продуктов – Тест Бенедикта на снижение содержания сахара.
7. BBC Bitesize- Химия- Углеводы.
8. Университет Манитобы – Молекулы жизни: биохимия – Углеводы.
9. Университет Северного Кентукки. Реагент Бенедикта: тест на снижение содержания сахара.
10. Открытые образовательные ресурсы KNUST, Тест Бенедикта – Качественный тест на углеводы.
11. Веб-сайт биологии Марка Ротери — Биохимические тесты.
12. All Medical Stuff — тест Бенедикта на снижение содержания сахара.
13. Колледж Хендрикса – Тест Бенедикта на глюкозу.
14. Информация, пожалуйста — решение Бенедикта.
15. Mystrica- Тест Бенедикта.
16. Amrita Virtual Lab Совместная платформа для качественного анализа углеводов.
17. Википедия.

Похожие сообщения:

• Тест на оксидазу — принцип, использование, процедура, типы, интерпретация результатов, примеры и ограничения0048
• Тест тройного сахара на железо (TSI) – принцип, процедура, применение и интерпретация
• Тест на растворимость в желчи – принцип, реагенты, процедура и интерпретация результатов

Категории Биохимия

Тест Бенедикта – принцип, процедура, этапы, результаты, применение

11 марта 2022 г. 9 марта 2022 г. Прашант Дахал

Содержание

Что такое тест Бенедикта?

Определение теста Бенедикта

Тест Бенедикта — это химический аналитический метод, используемый для обнаружения восстанавливающего сахара в растворе. Тест Бенедикта — это качественный тест, часто используемый для дифференциации углеводов (сахаридов/сахаров) на восстанавливающие и невосстанавливающие типы.

Восстанавливающие сахара – это сахара, имеющие свободные альдозные или кетозные группы, способные отдавать электроны другим молекулам, окисляя их. У них есть свободный углерод на концах их молекул. Все моносахариды и некоторые дисахариды, олигосахариды и полисахариды являются восстанавливающими сахарами.

Широко используется для идентификации моносахаридов (простых сахаров) и других восстанавливающих сахаров. Используется как альтернатива тесту Фелинга. Идентификация основана на появлении кирпично-красного окрашивания в результате химической реакции между реактивом Бенедикта и редуцирующим сахаром. По интенсивности реакционной смеси можно определить концентрацию сахара, но нельзя оценить числовое значение. Следовательно, это качественный и полуколичественный тест.

Он также используется для определения уровня глюкозы в моче в качестве предположительного теста на сахарный диабет.

Открыт американским химиком/биохимиком Стэнли Росситером Бенедиктом.

Цели теста Бенедикта

• Для определения присутствия редуцирующего сахара в растворе образца
• Для диагностики сахарного диабета путем обнаружения глюкозы в образце мочи
• Для оценки концентрации редуцирующего сахара в растворе образца
• Для дифференциации и идентификации экстрагированных углеводов

Принцип Тест Бенедикта

Карбонат натрия в реагенте Бенедикта повышает рН смеси раствора образца и реагента. В теплых щелочных условиях восстанавливающие сахара проявляют таутомерию с сильными восстанавливающими агентами, энедиолами. Эти ендиолы восстанавливают ионы меди (Cu ²⁺ ) (присутствующие в виде сульфата меди (CuSO ₄ )) реагента Бенедикта до ионов меди (Cu ⁺ ). Медные частицы присутствуют в виде нерастворимого оксида меди (I) или оксида меди (Cu ₂ O) красного цвета. Эти оксиды меди красного цвета осаждаются.

Рисунок. Принцип теста Бенедикта.

Концентрация редуцирующего сахара в образце отличается от интенсивности и оттенка окраски реакционной смеси. Этот оттенок цвета можно использовать для оценки концентрации восстанавливающего сахара в образце. Цвет может варьироваться от зеленоватого до желтого, от оранжево-красного до кирпично-красного. По мере увеличения концентрации восстанавливающего сахара цвет постепенно меняется от зеленоватого к желтоватому, от оранжевого до кирпично-красного.

Requirements of Benedict’s Test

• Sample solution of unknown carbohydrate (or urine sample)
• Test-tubes and test-tube holders
• Pipette
• Bunsen burner
• Benedict’s Reagent

Preparation of Benedict’s Reagent

1. Отмерьте 17,3 грамма сульфата меди (CuSO ₄ ), 173 грамма цитрата натрия (Na ₃ C ₆ H ₅ O ₇ ) и граммов безводного карбоната натрия ₂ CO ₃ ) (или 270 г декагидрата карбоната натрия (Na ₂ CO ₃ . 10H ₂ O)) 
2. Поместите все измеряемые химические вещества в мерную колбу на 100 мл.
3. Залить дистиллированной водой до отметки 1000 мл.
4. Аккуратно встряхните все компоненты.

Рисунок. Приготовление реактива Бенедикта.

Процедура Тест Бенедикта

1. В чистую пробирку добавьте 1 мл раствора пробы (мочи или раствора углеводов).
2. Добавьте 2 мл реагентов Бенедикта поверх образца.
3. Поместите пробирку на кипящую водяную баню и нагревайте в течение 3–5 минут или нагревайте непосредственно над пламенем.
4. Следите за изменением цвета.

Рисунок. Процедура теста Бенедикта. Created with biorender.com

Интерпретация результата / Наблюдение из Тест Бенедикта

Любое изменение цвета с синего на зеленый, желтый, оранжевый или красный в течение 3 минут указывает на положительный результат теста Бенедикта, т. е. на присутствие редуцирующего сахара в образец.

Для полуколичественной оценки концентрация редуцирующего сахара может быть определена на основе оттенка проявленного цвета следующим образом;

Оттенок	Прибл. Concentration of Reducing Sugar (in g%)	Indication
Blue	0	No reducing sugar
Green solution	< 0.5	Trace reducing sugar
Зеленый стр.	0,5 – 1	Следы редуцирующего сахара
Желтый ppt.	1 -1,5	Низкий редуцирующий сахар
Оранжево-красный пп.	1,5 – 2	Умеренный редуцирующий сахар
Кирпично-красный ppt.	>2	Высокий редуцирующий сахар

Рисунок – Интерпретация результата, наблюдение теста Бенедикта.

Меры предосторожности из Тест Бенедикта

• Измерение должно быть точным.
• Не нагревайте смесь быстро. Лучше всего нагревать на водяной бане медленно.
• Во время нагревания раствора используйте держатель для пробирок.
• Не направляйте пробирку лицом к себе или другим во время нагревания.
• Нагревание следует провести не менее трех раз, прежде чем сообщать об отрицательном результате.

Приложения из Тест Бенедикта

• В биохимии для анализа и идентификации неизвестных углеводных экстрактов.
• В клинической диагностике для экспресс-предположительной диагностики сахарного диабета.
• В контроле качества для обнаружения простых сахаров и их количественного определения.

Преимущества из Тест Бенедикта

• Простой тест, требующий меньше материалов и меньше времени.
• Нетоксичные реагенты.
• Недорого.
• Качественная и полуколичественная оценка.

Ограничения из Тест Бенедикта

• Ложноположительный результат из-за реакции с такими препаратами, как пенициллин, изониазид, стрептомицин, салицилаты и п-аминосалициловая кислота.
• Химические вещества в моче, такие как креатинин, аскорбиновая кислота и ураты, замедляют реакцию Бенедикта.
• Точная концентрация редуцирующего сахара не может быть измерена; может быть указано только предполагаемое полуколичественное значение.
• Требуется дополнительный тест для идентификации углевода  .

Ссылки

1. Роберт Д. Симони; Роберт Л. Хилл и Марта Воан (2002). «Раствор Бенедикта, реагент для измерения восстанавливающих сахаров: клиническая химия Стэнли Р. Бенедикта». Дж. Биол. Химия . 277  (16): 10–11. doi: 10. 1016/S0021-9258(19)61050-1.
2. Национальные институты здравоохранения, Тестирование на липиды, белки и углеводы – раствор Бенедикта.
3. Университет Северного Кентукки — Реагент Бенедикта: тест на снижение содержания сахара.
4. Шреста Б. (2002 г.). Практическая биохимия и биотехнология. Первое издание. 99933-665-1-Х.
5. Государственный университет Фейетвилля – Биологические молекулы: углеводы, липиды, белки.
6. KNUST Открытые образовательные ресурсы.
7. Amrita Virtual Lab Совместная платформа для качественного анализа углеводов.
8. Тест Бенедикта – подготовка реагентов, принцип, процедура, реакция (byjus.com)
9. Тест Бенедикта: принцип, процедура, результат и ограничения (vedantu.com)
10. Тест Бенедикта: принцип, подготовка, процедура и интерпретация результатов (microbiologyinfo.com)
11. Тест Бенедикта: определение, принцип, применение и реагент .com)

Тест Бенедикта на снижение содержания сахара

Что такое тест Бенедикта на невосстанавливающие сахара? Тест Бенедикта на нередуцирующие сахара — это тест, который определяет наличие нередуцирующие сахара в тестовом растворе. Основным реагентом в тесте Бенедикта для снижения содержания сахара является раствор Бенедикта, который содержит сульфат меди(II) карбонат натрия цитрат натрия Что такое невосстанавливающие сахара?  Невосстанавливающие сахара — это сахара, не содержащие альдегидной функциональной группы  — восстанавливающие соединения. Поскольку невосстанавливающие сахара не имеют альдегидной группы, они не могут восстановить медь (I) (синий) до меди (II) (красный). Сахароза — самый распространенный дисахарид, невосстанавливающий сахар. Сахароза — невосстанавливающий сахар Многие студенты путают тест Бенедикта на невосстанавливающие сахара с тестом Бенедикта на восстанавливающие сахара, возможно, из-за того, что некоторые этапы процедуры схожи. См. тест Бенедикта на снижение уровня сахара. Является ли тест Бенедикта на нередуцирующие сахара качественным или количественным? Тест может быть качественным или количественным. Качественный тест дает изменение цвета от синего до зеленого, желтого, оранжевого и кирпично-красного. Качественный тест обсуждается здесь . Количественный тест включает использование тицианата калия и получение тиоцианата меди в виде белого или бледно-зеленого осадка. Затем этот осадок можно титровать. ПРОЦЕДУРА Какова процедура теста Бенедикта на снижение содержания сахара? Образец пищи жидкий не требует предварительной подготовки, за исключением разбавления, если он вязкий или концентрированный. Для твердого образца приготовьте тестовый раствор, измельчив пищу и добавив небольшое количество дистиллированной воды. Сцедить суспензию для удаления крупных частиц. Используйте декантированную жидкость в качестве тестового раствора. Добавьте 2 см3 раствора пробы в пробирку. Добавьте 1 см3 разбавленной соляной кислоты и кипятить в течение одной минуты. Дайте трубке остыть, а затем нейтрализуйте кислоту с помощью гидрокарбоната натрия . Соблюдайте осторожность из-за «шипения» или шипения. Проверьте с помощью синей лакмусовой бумаги или индикаторной бумаги. Не беспокойтесь, если полученный раствор будет слегка щелочным; Раствор Бенедикта также является щелочным, поскольку щелочная среда необходима для окисления ионов меди (II) сахарами Оставить пробирку на кипящей водяной бане в течение примерно 5 минут или до тех пор, пока цвет смеси не изменится. Наблюдайте за изменением цвета в течение этого времени, а также за конечным цветом. Для подготовки контроля повторите шаги, используя 2 см3 дистиллированной воды вместо раствора образца. НАБЛЮДЕНИЯ/РЕЗУЛЬТАТЫ Каковы ожидаемые результаты теста Бенедикта на невосстанавливающие сахара? Наблюдение Без изменения цвета (синий) Зеленый Желтый Оранжевый Кирпично-красный Интерпретация Нередуцирующие сахара отсутствуют Присутствуют следовые количества невосстанавливающих сахаров Присутствуют низкие количества редуцирующих сахаров Умеренно присутствуют редуцирующие сахара Присутствуют большие количества невосстанавливающих сахаров Какие результаты ожидаются, если образец пищевого продукта уже был протестирован на снижение содержания сахара? Тест на нередуцирующие сахара часто проводится на образце пищевого продукта, в котором дал отрицательный результат на в отношении редуцирующего сахара. Если было показано присутствие редуцирующих сахаров, при проведении теста на нередуцирующие сахара часто наблюдается более тяжелый осадок. ОБСУЖДЕНИЕ Каков принцип теста Бенедикта на невосстанавливающие сахара? Дисахариды гидролизуются до составляющих их моносахаридов при кипячении в разбавленной соляной кислоте . Моносахаридные продукты гидролиза представляют собой восстанавливающие сахара, т.е. имеют альдегидную функциональную группу и могут восстанавливать медь в присутствии щелочи, вызывая изменение цвета. Зачем в смесь добавляли гидрокарбонат натрия? Нейтрализация . Гидрокарбонат натрия необходим для нейтрализации, так как восстановление ионов меди(II) не будет происходить в кислых условиях – присутствует избыток кислоты. Укажите роль медного купороса в растворе Бенедикта. Редуцируемые виды. голубых ионов меди(II) из сульфата меди(II) восстанавливаются до красных ионов меди(I) альдегидными группами восстанавливающих сахаров. Это объясняет наблюдаемые изменения цвета. Образовавшийся красный оксид меди(I) нерастворим в воде и осаждается из раствора. Это объясняет образование осадка. Чем больше концентрация редуцирующего сахара, тем ближе окончательный цвет к кирпично-красному и тем больше образуется осадка. Укажите роль карбоната натрия в растворе Бенедикта. Подщелачивание. Карбонат натрия обеспечивает щелочные условия, необходимые для описанной выше окислительно-восстановительной реакции. Укажите роль цитрата натрия в растворе Бенедикта. Стабилизация. Цитрат натрия образует комплексы с ионами меди (II), поэтому они не разрушаются до ионов меди (I) во время хранения. Существуют ли тесты, альтернативные тесту Бенедикта на снижение содержания сахара? Тест Фелинга на невосстанавливающий сахар является альтернативой тесту Бенедикта. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт