Каша Semper Велинг овсяный с бананом и черносливом 435г с 8месяцев

Овсяный Вэллинг с бананом и черносливом разработан специально для детей с 8 месяцев. В этом возрасте малыши уже могут попробовать новые вкусы. Но очень важно, чтобы продукты были не только вкусными, но и полезными, помогали малышу правильно расти и развиваться!

В состав Вэллинга с бананом и черносливом входит сбалансированное сочетание пищевых волокон, пробиотика Lactobacillus reuteri и правильное соотношение жиров. Именно благодаря этому Вэллинг легко усваивается, положительно влияет на пищеварение малыша, помогает организму ребенка насытиться с пользой для здоровья. Состав Вэллинга, также, обогащен железом, которое необходимо для развития мозга ребенка, кальцием с витамином D для формирования костной ткани и йодом, который помогает маленькому организму правильно расти и развиваться. В Вэллинг не добавляется сахар, что помогает с самого раннего детства формировать привычку к правильному питанию.

Вэллинг Semper обладает мягким сливочным вкусом благодаря входящим в его состав натуральным сливкам. Этот продукт прекрасно подойдет в качестве утреннего кормления для длительного насыщения и активного дня или вечернего — для спокойного, крепкого сна без пробуждения.

Преимущества:

• Нежная консистенция и приятный натуральный вкус.
• Длительное насыщение.
• Обогащен Йодом, Кальцием, Витамином D и Железом.
• Из свежего молока и отборных злаков.
• Без сахара.
• С пробиотиком.

Состав: обезжиренное молоко, сухая деминерализованная молочная сыворотка, овсяная мука, цельнозерновая пшеничная мука, пшеничный крахмал, сливки, ржаная мука, рапсовое масло, подсолнечное масло, минеральные вещества (кальций, железо, цинк, йод), витамины (A, D, Е, С, тиамин, ниацин, В6, фолиевая кислота, В12, пантотеновая кислота), сухие дрожжи.

Cпособ употребления: Инструкции по приготовлению: Используйте только чистую посуду.

• Вскипятите необходимое количество воды, руководствуясь таблицей приготовления, охладите ее до 37°С.
• Налейте воду в бутылочку или поильник.
• Смешайте сухой продукт с водой до получения однородной массы.
• Проверьте температуру, капнув смесь на внутреннюю сторону запястья.

Можно подавать в бутылочке, поильнике или с ложки.

Таблица приготовления: 100мл воды + 2,25 ст.л. = 110 мо готового Вэллинга.

Условия хранения: Хранить в сухом темном месте при температуре 5 — 25 °С и относительной влажности воздуха не более 75%. После вскрытия упаковки, продукт хранить не более 1 месяца плотно закрытым в сухом и темном месте при комнатной температуре.

Срок хранения: 15 мес.

Овсяный вэллинг с бананом и черносливом

• обладает эффектом длительного насыщения
• из свежего молока и отборных злаков
• обогащён йодом, кальцием, витамином D и железом
• без сахара

Овсяный вэллинг

с бананом и черносливом

О продукте:

Этот продукт прекрасно подойдёт в качестве утреннего кормления для длительного насыщения и активного дня малыша или для вечернего кормления и спокойного, крепкого сна без пробуждения. Овсяный вэллинг с бананом и черносливом разработан специально для детей с 8-ми месяцев. В этом возрасте малыши уже могут попробовать новые вкусы. Очень важно, чтобы продукты были не только вкусными, но и полезными, помогали малышу правильно расти и развиваться. В состав вэллинга с бананом и черносливом входит сбалансированное сочетание пищевых волокон, пробиотика Lactobacillus reuteri и правильное соотношение жиров. Именно благодаря этому вэллинг легко усваивается, положительно влияет на пищеварение малыша, помогает организму ребёнка насытиться с пользой для здоровья. Вэллинг обогащён железом, которое необходимо для развития мозга ребенка, кальцием с витамином D для формирования костной ткани и йодом. В вэллинг не добавляется сахар, что помогает с самого раннего детства формировать привычку к правильному питанию. Продукт обладает мягким сливочным вкусом, благодаря входящим в его состав натуральным сливкам.

1 порция

100 мл воды + 16 гр сухой смеси

Инструкция по приготовлению вэллинга носит рекомендательный характер. В зависимости от индивидуальных особенностей ребенка вэллинг можно делать
более жидким или густым.

Состав:

• овсяная мука
• сыворотка
• обезжиренное молоко
• сухая деминерализованная молочная сыворотка
• просеянная овсяная мука
• банановые хлопья
• сливки
• низкоэруковое рапсовое масло
• подсолнечное масло
• хлопья чернослива (чернослив, кукурузная мука)
• минеральные вещества (кальций, железо, йод)
• витамины (A, D, Е, С, В1, ниацин, В6, фолиевая кислота, В12, пантотеновая кислота, цинк)

овсяная мука
сыворотка
обезжиренное молоко
сухая деминерализованная молочная сыворотка
просеянная овсяная мука
банановые хлопья
сливки
низкоэруковое рапсовое масло
подсолнечное масло
хлопья чернослива (чернослив, кукурузная мука)
минеральные вещества (кальций, железо, йод)
витамины (A, D, Е, С, В1, ниацин, В6, фолиевая кислота, В12, пантотеновая кислота, цинк)

Другие продукты для вашего малыша:

Каша молочная Semper Вэллинг овсяный с фруктами и ягодами, 120 г: описание + цена в аптеках

Описание

Этот молочный продукт с овсяной мукой прекрасно подойдет ребенку с утра для длительного насыщения или вечером для спокойного крепкого сна. Имеет нежный сливочный вкус за счет натуральных сливок. Без добавления сахара, натуральную сладость продукту придает свежее молоко и злаки. Фрукты и ягоды увеличивают питательную ценность и знакомят ребенка с новыми вкусами.

Мягкую упаковку удобно взять с собой, она не тяжелая и не разобьётся, поэтому малыш сможет есть из неё самостоятельно и не пачкаться.

Semper является неоспоримым лидером в детском питании на своей родине в Швеции. История натурального и премиального детского питания Semper насчитывает уже почти 80 лет. Semper предлагает широкий выбор экологически чистых продуктов, гарантируя высокое качество и пользу всех ингредиентов и рецептур.

Злаки, входящие в состав продуктов Semper, вызревают на чистейших полях в долинах Швеции. Близость к Полярному кругу, большое количество длинных световых дней и холодный климат позволяют медленнее вызревать зерну, накапливая больше полезных веществ и микроэлементов. И только специально отобранное сырьё, отвечающее требованиям к детскому питанию, входит в состав продуктов Semper. Согласно статистике, всего лишь 6% зерна от общего урожая попадает в продукцию Semper.

Молоко, используемое в продуктах Semper, только высочайшего качества, которое в свежем виде поставляется на завод с молочных ферм Швеции, а это означает, что оно подвергается меньшим процессам переработки, что позволяет сохранить его натуральный вкус. Именно благодаря качеству шведского молока продукты Semper обладают удивительно нежным натуральным вкусом.

Сливки (животные жиры) содержат большое количество незаменимых функциональных липидов, которые являются строительным материалом клеточных мембран и играют ключевую роль в развитии иммунитета и головного мозга.

Растительные масла (растительные жиры) отвечают потребностям ребёнка в незаменимых жирных кислотах, которые выполняют функцию сигнальных молекул в целом ряде биологически важных процессов.

Особенности:

• из отборных шведских злаков;
• из свежего молока с добавлением натуральных сливок;
• без добавления сахара и соли;
• обогащен витаминами и минералами;
• не содержит пальмовое масло.

Состав

Деминерализованная молочная сыворотка, молоко (жирность ˂0,1%), вода, овсяная мука, сливки, пюре из банана 2,5%, пюре из клубники 1,5%, рапсовое масло, кукурузный крахмал, сывороточный белок (из молока), пюре из малины 0,5%, подсолнечное масло, минеральные вещества (калий, кальций, магний, железо, цинк, йод), витамины (А, D, E, C, тиамин, ниацин, B6, фолиевая кислота, В12, пантотеновая кислота), регуляторы кислотности (фосфат натрия, цитрат натрия).

В 100 г продукта содержится:

• белки — 2,4 г;
• пищевые волокна — 0,6 г;
• углеводы — 8,8 г;
• жиры — 3,4 г;
• соль — 0,13 г;
• витамин А — 61,2 мкг;
• витамин D — 1,1 мкг;
• витамин Е — 1,2 мг;
• витамин С — 14 мг;
• витамин В1 — 0,12 мг;
• витамин В2 — 0,12 мг;
• ниацин — 1 мг;
• витамин В6 — 0,07 мг;
• фолиева кислота — 7,8 мкг;
• витамин В12 — 0,18 мг;
• пантотеновая кислота — 0,43 мг;
• натрий — 50 мг;
• калий — 100 мг;
• хлорид — 45 мг;
• кальций — 90 мг;
• фосфор — 70 мг;
• магний — 10,4 мг;
• железо — 1,3 мг;
• цинк — 1 мг;
• йод — 16 мкг.

Энергетическая ценность — 321 кДж/ 100 г.

Калорийность — 77 ккал/ 100 г.

Способ применения

Готов к употреблению. Рекомендовано начинать с 0,5 чайной ложки 1 раз в день, постепенно увеличивая объем в соответствии с возрастом. Не разогревать упаковку в микроволновой печи.

Внимание!

Не давайте ребенку крышечку упаковки и держите ее подальше от ребенка. Не оставляйте ребенка без присмотра во время кормления.

Условия хранения

Закрытую упаковку хранить в сухом месте, при температуре 5-25°C, открытую — в холодильнике с закрытой крышкой не более 24 часов.

Описание продукта Каша молочная Semper Вэллинг овсяный с фруктами и ягодами, 120 г представлено исключительно с ознакомительной целью и не является поводом для самолечения.

Знаете ли Вы, что такое Вэллинг? Искусственное вскармливание

Когда ребенку исполняется четыре месяца, в его развитии начинается интересный и важный этап, который называется периодом введения прикорма. Прикорм — это обобщенное понятие, которое касается более густых и более калорийных блюд, то есть продуктов, заметно отличающихся по своей консистенции и по составу от грудного молока или молочных смесей.

Важно подходить к каждому ребенку индивидуально. Например, если ребенок слишком быстро набирает вес, если у него отмечается склонность к запорам, то лучше начинать прикорм с овощных пюре, которые богаты растительной клетчаткой. Если же малыш недостаточно хорошо прибавляет в весе или имеет неустойчивый стул, то в качестве первого прикорма ему подойдет каша.

Злаковые каши служат источником углеводов, растительных белков, витаминов группы В и пищевых волокон. Очень полезны именно молочные каши, так как в них присутствует оптимальное соотношение белков животного и растительного происхождения. Поэтому их постоянное присутствие в рационе малыша просто необходимо. Впрочем, для детей с аллергией на белки коровьего молока могут понадобиться безмолочные каши, с помощью которых удается сформировать безмолочную диету.

Кашу можно приготовить и в домашних условиях из крупы, купленной в магазине, проведя некоторое время у плиты. Но существенная разница заключается в том, что используя готовые детские каши промышленного производства, вы точно знаете, что в них содержатся столь нужные для развития ребенка витамины и минеральные вещества, за счет которых покрывается определенная часть суточной потребности ребенка в этих важнейших элементах питания. Очень важно и то обстоятельство, что все компоненты для детских каш проходят тщательную проверку на отсутствие вредных примесей (пестициды, соли тяжелых металлов), что не всегда можно сказать о крупах «общего употребления».

Вроде бы, о кашах известно практически все. И все же время от времени даже в этой области детского питания появляется что-то новенькое.

Не удивляйтесь, если во время очередного посещения магазина, где вы покупаете детское питание для своего малыша, продавец предложит вам попробовать новый, еще недостаточно известный в России продукт под названием Вэллинг. Изучив этикетку, вы скажете: да ведь это каша! Действительно, по своему составу Вэллинг, который содержит молоко и различные виды круп, больше всего похож на кашу. И, тем не менее, Вэллинг заметно отличается от привычных нам продуктов под этим названием. Это традиционная скандинавская еда, которая известна со времен викингов. Раньше в каждом шведском дворе был колокол, который сзывал все семейство подкрепиться вкусным Вэллингом. Так что же такое Вэллинг?

Вэллинг — это жидкая питательная молочная кашка, напоминающая знакомый нам с детства молочный коктейль, с приятным натуральным вкусом. Благодаря своей жидкой консистенции и приятному природному вкусу Вэллинг занимает промежуточное место между обычными молочными смесями и типичными густыми кашами. Его пьют из чашечки, и только самым маленьким дают из бутылочки. Это поможет им плавно и естественно перейти от жидкой пищи (молочные смеси) к более густой и калорийной.

Казалось бы, в любую кашу можно добавить побольше воды — вот и получится жидкая кашка. Но в том то и дело, что жидкая консистенция готового к употреблению Вэллинга, не означает снижения содержания пищевых веществ, по сравнению с густыми кашами. В каждой порции приготовленного Вэллинга содержится весь комплекс необходимых для развития ребенка пищевых веществ, в нужных количествах и правильном соотношении.

«Разбуди желудок мягко», — говорят шведы про Вэллинг. Утром чашка теплого Вэллинга послужит идеальным завтраком, а вечером поможет малышу заснуть и крепко спать всю ночь. В ассортименте Сэмпер есть Кукурузный Вэллинг, не содержащий глютена (белка злаковых культур, который может вызывать аллергию у маленьких детей), Овсяный Вэллинг, Овсяно-пшеничный Вэллинг и Мультизлаковый Вэллинг. Вэллинги приготовлены без добавления сахара и соли, обогащены железом и йодом, содержат все необходимые малышам витамины и минеральные вещества. Они не содержат искусственных ароматизаторов и добавок. А пищевые волокна, содержащиеся в Вэллингах, улучшают работу кишечника, что очень важно для детей.

У Вэллингов есть еще один маленький секрет — их можно кушать и маленьким и взрослым. А если Вы собираетесь отправиться со своим малышом в поездку или путешествие, Вам обязательно пригодятся Вэллинги. Нужно просто захватить с собой термос с горячей водой и чашечку с ложкой, а на приготовление теплого и сытного Вэллинга уйдет всего несколько минут. В любом возрасте чашка теплого Вэллинга — это дополнительный источник энергии и здоровья.

Дополнительную информацию о продуктах детского питания фирмы Сэмпер (Швеция) вы можете получить по телефону «горячей линии» (095) 135 94 23 с понедельника по пятницу с 10 до 18 часов.

Российско-шведский центр по здоровому питанию детей.

Информация на сайте имеет справочный характер и не является рекомендацией для самостоятельной постановки диагноза и назначения лечения. По медицинским вопросам обязательно проконсультируйтесь с врачом.

https://www.7ya.ru/Bauskas iela 58A — 7RīgaLV-1004

30.10.2001

Обновлено 18.07.2016

404 — страница не найдена

404 — страница не найдена

Разделы

Проверка контрагентов

Сводные данные о юридических лицах и индивидуальных предпринимателях

Санитарно-эпидемиологические документы

Документы, реестры, СанПин, преимущественно из источников Роспотребнадзора

Обращение с отходами

ФККО, ГРОРО, ЕГИС УОИТ, лицензии, нормативная документация, преимущественно из источников Росприроднадзора

Раздел в разработке

Электронный кадастр недвижимости

Сведения о земельных участках, объектах капитального строительства, ЕГРН, Росреестр

Раздел в разработке

Закупки

Госзакупки по 44-ФЗ, 223-ФЗ, коммерческие конкурсы. Поиск и участие, результаты

Информация с сайта Е-ДОСЬЕ (e-ecolog.ru)
Отсканируй чтобы перейти на страницу-источник

Распечатано с сайта Е-ДОСЬЕ (e-ecolog.ru)

Знаете ли Вы, что такое Вэллинг? Это скандинавская (шведская) жидкая каша

Утром чашка теплого Вэллинга послужит идеальным завтраком, а вечером поможет малышу заснуть и крепко спать всю ночь. В ассортименте Сэмпер есть Кукурузный Вэллинг, не содержащий глютена (белка злаковых культур, который может вызывать аллергию у маленьких детей), Овсяный Вэллинг, Овсяно-пшеничный Вэллинги Мультизлаковый Вэллинг. Вэллинги приготовлены без добавления сахара и соли, обогащены железом и йодом, содержат все необходимые малышам витамины и минеральные вещества. Они не содержат искусственных ароматизаторов и добавок. А пищевые волокна, содержащиеся в Вэллингах, улучшают работу кишечника, что очень важно для детей.

И с 7 месяцев можно пробовать давать малышу детский травяной чаек (ромашка, мята, мелиса — 1 ч. ложка сухой травы на 1 стакан кипятка, дать настоятся), а после того, как ребенок попробует чернослив, можно варить компоты из сухофруктов (яблоки, чернослив), курагу можно добавлять после года.
Н О !!!!!—- покупные детские чаи, если в составе у них есть декстроза и сахароза — не надо давать! Есть травяные чаи без добавок (например, «Бабушкино лукошко»)

8 месяцев Мясо (индейка, кролик, телятина, говядина, курица, ягненок), желток, картофель.

Картофель вводится позже других овощей, так как он считается высокоаллергенным продуктом. Вводят его, начиная с 5 граммов, в конце недели необходимо достигнуть объема не 150 грамм, а лишь 50 грамм. Картофель не должен составлять больше трети объема всего овощного пюре.

Термическая обработка яйца (куриного, перепелиного) обязательно длительная, лучше в течение 10 минут варить яйцо на медленном огне после закипания.

Желток можно давать перепелиный или куриный. Предпочтительнее перепелиный, так как он реже вызывает аллергические реакции. Желток дается 2 раза в неделю. Первый раз дается несколько крупинок. Второй раз – половинку перепелиного желтка или ¼ куриного. На следующей неделе можно дать один перепелиный или половину куриного желтка. В таком количестве и продолжать давать 2 раза в неделю. Желток дается в утреннее кормление. Его проще растирать с грудным молоком или добавлять в кашу.

Первые виды мясного пюре, которые даются ребенку – индейка и кролик, они считаются наименее аллергенными видами мяса. Затем можно дать телятину, ближе к 9 месяцам – говядину, курицу и ягненка. Свинину лучше не давать до 1-1,5 лет. Вводится мясо в обед с овощами, массой 5 грамм. В возрасте 8-9 месяцев суточная норма потребления мяса не более 50 грамм (в готовом отваренном виде). К году нужно давать около 100 грамм мяса. Если ребенок не хочет мясное пюре в чистом виде, его можно смешивать с овощами.

Перепелиное мясо считается диетическим, поэтому его можно вводить с 8 месяцев.

Фрикадельки — Делается фарш без каких-либо добавок, из него формируются небольшие шарики — фрикадельки. Шарики сразу отвариваете в кипящей воде 4-5 минут. Затем замораживаете. По необходимости достаете их из морозилки, отвариваете их на пару вместе с овощами (т.е. доводится мясо совсем до готового состояния). Измельчаете блендером с бульоном, как и овощи. Такие шарики из фарша не будут слипаться при замораживании. Измельчать блендером не фарш, а кусок вареного мяса трудно и неэффективно, пюре получается клейким, а фрикадельки измельчаются легко.

Супчики можно варить после введения мяса, на легком мясном бульоне овощные супы с теми овощами, которые малыш кушает. Супы варятся малышу отдельно, без поджаривания овощей, соли, специй, ему не подходят те, что привыкли кушать мы. Если это куриный суп, то кожа с курицы снимается перед варкой.
Зелень (укроп, петрушку) можно добавлять с 8 месяцев в конце приготовления блюда.

Открытая баночкадетского питания может храниться в холодильнике сутки — доесть ее на следующий день. Подогреть после холодильника мясное или овощное пюре — поставить баночку в кипяток на 10-15 минут (микроволновкой пользоваться не рекомендуется).

9 месяцев Творог, кефир (или йогурт – это тот же кефир, но немного другая закваска) – можно давать хоть каждый день в указанных для ежедневного приема количествах.

После 8-9 мес можно и шиповник иногда заваривать, но не переусердствуйте, это не водичка и пить его сколько угодно и каждый день не следует, 1-2 раза в неделю.

Кефирчик нормализует работу ЖКТ, содержит кальций и пр., улучшает аппетит. Творожок особенно полезен детям с недобором веса.

Творог и кефир вводятся очень медленно! Чем медленнее, тем лучше.

Первым дается творог. Естественно, надо давать не тот творог, что продается в пачках, зернистый или с добавками! Для ребенка нужно приобретать детский творог — Агуша, Тема. Он должен быть без всяких добавок, сахара и фруктов!

Первый раз дается 1 чайная ложка. С каждым днем дается на 1 чайную ложку больше, пока порция не составит 25-30 грамм. Для ребенка в возрасте 9-10 месяцев этого вполне достаточно.

К 1 году порция творога может быть увеличена до 50 грамм.

Детский творожок приготовить не сложно:

1 способ. Требуется 0,5 стакана детского кефирчика и 1 стакан детского молока. Перемешиваем и ставим на огонь, периодически мешая. Когда масса свернется, процеживаем через марлю. Такой творожок дети любят, поскольку он не такой кислый, как сделанный на чистом кефире.

2 способ. В 100 мл молока положите 1 ч. ложку сметаны, тщательно перемешайте, подогревайте на медленном огне, но не доводите до кипения, постепенно будет отделяться творог и сыворотка. Полученную массу процедите через несколько слоев марли. Хранить не более суток в холодильнике.

Кисломолочные продукты дают вечером, за пару часов до ужина. Кефир первый раз дается в объеме 5-10 мл. Конечно, он тоже должен быть детским и без всяких добавок, фруктовых наполнителей и сахара. Постепенно увеличивается объем до 100-150 мл. К году можно давать 200 мл кефира. Не все дети любят кефир, некоторые могут отказываться его пить. Это не повод «знакомить» малыша с сахаром, добавляя его в кефир. Лучше предложить ребенку кефир через пару недель или через месяц. Не страшно, если он какое-то время не будет его пить. Есть дети, которые вообще его никогда не пьют, при этом растут и развиваются не хуже других.

Приготовить кефирчик в домашних условиях: взять молоко (можно и домашнее, цельное молоко), закипятить и добавить ложку магазинной сметаны, оставить в теплом месте на сутки. Получается консистенция кефира правда не сильно густая, но для ребенка — нормально.

Как сделать самим:

— творожок:

1. Можно использовать и пастеризованное, и сырое цельное молоко (последнее следует прокипятить) (с малым сроком годности 5-10 дней). Ультрапастеризованное молоко лучше не использовать.

2. Готовим закваску: в 100 мл молока комнатной температуры добавить однодневный детский кефир 1 ст. ложку, настаивать 12 часов, хранить закваску в холодильнике.

3. Непосредственно кефир: в теплое молоко (200 мл.) добавить 100–150 мл закваски.

(PDF) Независимая активация акклиматизации к холоду при низкой температуре и коротком фотопериоде у гибридной осины

4 ° C. Буфер удаляли, и Amberlite XAD-7 дважды промывали 2

мл 1% (об. / Об.) Уксусной кислоты. Смолу сушили в Speed ​​Vac, и ABA

элюировали из Amberlite XAD-7 дважды 2 мл дихлорметана при встряхивании

в течение 30 минут при 4 ° C. Дихлорметан выпаривали в Speed-Vac

, образцы метилировали и анализировали с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии

с использованием мониторинга выбранных ионов.

Устойчивость к замерзанию стебля и листьев

Тесты на замерзание проводились с сегментами стебля, включая почки; Каждый тест

температуры состоял из двух параллелей с пятью сегментами стержня. Стебли были протестированы на замерзание

в контролируемых условиях с использованием скорости замораживания 3 ° Ch

1

до 17 ° C и далее при 10 ° Ch

⫺1

. Образцы удаляли с интервалом

при 4 ° C. После оттаивания в течение ночи при 6 ° C образцы инкубировали

при 18 ° C между влажными бумажными полотенцами, и повреждение оценивали визуально.

Устойчивость к замерзанию листьев и соответствующих стеблей была измерена в контролируемой ванне для замораживания

, а повреждение было определено с помощью метода утечки электролита —

возраста, как описано в Lång et al. (1989). Образец листа состоял из

листового диска диаметром 1,5 см, вырезанного с обеих сторон средней жилки из двух верхних полностью выросших листьев

. Морозостойкость стебля измеряли

на 10-сантиметровой части стебля, расположенной на 3 см ниже верхушечной почки.Образцы

были завернуты в Miracloth и помещены в пробирки в ванну с контролируемым замораживанием

. После начала образования льда при 1,5 ° C температура ванны составила

, понизилась на 2 ° Ch

À1

. Образцы отбирали с интервалами 2 ° C и давали

оттаять во льду при 4 ° C в течение ночи. Электропроводность (R0) измеряли после

встряхивания (200 об / мин) образцов в 40 мл деионизированной воды для температуры в помещении

. Для измерения общей проводимости (R1) образцы были убиты путем кипячения

в течение 30 минут, а после охлаждения до комнатной температуры образцы

были повторно экстрагированы встряхиванием в течение 2 при 200 об / мин в исходном растворе. Утечка Ion

рассчитывалась как R0 / R1 100%. Установки с утечкой 50%

(LT

50

) или более от общего количества растворенных веществ считались мертвыми.

Анализ выделения и гибридизации

РНК

Общую РНК из почек, стебля и верхушки очищали, как описано в

Verwoerd et al. (1989). Образцы замораживали в жидком N

2

, гомогенизировали до тонкого порошка

в ступке с помощью пестика и экстрагировали в 500

␮

Lofhot (80 ° C)

фенольный буфер (1: 1 фенол). : [100 мМ LiCl, 100 мМ Трис, pH 8.0, 10 мм EDTA,

и 1% (мас. / Об.) SDS]) встряхиванием в течение 60 с. Образцы экстрагировали дважды

250

л смеси хлороформ: изоамиловый спирт 1:24, и РНК осаждали

2 м LiCl при 4 ° C. Полученный осадок растворяли в воде и осаждали этанолом

. Концентрацию РНК измеряли с помощью фотометра спектро-

, и 10

г общей РНК денатурировали и разделяли на формальдегид-агарозном геле

(Sambrook et al., 1989). После капиллярного переноса

на положительно заряженную нейлоновую мембрану (Roche Molecular Biochemicals,

Mannheim, Германия) РНК иммобилизовали на мембране путем запекания.

PstI-фрагмент 800 п.н. клона кДНК pcC6-19 DHN из Cra-

terostigma plantagineum Hochst., Соответствующий гену DSP16 (Piat-

kowski et al., 1990), был использован в качестве зонда. в северном блоттинге. Фрагмент

содержал последовательности, соответствующие N-концевой консенсусной последовательности

DEYGNP, повтор Ser и две копии предполагаемой амфипатической

␣

-спирали

, образующей домен KIKELPGH (Piatkowski et al., 1990). Зонд был помечен

[

␣

—

32

P] dCTP с использованием набора для маркировки Ready-To-Go (Amersham Pharma

—

cia Biotech, Piscataway, NJ) и очищен на ProbeQuant G-50 Micro

Колонки (Amersham Pharmacia Biotech). Мембраны были гибридизованы

в течение ночи при 55 ° C в модифицированном фосфатном буфере (Church and Gilbert, 1984)

, содержащем 7% (мас. / Об.) SDS и 500 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 7.2.

Промывку мембран после гибридизации проводили при 55 ° C.

согласно Чёрчу и Гилберту (1984). Сигналы на фильтре были количественно определены сканером

BAS 1500 (Fuji Photo Film, Tokyo), и рибосомный ген 18S был

, использованный в качестве гетерологичного зонда для оценки различий в загрузке образцов.

Анализ белка

Образцы почек, коры или верхушек измельчали ​​в пробирках Эппендорфа с растягивающим буфером ex-

(50 мм Трис, основа, 0,1% [мас. / Об.] SDS и 200 мм DTT) и центрифугировали

. при 10000 г дважды в течение 10 мин.Содержание белка измеряли с помощью процедуры микротитрования

для микротитровальных планшетов (Bio-Rad, Hercules, CA) в соответствии с инструкциями производителя

. Пятнадцать микрограммов белка вводили в буфер для загрузки Towbin и разделяли с помощью SDS-PAGE, как описано ранее,

(Welling et al., 1997). Были запущены два параллельных геля. Один был

, окрашенный 0,1% (мас. / Об.) Кумасси бриллиантовым синим R-250 в 40% (об. / Об.) Метаноле

и 10% (об. / Об.) Уксусной кислоте для обеспечения равной нагрузки на дорожку.Для иммуноблоттинга

белки из параллельных неокрашенных гелей подвергали электроблоттингу

на нитроцеллюлозных мембранах размером 0,45-

×

мкм (Micron Separations, Westborough,

MA), как описано ранее (Welling et al., 1997). Мембрану зондировали

в течение ночи в разведении 1: 1000 с поликлональным антителом, которое было повышено

против синтетического полипептида из клона pcC6-19 C. plantagineum

(Schneider et al., 1993), соответствующего гену DSP16 ( Piatkowski et al.,

1990).

Статистический анализ

Влияние продолжительности светового дня, линии и температуры на содержание ABA было

проанализировано с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Односторонний дисперсионный анализ ANOVA

был использован для проверки значительной разницы в содержании воды между

и

различными обработками внутри линий.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим доктора Доротею Бартельс (Max-Planc-Institut, Кельн, Германия) за

ее подарок клона pcC6-19 и соответствующего антитела.Мы благодарим доктора

Пекка Хейно и доктора Маркку Аалто (Университет Хельсинки) за полезные замечания к рукописи

.

Поступила 5 февраля 2002 г .; возвращен на доработку 27 февраля 2002 г .; принята

26 апреля 2002 г.

ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

Artlip TS, Callahan AM, Basset CL, Wisniewski ME (1997) Сезонная экс-

Давление гена дегидрина у родственных лиственных и вечнозеленых генов-

типов персика (Prunus persica [L.] Batch.). Plant Mol Biol 33: 61–70

Кэмпбелл С.А., Клоуз Т.Дж. (1997) Дегидрины: гены, белки и ассоциации

с фенотипическими признаками. New Phytol 137: 61–74

Chandler PM, Robertson M (1994) Экспрессия генов, регулируемая абсцизной кислотой

, и ее связь с устойчивостью к стрессу. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol

Biol 45: 113–141

Chen HH, Li PH, Brenner ML (1983) Участие абсцизовой кислоты в картофеле

акклиматизация к холоду. Plant Physiol 71: 362–365

Christersson L (1978) Влияние фотопериода и температуры на развитие морозостойкости проростков Pinus silvestris и Picea

abies.Physiol Plant 44: 288–294

Church GM, Gilbert W (1984) Геномное секвенирование. Proc Natl Acad Sci

USA 81: 1991–1995

Danyluk J, Perron A, Houde M, Limin A, Fowler B, Benhamou N, Sarhan

F (1998) Накопление кислого дегидрина вблизи плазмы

Мембрана

при холодовой акклиматизации пшеницы. Растительная клетка 10: 623–638

Eriksson ME (2000) Роль фитохрома А и гиббереллинов в росте

в условиях длинного и короткого дня изучает гибридную осину.Кандидатская диссертация.

Шведский университет сельскохозяйственных наук, Умео

Фауст М., Лю Д., Миллард М.М., Штутт Г.В. (1991) Связанная и свободная вода в

спящих почках яблони: теория эндодормальности. HortScience 26:

887–890

Fuchigami LH, Weiser CJ, Evert DR (1971) Индукция холодовой акклиматизации у

Cornus stolonifera Michx. Plant Physiol 47: 98–103

Guy C, Haskell D, Neven L, Klein P, Smelser C (1992) Hydration-state —

Реагирующие на

белки связывают в шпинате стрессы от холода и засухи.Planta 188:

265–270

Heino P, Sandman G, Lång V, Nordin K, Palva ET (1990) Дефицит абсцизовой кислоты

предотвращает развитие морозостойкости у Arabidopsis

thaliana (L.) Heynh. Theor Appl Genet 79: 801–806

Ingram J, Bartels D (1996) Молекулярные основы устойчивости к дегидратации у

растений. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 47: 377–403

Исмаил А.М., Холл А.Е., Клоуз Т.Дж. (1999) Очистка и частичная характеристика дегидрина

, участвующего в толерантности к холоду во время прорастания проростков

рода вигнового гороха.Plant Physiol 120: 237–244

Junttila O (1976) Прекращение апикального роста и опадание кончиков побегов у Salix.

Physiol Plant 38: 278–286

Junttila O, Kaurin Å (1990) Экологический контроль акклиматизации к холоду в

Salix pentandra. Scand J For Res 5: 195–204

Welling et al.

1640 Plant Physiol. Vol. 129, 2002

Веллинг — определение и значение

Человек идей, касающийся Джо Веллинга

Человек идей, касающийся Джо Веллинга

«Человек идей о Джо Веллинге» — это глава в «Уайнсбурге, Огайо» Шервуда Андерсона.

Предыдущая глава — «Благочестие, сказка в четырех частях, IV Террор» о Дэвиде Харди.

Следующая глава — «Приключения», посвященная Алисе Хиндман.

Он жил со своей матерью, серой, молчаливой женщиной со своеобразным пепельным цветом лица. Дом, в котором они жили, стоял в небольшой рощице за тем местом, где главная улица Уайнсбурга пересекала Уайн-Крик. Его звали Джо Веллинг, и его отец был человеком определенного достоинства в обществе, юристом и членом законодательного собрания штата в Колумбусе. Сам Джо был маленьким телом и по характеру не отличался от всех остальных в городе. Он был подобен крошечному вулкану, который несколько дней молчит, а затем внезапно извергает пламя.Нет, он не был таким — он был похож на человека, подверженного припадкам, который ходит среди своих собратьев, внушая страх, потому что припадок может внезапно случиться с ним и унести его в странное сверхъестественное физическое состояние, в котором его глаза закатываются, а руки и ноги подергиваются. Он был таким, только визит, обрушившийся на Джо Веллинга, был умственным, а не физическим. Его одолевали идеи, и в муках одна из его идей была неконтролируемой. Слова катились и вылетали из его рта. На его губах появилась своеобразная улыбка.Края его зубов, покрытые золотом, блестели на свету. Набросившись на прохожего, он начал говорить. Для прохожего выхода не было. Возбужденный человек вдохнул ему в лицо, заглянул ему в глаза, стукнул по груди дрожащим указательным пальцем, требовал, принуждал внимания.

В те дни Standard Oil Company не доставляла масло потребителю в больших вагонах и грузовиках, как сейчас, а доставляла его в розничные бакалейные лавки, хозяйственные магазины и т.п.Джо был агентом Standard Oil в Уайнсбурге и в нескольких городах вдоль железной дороги, которая проходила через Уайнсбург. Он собирал счета, делал заказы и делал другие вещи. Его отец, законодатель, обеспечил ему работу.

В магазины Уайнсбурга и обратно заходил Джо Веллинг — молчаливый, чрезмерно вежливый, сосредоточенный на своем деле. Мужчины смотрели на него глазами, в которых скрывалось веселье, перемежающееся тревогой. Они ждали, когда он вырвется наружу, готовясь к бегству. Хотя приступы, которые случились с ним, были достаточно безобидными, от них нельзя было отмахнуться.Они были потрясающими. Оседлав идею, Джо одержал верх. Его личность стала гигантской. Оно перекрыло человека, с которым он разговаривал, унесло его, унесло все прочь, всех, кто стоял в пределах слышимости его голоса.

В аптеке Сильвестра Уэста стояли четверо мужчин, которые говорили о скачках. Жеребец Уэсли Мойера, Тони Тип, должен был участвовать в гонках на июньском съезде в Тиффине, штат Огайо, и ходили слухи, что он встретится с самым жестким соревнованием в своей карьере. Говорили, что там будет сам Поп Гирс, великий гонщик.Сомнение в успехе Тони Типа тяжело висело в воздухе Уайнсбурга.

В аптеку вошел Джо Веллинг, резко отодвигая сетку двери. Со странным поглощенным светом в глазах он набросился на Эда Томаса, который знал Поп Гирса и чье мнение о шансах Тони Типа стоило учесть.

«Вода в Вайн-Крик», — воскликнул Джо Веллинг с видом Фидиппида, принося весть о победе греков в битве при Марафоне.Его палец ударил татуировку на широкой груди Эда Томаса. «По мосту Trunion он находится в пределах одиннадцати с половиной дюймов от пола», — продолжил он, и слова прозвучали быстро и с легким свистом сквозь зубы. На лицах четверых появилось выражение беспомощного раздражения.

«Мои факты верны. Положитесь на это. Я пошел в хозяйственный магазин Синнингса и получил правило. Затем я вернулся и измерил. Я не мог поверить своим глазам. Дождя не было уже десять дней. .Сначала я не знала, что думать. Мысли пронеслись в голове. Я думал о подземных ходах и источниках. Мой разум погрузился в землю, копаясь. Я сел на пол моста и потер голову. В небе не было ни облачка, ни одного. Выходи на улицу, и ты увидишь. Облака не было. Теперь облака нет. Да, было облако. Я не хочу скрывать никаких фактов. На западе, у самого горизонта, было облако, не больше человеческой руки.

«Не то чтобы я думаю, что это имеет к этому какое-то отношение. Вот оно, видите ли. Вы понимаете, как я был озадачен.

«Тогда мне в голову пришла идея. Я засмеялся. Вы тоже будете смеяться. Конечно, в округе Медина лил дождь. Это интересно, а? Если бы у нас не было поездов, почты или телеграфа, мы бы это знали. в округе Медина шел дождь. Вот откуда родом Вайн-Крик. Все это знают. Маленький старый Вайн-Крик принес нам новости. Это интересно. Я засмеялся.Я думал, что скажу тебе — это интересно, а? »

Джо Веллинг повернулся и вышел в дверь. Вынув из кармана книгу, он остановился и провел пальцем по одной из страниц. Он снова был поглощен своими обязанностями агента Standard Oil Company. «В бакалейной лавке Херна заканчивается уголь. Я их увижу», — пробормотал он, спеша по улице и вежливо кланяясь направо и налево прохожим.

Когда Джордж Уиллард пошел работать на Winesburg Eagle, его осадил Джо Веллинг.Джо завидовал мальчику. Ему казалось, что природа задумала его стать репортером в газете. «Это то, что я должен делать, в этом нет никаких сомнений», — заявил он, останавливая Джорджа Уилларда на тротуаре перед магазином кормов Догерти. Его глаза заблестели, а указательный палец задрожал. «Конечно, я зарабатываю больше денег в Standard Oil Company, и я только говорю вам», — добавил он. «Я ничего не имею против тебя, но я должен занять твое место. Я мог выполнять работу в странные моменты. То и дело я бегал, выясняя то, чего ты никогда не увидишь.»

Взволнованный Джо Веллинг прижал молодого репортера к входу в кормовую лавку. Казалось, он задумался, закатил глаза и провел тонкой нервной рукой по волосам. Улыбка расплылась по его лицу, и его золотые зубы блестели. «Возьми записную книжку», — скомандовал он. «У тебя в кармане маленький блокнот, правда? Я знал, что ты это сделал. Ну, ты поставил это. Я подумал об этом на днях. Давайте возьмем гниение. Что такое гниение?Он сжигает древесину и другие предметы. Вы никогда об этом не думали? Конечно нет. Этот тротуар и этот магазин кормов, деревья там на улице — все они в огне. Они горят. Вы видите, что распад происходит всегда. Это не останавливается. Вода и краска не могут остановить это. Если вещь железная, то что? Видишь ли, он ржавеет. Это тоже огонь. Мир горит. Так начинайте свои работы на бумаге. Просто скажите большими буквами: «Мир в огне». Это заставит их взглянуть вверх. Они скажут, что ты умный.Мне все равно. Я тебе не завидую. Я просто выхватил эту идею из воздуха. Я бы издал газету. Вы должны это признать ».

Быстро повернувшись, Джо Веллинг быстро пошел прочь. Сделав несколько шагов, он остановился и оглянулся. «Я буду придерживаться тебя», — сказал он. «Я собираюсь сделать из тебя обычный хаммер. Я должен сам открыть газету, это то, что я должен сделать. Я был бы чудом. Все это знают».

Когда Джордж Уиллард был в течение года на «Уайнсбург Игл», с Джо Веллингом случилось четыре вещи.Его мать умерла, он переехал жить в Нью-Уиллард-Хаус, у него началась любовная связь, и он организовал Бейсбольный клуб Уайнсбурга.

Джо организовал бейсбольный клуб, потому что хотел быть тренером, и на этой должности он начал завоевывать уважение своих горожан. «Он чудо», — заявили они после того, как команда Джо выгнала команду из округа Медина. «Он заставляет всех работать вместе. Вы просто смотрите на него».

На бейсбольном поле у ​​первой базы стоял Джо Веллинг, все его тело дрожало от волнения.Все игроки невольно наблюдали за ним. Питчер соперника растерялся.

«Сейчас! Сейчас! Сейчас! Сейчас!» крикнул возбужденный мужчина. «Смотри на меня! Смотри на меня! Смотри на мои пальцы! Смотри на мои руки! Смотри на мои ноги! Смотри на мои глаза! Давайте работать вместе здесь! Смотри на меня! Во мне ты видишь все движения игры! Работай со мной! Работай со мной! Смотри на меня! Смотри на меня! Смотри на меня! »

Джо Веллинг вдохновил бегунов команды Вайнсбург на базах. Прежде чем они узнали, что с ними произошло, бегуны по базам наблюдали за этим человеком, отталкиваясь от баз, продвигаясь и отступая, удерживаемые как невидимая веревка. Игроки противоположной команды также наблюдали за Джо. Они были очарованы. Какое-то время они наблюдали, а затем, как будто пытаясь разрушить заклинание, которое на них нависало, начали дико метать мяч, и под череду яростных звериных криков тренера бегуны команды Уайнсбурга помчались домой.

Любовная интрига Джо Веллинга вывела город Уайнсбург из себя. Когда это началось, все перешептывались и покачали головой. Когда люди пытались рассмеяться, смех был натянутым и неестественным.Джо влюбился в Сару Кинг, худощавую женщину с грустным видом, которая жила со своим отцом и братом в кирпичном доме, который стоял напротив ворот, ведущих на кладбище Уайнсбург.

Два короля, отец Эдвард и сын Том, не пользовались популярностью в Уайнсбурге. Их называли гордыми и опасными. Они приехали в Уайнсбург откуда-то с юга и управляли сидровой фабрикой на Trunion Pike. Сообщалось, что Том Кинг убил человека до того, как приехал в Уайнсбург. Ему было двадцать семь лет, и он разъезжал по городу на сером пони.Кроме того, у него были длинные желтые усы, которые ниспадали ему на зубы, и он всегда держал в руке тяжелую, зловещего вида трость. Однажды он убил собаку палкой. Собака принадлежала Вин Поуси, торговцу обувью, и стояла на тротуаре, виляя хвостом. Том Кинг убил его одним ударом. Его арестовали и выплатили штраф в размере десяти долларов.

Старый Эдвард Кинг был невысокого роста, и, когда он проходил мимо, люди на улице смеялись странным невеселым смехом. Когда он смеялся, он почесал левый локоть правой рукой.Рукав пальто был почти изношен от привычки. Когда он шел по улице, нервно озираясь и смеясь, он казался более опасным, чем его безмолвный, свирепый сын.

Когда Сара Кинг начала выходить вечером с Джо Веллингом, люди в тревоге качали головами. Она была высокой и бледной, с темными кругами под глазами. Вместе пара выглядела смешно. Они гуляли под деревьями, и Джо разговаривал. Его страстные, нетерпеливые возгласы любви, исходящие из темноты у кладбищенской стены или из глубоких теней деревьев на холме, тянущемся к ярмарочной площади от пруда Waterworks, повторялись в магазинах. Мужчины стояли у бара в New Willard House, смеясь и обсуждая ухаживания Джо. После смеха наступила тишина. Бейсбольная команда Уайнсбурга под его руководством выигрывала игру за игрой, и город начал уважать его. Почувствовав трагедию, они ждали, нервно смеясь.

Поздно вечером в субботу в комнате Джо Веллинга в Нью-Уиллард-хаусе состоялась встреча Джо Веллинга и двух королей, ожидание которой привело город в замешательство.Джордж Уилард был свидетелем встречи. Произошло это таким образом:

Когда молодой репортер вошел в свою комнату после ужина, он увидел Тома Кинга и его отца, сидящих в полумраке в комнате Джо. Сын держал в руке тяжелую трость и сел у двери. Старый Эдвард Кинг нервно ходил, почесывая левый локоть правой рукой. В коридорах было пусто и тихо.

Джордж Уилард пошел в свою комнату и сел за свой стол.Он пытался писать, но его рука так дрожала, что он не мог держать перо. Еще он нервно ходил взад и вперед. Как и весь городок Уайнсбург, он был сбит с толку и не знал, что делать.

Было семь тридцать, и быстро темнело, когда Джо Веллинг прошел по платформе станции в сторону Нового Уиллард-хауса. В руках он держал пучок сорняков и трав. Несмотря на ужас, который заставил его дрожать, Джордж Уилард позабавился при виде маленькой подвижной фигурки, держащей траву и наполовину бегущей по платформе.

Дрожащий от страха и беспокойства молодой репортер прятался в коридоре за дверью комнаты, в которой Джо Веллинг разговаривал с двумя королями. Последовала ругань, нервное хихиканье старого Эдварда Кинга, а затем тишина. Раздался резкий и ясный голос Джо Веллинга. Джордж Уиллард засмеялся. Он понял. Как он сметал всех мужчин до него, так теперь Джо Веллинг сносил двух мужчин в комнате с их ног волной слов. Слушатель в зале в изумлении ходил взад и вперед.

В комнате Джо Веллинг не обратил внимания на ворчавшую угрозу Тома Кинга. Поглощенный идеей, он закрыл дверь и, зажег лампу, разложил на полу горсть сорняков и травы. «У меня здесь кое-что есть», — торжественно объявил он. «Я собирался рассказать об этом Джорджу Уилларду, пусть он сделает из этого листок для газеты. Я рад, что ты здесь. Я бы хотел, чтобы Сара тоже была здесь. Я собирался прийти к тебе домой и расскажу о некоторых моих идеях, они интересные.Сара не позволила мне. Она сказала, что мы поссоримся. Это глупо «.

Джо Веллинг начал объяснять, бегая вверх и вниз перед двумя недоумевающими мужчинами. «Не делай ошибки сейчас, — крикнул он. «Это что-то большое». Его голос был пронзительным от волнения. «Вы просто следите за мной, вам будет интересно. Я знаю, что вы это сделаете. Предположим, это — предположим, что вся пшеница, кукуруза, овес, горох, картофель были каким-то чудом сметены. Видите ли, в этом графстве, нас окружает высокий забор.Мы предположим это. Никто не может перебраться через забор, и все плоды земли уничтожены, ничего не осталось, кроме этих диких животных, этих трав. С нами будет покончено? Я вас об этом прошу. Нам нечего делать? »И снова Том Кинг зарычал, и на мгновение в комнате воцарилась тишина. Затем Джо снова погрузился в изложение своей идеи.« Дела будут идти тяжело на какое-то время. Я это признаю. Я должен это признать. Ничего не обойти. Нам будет трудно это сделать. Больше, чем один толстый желудок прогнулся бы. Но они не могли нас проглотить.Я бы сказал, что нет «.

Том Кинг добродушно рассмеялся, и дрожащий нервный смех Эдварда Кинга прокатился по всему дому. Джо Веллинг поспешил дальше. «Мы начали бы, видите ли, выращивать новые овощи и фрукты. Вскоре мы вернем все, что мы потеряли. Помните, я не говорю, что новые вещи будут такими же, как старые. Они бы не стали. Может быть, они были бы лучше, а может быть, не настолько хороши. Это интересно, а? Вы можете подумать об этом. Это заставляет ваш мозг работать, не так ли? »

В комнате воцарилась тишина, и снова старый Эдвард Кинг нервно засмеялся.«Послушайте, я бы хотел, чтобы Сара была здесь», — воскликнул Джо Веллинг. «Пойдем к тебе домой. Я хочу ей об этом рассказать».

В комнате скрипел стулья. Именно тогда Джордж Уиллард удалился в свою комнату. Выглянув в окно, он увидел Джо Веллинга, идущего по улице с двумя королями. Том Кинг был вынужден делать необычайно большие шаги, чтобы не отставать от маленького человечка. Шагая, он наклонился, прислушиваясь — поглощенный, очарованный. Джо Веллинг снова взволнованно заговорил.«Теперь возьми молочая», — крикнул он. «Многое можно было бы сделать с молоком, а? Это почти невероятно. Я хочу, чтобы вы подумали об этом. Я хочу, чтобы вы двое подумали об этом. Вы увидите новое растительное царство. Это интересно, а? Это идея . Подожди, пока ты не увидишь Сару, она поймет идею. Ей будет интересно. Сара всегда интересуется идеями. Ты не можешь быть слишком умным для Сары, не так ли? Конечно, ты не можешь. что.»

Следующая глава: Приключение об Алисе Хиндман

Независимая активация холодовой акклиматизации низкой температурой и коротким световым периодом в гибридной осине

• Авторские права © 2002 Американское общество физиологов растений

Abstract

Древесные растения умеренной зоны акклиматизируются к холоду в ответ как на короткий световой день (SD), так и на низкие температуры (LT). Мы смогли показать, что эти два сигнала окружающей среды независимо индуцируют акклиматизацию к холоду, сравнивая осину дикого типа (WT) и трансгенную гибридную осину ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.) линия 22, сверхэкспрессирующая ген овса ( Avena sativa ) ФИТОХРОМ А ген. Линия 22 не смогла обнаружить SD и, следовательно, не перестала расти в условиях SD. Это привело к нарушению развития толерантности к замораживанию при SD. Напротив, воздействие LT привело к акклиматизации линии 22 к холоду до степени, сравнимой с WT. В отличие от WT линия 22 не могла обезвоживать зимующие ткани или индуцировать продукцию дегидринов (DHN) в условиях SD.Кроме того, содержание абсцизовой кислоты (ABA) в почках линии 22 было одинаковым при стандартном дневном освещении и при продолжительном световом дне, тогда как длительное воздействие SD снижало уровень ABA у WT. Воздействие LT привело к быстрому накоплению DHN как у WT, так и у линии 22. Аналогичным образом, содержание ABA временно увеличивалось как у WT, так и у линии 22. Наши результаты показывают, что фитохром A участвует в фотопериодической регуляции уровней ABA и DHN, но LT они регулируются другим механизмом. Хотя SD и LT вызывают холодовую акклиматизацию независимо, ABA и DHN могут играть важную роль в обоих режимах акклиматизации.

Способность к холодной акклиматизации древесных растений умеренного пояса намного выше, чем у травянистых видов. Травянистые растения обычно выживают под изолирующим снежным покровом, и для выживания достаточно умеренной устойчивости к низким температурам (LT). Тем не менее, деревья должны быть в состоянии выдерживать экстремальные температурные и световые условия, и из-за долгого времени и возраста их поколения высокая способность к холодовой акклиматизации имеет первостепенное значение для их выживания. Чрезвычайная морозостойкость древесных растений достигается последовательными стадиями акклиматизации к холоду, первая из которых инициируется коротким световым днем ​​(SD), а вторая и третья — LT и отрицательной температурой соответственно (Weiser, 1970).Хотя недавние открытия расширили наши знания о молекулярных основах морозостойкости травянистых видов, которые акклиматизируются в первую очередь в ответ на LT (Thomashow, 1999), очень мало известно об акклиматизации древесных растений к холоду.

Фитохромы — это фоторецепторы, отвечающие за определение фотопериода у растений. Восприятие фотосигнала рецептором активирует сигнальные пути, ведущие к изменениям в экспрессии генов, лежащих в основе физиологической реакции и реакции развития на свет.У арабидопсиса обнаружено пять различных генов фитохромов, получивших названия от фитохром A ( phyA ) до phyE (Quail, 1991). Участие фитохрома в фотопериодической индукции холодовой акклиматизации деревьев известно давно (Williams et al., 1972; McKenzie et al., 1974). Более поздние молекулярные исследования подтвердили и подчеркнули центральную роль phyA в определении продолжительности светового дня древесными растениями. Сверхэкспрессия гена phyA овса ( Avena sativa ) ( PHYA ) в гибридной осине ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.) значительно изменяет критическую продолжительность светового дня и препятствует акклиматизации к холоду (Olsen et al., 1997). С другой стороны, снижение уровня PHYA в трансгенной гибридной осине приводит к повышенной чувствительности к продолжительности светового дня (Eriksson, 2000).

Признано, что способность растений к холодовой акклиматизации является количественной характеристикой, включающей действие многих генов с небольшими аддитивными эффектами (Thomashow, 1999). Одним из наиболее важных факторов адаптации к холоду является развитие толерантности к клеточной дегидратации, вызванной внеклеточным замораживанием.Считается, что накопление совместимых растворенных веществ, сахаров и определенных белков защищает клеточные структуры во время обезвоживания, связывая молекулы воды (см. Ingram and Bartels, 1996). Одним из наиболее широко изученных классов таких защитных белков являются дегидрины (DHN), которые индуцируются в вегетативных органах стрессами, ведущими к дефициту воды или в семенах на поздних стадиях эмбриогенеза (Ingram and Bartels, 1996; Campbell and Close, 1997). . Экспрессия гена DHN в большинстве случаев также зависит от фитогормона абсцизовой кислоты (ABA; см. Campbell and Close, 1997).Функция DHN до конца не изучена, но кажется, что они обеспечивают связный водный слой для ряда макромолекул, предотвращая их коагуляцию при экстремальном обезвоживании (Campbell and Close, 1997) или спасая функцию гидролитических ферментов в сухих условиях (Rinne et al. др., 1999). Структура DHN и их субклеточная локализация привели к предположению, что DHN стабилизирует мембраны в условиях дегидратации (Danyluk et al., 1998; Ismail et al., 1999). Wisniewski et al.(1999) недавно показали, что DHN персика также обладает криозащитной и антифризной активностью.

Целью настоящего исследования было изучение факторов, влияющих на холодовую акклиматизацию древесных растений. Поскольку древесные растения умеренной зоны могут акклиматизироваться в ответ как на SD, так и на LT, мы использовали трансгенный подход для анализа LT- и SD-индуцированной акклиматизации. Мы использовали трансгенный гибрид осины, сверхэкспрессирующий ген овса PHYA , который не отвечает на SD прекращением роста, что приводит к нарушению развития толерантности к замораживанию при SD (Olsen et al., 1997). Используя эту модель, мы смогли показать, что LT вызывает развитие толерантности к замораживанию независимо от фотопериодической акклиматизации. Наши результаты также демонстрируют, что ABA и DHN по-разному регулируются при SD и LT, и предполагают их участие в обоих типах акклиматизации.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Сверхэкспрессия PhyA приводит к изменению привычки к росту в условиях длительного светового дня (LD) и SD

В предыдущем исследовании Olsen et al. (1997) представили трансгенные линии гибридных осин, сверхэкспрессирующих ген PHYA овса .В отличие от дикого типа (WT), трансгенная линия 22, сверхэкспрессирующая ген PHYA овса , не отвечала на SD прекращением роста или зачатком апикальной почки. Другая трансгенная линия (8) имела очень низкий уровень экспрессии гена PHYA овса и реагировала на SD так же, как и WT (Olsen et al., 1997). Мы хотели изучить, имеют ли WT и линия 22 такие же характеристики роста при LT при LD и при SD. В условиях LD рост WT был быстрее по сравнению с PHYA , сверхэкспрессирующей линию 22 (фиг.1А), хотя процентное приращение высоты было примерно одинаковым в обеих строках (данные не показаны). LT (4 ° C) немедленно предотвращал рост WT и линии 22, и рост восстанавливался до нормального через 1 день после того, как растения были переведены обратно в 18 ° C (фиг. 1A). В условиях SD рост WT прекращался через 3 недели (фиг. 1B), и терминальная почка формировалась на всех растениях WT через 4 недели (фиг. 1C). Линия 22 продолжала рост SD даже более энергично, чем LD (рис. 1B), предполагая, что прекращение роста при SD не было связано с истощением e.грамм. фотосинтетическая энергия, но это был феномен, контролируемый развитием. Линия 22 не образовывала терминальную почку при SD (фиг. 1D), а также LT не индуцировала образование терминальной почки даже после 5 недель воздействия 0,5 ° C в любой из линий (данные не показаны). Взятые вместе, эти результаты показывают, что гибридная осина по-разному воспринимает сигналы SD и LT. Оба экологических сигнала приводят к прекращению роста, но при SD это происходит из-за медленного перехода развития от вегетативного роста к состоянию покоя, тогда как LT препятствует удлинению роста растений более непосредственно без индукции покоя.

Рис.1.

Характеристики роста гибрида осины WT и линии 22, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . A, рост WT (●) и линия 22 (○) при LD (16 часов, 18 ° C) и LT (16 часов, 4 ° C). Продолжительность лечения LT отмечена белой полосой. B, рост WT (●) и линия 22 (○) при SD (10 ч, 18 ° C). C, терминальная почка WT и D, вершина линии 22 после 3 недель обработки SD (10 ч, 18 ° C). Значения — это средние значения от трех до пяти деревьев. Вертикальные полосы представляют ± se.

Сверхэкспрессия PhyA и LT предотвращают обезвоживание зимующих тканей

Развитие покоя характеризуется исчезновением бесклеточной воды (Faust et al., 1991). Было показано, что фитохром опосредует это обезвоживание, что может быть связано с наблюдаемым увеличением толерантности к замораживанию во время SD (McKenzie et al., 1974). Мы хотели изучить, связана ли дегидратация тканей только с акклиматизацией, вызванной SD, или она также вызвана LT. Поэтому мы измерили содержание воды в бутонах и междоузлиях после 5 и 10 недель воздействия LD и SD при 18 ° C и после последующих 5 недель воздействия 0,5 ° C при соответствующей продолжительности светового дня. Содержание воды в междоузлиях показано на Рисунке 2, содержание воды в бутонах соответствовало аналогичной схеме (данные не показаны).Перенос растений на SD при 18 ° C привел к значительному снижению содержания воды в междоузлиях в WT и строке 8; через 10 недель содержание воды снизилось на 30% (мас. / мас.) в обеих линиях (рис. 2). Линия 22 не реагировала на SD, и содержание воды в этой строке оставалось на том же уровне, что и в LD на протяжении всего периода исследования. LT не приводил к снижению содержания воды в условиях LD, и если растения были переведены на LT после 5 недель воздействия SD, дальнейшее обезвоживание было предотвращено (рис.2). Взятые вместе, эти результаты показывают, что снижение содержания воды в зимующих тканях опосредовано phyA. Это обезвоживание характерно для акклиматизации, вызванной SD, и является активным процессом, которому способствует высокая температура.

Рис.2.

Содержание воды в межузловых сегментах WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . Растения выращивали 5 недель в условиях LD (16 часов, 18 ° C) или SD (10 часов, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переводили в LT (0.5 ° C) в течение 5 недель при соответствующей продолжительности светового дня. Цифры относятся к продолжительности лечения в неделях. Вертикальные полосы представляют ± se. Значительные различия уровня достоверности не менее 0,05 между разными видами лечения в каждой строке отмечены разными буквами.

Влияние сверхэкспрессии phyA на устойчивость к замораживанию стебля и листьев

Было показано Olsen et al. (1997), что избыточное производство овса PHYA эффективно предотвращало холодовую акклиматизацию стебля гибридной осины, когда растения акклиматизировались в SD с последующей LT.Это объяснялось неспособностью трансгенных линий прекращать рост, что, как было показано, является предпосылкой для фотопериодической холодовой акклиматизации древесных растений (Fuchigami et al., 1971; Junttila, Kaurin, 1990). Однако, если древесные растения подвергаются прямому воздействию LT в условиях LD, они могут акклиматизироваться без развития состояния покоя (Christersson, 1978; Li et al., 2002). Мы хотели изучить, может ли LT в условиях LD вызывать акклиматизацию у трансгенной гибридной осины и существуют ли тканеспецифические различия в способности акклиматизации между этими двумя стратегиями акклиматизации.В соответствии с предыдущими результатами, линия 22 была серьезно нарушена при фотопериодической индукции толерантности к замораживанию. SD не вызывал развития морозостойкости ни листовой, ни стеблевой ткани (рис. 3 и 4). Напротив, воздействие SD привело к значительному увеличению морозостойкости стеблей WT и линии 8 (рис. 3 и 4) и некоторому увеличению листьев WT (рис. 4). Только LT (0,5 ° C) под LD увеличивало устойчивость к замерзанию стебля всех линий в некоторой степени (рис.3), но немного более высокая температура (4 ° C) была более эффективной для индукции устойчивости к замерзанию (рис.4). В частности, листья линии 22 эффективно акклиматизировались при обработке LT (рис. 4). Наиболее эффективной обработкой, индуцирующей устойчивость к замерзанию стебля WT и линии 8, была SD, за которой следовала LT, но в этих условиях линия 22 не развивала устойчивости к замерзанию (фиг. 3). Результаты показывают, что SD и LT могут независимо вызывать холодовую акклиматизацию гибридной осины. Акклимация, индуцированная SD, опосредуется phyA и работает в основном в зимующих тканях, но индуцированная LT акклиматизация также наблюдается в листьях, и для нее не требуется phyA.

Рис.3.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на устойчивость к замораживанию стебля WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . Растения выращивали в течение 5 недель в условиях LD (●; 16 ч, 18 ° C) или SD (○; 10 ч, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переносили при 0,5 ° C на 5 недель в условиях LD (; 16 ч, 0,5 ° C) или SD (; 10 ч, 0,5 ° C). LT ₅₀ показывает температуру, при которой погибла половина стеблей.

Рис. 4.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на устойчивость к замораживанию листа и стебля WT и гибридной линии 22 осины, сверхэкспрессирующей ген овса PHYA . Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их переводили в условия SD (10 часов, 18 ° C) на 3 недели или в LT в условиях LD (16 часов, 4 ° C) на 1 неделю. , после чего измеряли устойчивость к замерзанию. LT ₅₀ показывает температуру 50% утечки электролитов.

Дифференциальное регулирование ABA и DHN по SD и LT

Считается, что

ABA играет важную роль в толерантности к обезвоживанию и стрессу (Chandler and Robertson, 1994).Чтобы выяснить роль АБК в развитии толерантности к замораживанию, мы изучили регуляцию ее уровней во время акклиматизации в условиях SD и LT. При 18 ° C уровни АБК были значительно выше в условиях LD, чем в условиях SD, в почках WT и линии 8 (Таблица I). Содержание АБК в почек линии 22 было примерно одинаковым при SD и LD и значительно ниже, чем в строке 8 или в WT (Таблица I). Через 7 недель в условиях SD при 18 ° C уровни АБК были примерно одинаковыми во всех линиях, но с 7 по 10 неделю уровни снизились в строке 8 и WT и увеличились в строке 22.Воздействие 0,5 ° C в течение 2 недель привело к значительному увеличению уровней АБК во всех линиях под SD; в условиях LD уровни увеличивались в WT и строке 22 и немного снижались в строке 8 (Таблица I). После 3 дополнительных недель при 0,5 ° C уровни значительно снизились как при LD, так и при SD во всех трех линиях (Таблица I). Эти результаты предполагают, что фотопериод и температура по-разному регулируют уровень АБК, и хотя фотопериодическая регуляция линии 22 была нарушена, эта линия реагировала на LT таким же образом, как и WT.

Таблица I.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на содержание АБК в почках WT, линии 8 и линии 22 гибридной осины со сверхэкспрессией овса PHYA

Растения повышают свою способность переносить стрессы окружающей среды за счет изменений в экспрессии генов (Thomashow, 1999). DHN широко изучается в исследованиях по акклиматизации к холоду, поскольку считается, что они способствуют защите клеточных органелл во время вызванной замораживанием клеточной дегидратации (Campbell and Close, 1997).Чтобы выяснить роль DHN в SD- и LT-индуцированной акклиматизации, мы изучили изменения в экспрессии гена DHN в гибридной осине. В качестве модельного гена мы использовали DHN DSP16 из Craterostigma plantagineum Hochst. (Piatkowski et al., 1990), который использовали в качестве зонда в нозерн-блотах. Характер экспрессии гомологичных генов DHN в почках, стебле и верхушке гибридной осины со сверхэкспрессией овса PHYA охарактеризован в условиях LD и SD при 18 ° C и 0,5 ° C. Паттерны экспрессии DHN в разных тканях были сходными, поэтому показаны только результаты для верхушки.Транскрипты DHN были индуцированы 3-недельным воздействием SD при 18 ° C у WT и в линии 8, тогда как в строке 22 количество транскриптов DHN было таким же, как в контроле LD, даже после 10 недель в условиях SD. (Рис. 5). Напротив, LT увеличивал уровень транскрипта DHN как в трансгенных линиях, так и в WT в условиях LD и SD (фиг. 5).

Рис.5.

Нозерн-блоттинг-анализ экспрессии гена DHN, гомологичного DSP16 из C. plantagineum (Piatkowski et al., 1990) на вершине WT, в линии 8 и линии 22 гибридной осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их подвергали LT (16 часов, 0,5 ° C), SD (10 часов, 18 ° C) или SD, а затем LT (10 часов, 18 ° C). 0,5 ° C) обработка. Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях. Гистограмма показывает нормализованные значения DSP16 (после стандартизации по интенсивности рибосомного сигнала), представленные как процент от наивысшего значения.

В вестерн-блот-анализе мы использовали поликлональные антитела, которые были индуцированы против синтетического полипептида, соответствующего продукту того же гена DSP16 (Piatkowski et al., 1990). Результаты вестерн-блоттинга почек, стебля и верхушки были аналогичными, поэтому показаны только репрезентативные результаты для ткани почек. Антитело распознает ряд конститутивно экспрессируемых белков в почках. Кроме того, экспрессия белка массой 30 кДа коррелировала с экспрессией гена, гомологичного DSP16 (фиг.6). Подобно транскрипту DHN, экспрессия 30-кДа DHN-родственного белка (DRP) постепенно повышалась в течение 10-недельного периода исследования в условиях SD у WT и в линии 8, но его уровень оставался на уровне контроля LD. в строке 22 (рис.6). Напротив, LT увеличивал уровень DRP 30 кДа во всех линиях, а также в линии 22, как в условиях LD, так и в условиях SD. Индукция с помощью LT была намного быстрее, чем индукция с помощью SD; через 2 недели при 0,5 ° C количество DRP 30 кДа было таким же, как после 10 недель обработки SD у WT и линии 8. SD и LT также оказали аддитивный эффект на накопление белка DHN у WT и линии 8 (фиг. .6). Взятые вместе, эти результаты показывают, что как SD-, так и LT-индуцированная акклиматизация сопровождается экспрессией гена DHN.Дифференциальное накопление DHN в линии 22 с помощью SD или LT показывает, что эти экологические сигналы независимо индуцируют экспрессию гена дегидрина.

Рис.6.

Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии DHN-подобных белков в почках WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей овес PHYA . Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их подвергали LT (16 часов, 0,5 ° C), SD (10 часов, 18 ° C) или SD, а затем LT (10 часов, 18 ° C). 0,5 ° C) обработка. Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях.Слева указаны молекулярные массы стандартов белка. Поликлональное антитело было продуцировано против синтетического полипептида из клона pcC 6-19 C. plantagineum (Schneider et al., 1993), соответствующего гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990).

ОБСУЖДЕНИЕ

Наши результаты показывают, что два разных фактора окружающей среды, SD и LT, независимо вызывают холодовую акклиматизацию гибридной осины. Мы смогли проанализировать эти два пути, используя трансгенный гибрид осины линии 22, сверхэкспрессирующий ген PHYA овса .Эта линия не ответила на SD акклиматизацией к холоду, тогда как WT и трансгенная линия 8, в которых экспрессия PHYA овса была незначительной (Olsen et al., 1997), акклиматизировались к холоду в течение 3 недель при SD при 18 ° C ( Рис.3 и 4). Однако при LT (4 ° C) и LD, особенно листья линии 22 были способны акклиматизироваться в степени, сравнимой с WT (рис. 4). Наши результаты подтверждают идею о том, что восприятие SD-сигнала при акклиматизации древесных растений к холоду опосредуется через phyA (Williams et al., 1972; McKenzie et al., 1974; Olsen et al., 1997) и предполагают, что индуцированная LT акклиматизация не зависит от этого механизма.

Хотя SD- и LT-индуцированная акклиматизация имела некоторые общие компоненты, механизм, лежащий в основе этих стратегий акклиматизации, был другим. Наиболее заметным различием было участие покоя в индуцированной SD акклиматизации и противоположный эффект LT на развитие этого покоя. Одним из ключевых факторов покоя было снижение влажности перезимовавших тканей.Было показано, что обезвоживание является неотъемлемой частью развития покоя почек (см. Rohde et al., 2000). С другой стороны, было показано, что обезвоживание, вызванное SD, коррелирует с повышенной толерантностью к замораживанию (McKenzie et al., 1974; Junttila and Kaurin, 1990). Мы предполагаем, что, хотя обезвоживание связано с развитием покоя, оно является одним из ключевых факторов, повышающих устойчивость к замораживанию в условиях SD, и является предпосылкой для максимальной устойчивости во время последующей обработки LT. В строке 22 не наблюдалось снижения содержания воды в почках или междоузлиях, и устойчивость стебля к замерзанию не увеличивалась в условиях SD или при последующей обработке LT (рис.3). Напротив, уменьшение содержания воды в бутонах и междоузлиях у WT и линии 8 коррелировало с повышенной морозостойкостью при SD (рис. 2 и 3). Обезвоживание может напрямую повысить толерантность к замораживанию за счет осмотической адаптации (Levitt, 1980; Sakai and Larcher, 1987) или может вызвать адаптивные реакции, которые косвенно повышают толерантность к замораживанию (Guy et al., 1992; Xiong et al., 1999). Уменьшение содержания воды в условиях SD может частично быть следствием накопления сухого вещества, например.грамм. белки и углеводы (Levitt, 1980). Sauter et al. (1996), например, показали, что накопление крахмала в условиях SD и его преобразование в сахара при LT необходимы для правильной акклиматизации тополя. В заключение, прекращение роста, опосредованное phyA, приводит к снижению содержания воды и накоплению запасов, которые затем используются во время последующего LT для достижения максимальной устойчивости к замораживанию. Неспособность линии 22 осушать и накапливать запасы в SD частично объясняет ее неспособность акклиматизироваться в SD и во время последующих LT условий.

Считается, что

DHN выполняет защитные функции в клетках растений против стрессов, вызванных дегидратацией (Campbell and Close, 1997). Мы изучили роль DSP16 -подобных DHN в SD- и LT-индуцированной акклиматизации гибридной осины к холоду. Неспособность линии 22 накапливать DSP16 -подобный DHN при SD (фиг. 5 и 6) указывает на то, что phyA участвует в фотопериодической регуляции этого гена. Медленное накопление DSP16 -подобного DHN во время SD у WT и линии 8 предполагает, что эта регуляция является непрямой, возникающей в результате медленной дегидратации цитоплазмы.Однако LT (0,5 ° C) индуцировал сильное и быстрое накопление транскрипта и белка DHN во всех трех линиях в условиях LD и SD (рис.5 и 6), показывая, что LT индуцирует отдельный путь, который не зависит от действия phyA . Более ранние исследования показали, что DHN накапливаются в древесных растениях в ответ на SD (Welling et al., 1997; Rinne et al., 1998) и LT (Levi et al., 1999; Richard et al., 2000). Мы смогли показать, что эти экологические сигналы независимо индуцируют экспрессию гена DHN.Это соответствует Artlip et al. (1997), которые предположили, что LT и SD индуцируют различные пути передачи сигнала в экспрессии гена DHN у персика.

Было показано, что накопление DHN следует за сезонными изменениями у многих древесных видов, что поставило вопрос о том, связаны ли они с покоем или морозостойкостью (Wisniewski et al., 1996; Rinne et al., 1998; Sauter et al. , 1999). Мы предполагаем, что DSP16 -подобный DHN играет роль как в развитии покоя, так и в развитии устойчивости к замерзанию у гибридных осин.В условиях SD накопление DSP16 -подобных DHN коррелировало с развитием покоя (рис. 1), обезвоживанием почек и стебля (рис. 2) и повышением устойчивости к замораживанию (рис. 3). В условиях LD, LT-индуцированное накопление DSP16 -подобного DHN коррелирует исключительно с толерантностью к замораживанию, потому что LT не индуцирует развитие покоя (Fig. 1). Следовательно, оба этих экологических сигнала индуцируют экспрессию DSP16 -подобного DHN, который затем может обеспечивать защиту от обезвоживания как во время развития покоя, так и во время замораживания.Интересно, что стебли линии 22 не могли акклиматизироваться при воздействии LT в условиях SD, хотя они были способны накапливать низкие уровни DSP16 -подобного DHN в этих условиях. Это демонстрирует сложность холодовой акклиматизации гибридной осины и предполагает, что у древесных растений вторая стадия акклиматизации требует как SD, так и LT сигналов.

АБК считается одним из ключевых регуляторов реакции акклиматизации к холоду (Heino et al., 1990; Lång et al., 1994; Tamminen et al., 2001). Кратковременное увеличение содержания АБК, предшествующее акклиматизации, у тех видов, которые способны к акклиматизации, является одним из первых событий в процессе акклиматизации (Chen et al., 1983; Lång et al., 1994). У березы ( Betula pubescens Ehrh.) Кратковременное повышение содержания АБК наблюдается в течение 1-й недели лечения SD (Welling et al., 1997; Rinne et al., 1998). Мы смогли показать, что у древесных растений содержание АБК контролируется разными механизмами во время SD- или LT-индуцированной акклиматизации. Фотопериод явно влиял на содержание АБК в почках у WT и линии 8, но в строке 22 уровень АБК был примерно одинаковым для обеих длин светового дня (Таблица I).Однако LT индуцировал временное увеличение содержания АБК во всех линиях (Таблица I). Более высокие или аналогичные уровни ABA в LT в строке 22 по сравнению с WT и линией 8 продемонстрировали, что линия 22 не испытывала недостатка в синтезе ABA, а, скорее, была неспособна реагировать на фотопериодический сигнал. Эти результаты предполагают, что phyA участвует в фотопериодической регуляции уровня ABA, но при LT уровень ABA регулируется другим механизмом.

Наши результаты показывают, что деревья воспринимают сигнал SD и LT по отдельности и что оба фактора окружающей среды могут запускать акклиматизацию к холоду независимо.Результаты показывают, что образование апикальных зачатков, опосредованное phyA, при SD является «главным переключателем», который переводит метаболизм от вегетативного роста к состоянию покоя и к индукции толерантности к замораживанию. Обезвоживание перезимовавших тканей и накопление белков, особенно DHN во время SD, являются важными факторами во время фотопериодической акклиматизации. Без этих изменений древесные растения не смогут достичь максимальной морозостойкости в последующем LT. Напротив, LT-индуцированное развитие толерантности к замораживанию и регуляция уровней DHN и ABA не зависели от phyA на LD, что свидетельствует о наличии отдельных, но взаимодействующих путей акклиматизации к холоду.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Растительный материал

В экспериментах использовали две трансгенные линии гибридной осины ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.), Экспрессирующие ген овса ( Avena sativa ) PHYA вместе с WT. Линия 22 показывает сильную эктопическую экспрессию овса PHYA , которая приводит к уменьшению длины междоузлий в условиях LD по сравнению с WT. Линия 22 также снизила чувствительность к SD, проявляясь как непрерывный рост в условиях SD, тогда как WT прекращает рост и образует терминальную почку.Экспрессия овса PHYA в строке 8 незначительна, и его ростовые реакции в разные фотопериоды аналогичны WT (Olsen et al., 1997).

Условия роста растений и экспериментальный план

Растения размножали с помощью культуры побегов in vitro и после этого выращивали в камерах с контролируемой окружающей средой при 18 ° C (± 0,5 ° C) при фотопериоде 16 ч в течение примерно 6 недель перед использованием в экспериментах. Плотность потока фотонов светового периода составляла от 150 до 200 мкмоль · м ⁻² с ⁻¹ при длине волны от 400 до 700 нм (флуоресцентные лампы TL 65W / 83, Philips, Эйндховен, Нидерланды).Влажность в камерах для выращивания доводили до дефицита давления водяного пара 0,5 кПа. Растения ежедневно поливали полноценным питательным раствором (Junttila, 1976). Сначала растения выращивали в течение 5 недель при 18 ° C (± 0,5 ° C) в короткий (10 часов, стандартное отклонение) или длительный (16 часов, LD) фотопериод. Затем половину растений в соответствующие фотопериоды переносили в LT (0,5 ° C) на 5 недель. Остальные растения хранили при 18 ° C. Дополнительный краткосрочный эксперимент был проведен с растениями WT и линии 22 для проверки морозостойкости стебля и листьев.Микроразмножающиеся растения выращивали в теплице при LD (16 ч в день, 18 ° C) в течение 5 недель перед экспериментами. Часть растений подвергали 3-недельной обработке SD в теплице путем уменьшения продолжительности светового дня до 10 ч с помощью занавесок; температура была доведена до 18 ° C. Для обработки LT часть растений перемещали в камеру для выращивания. Через неделю адаптации температуру снизили до 4 ° C, а продолжительность светового дня поддерживали на уровне 16 часов. Прекращение апикального роста и формирование терминальной почки отслеживали на протяжении всего периода исследования.

Сбор проб и определение содержания воды

В каждый момент времени были собраны разные типы образцов: (а) почки от узлов с 3 по 12, (b) соответствующие междоузлия вдоль почки и (c) вершина (терминальная почка с 1-2 см стебля под ней). От каждого генотипа и обработки были собраны два параллельных набора образцов, и каждая параллель состояла из двух растений. Два таких образца почек (3–5) и междоузлий (2–3) были взяты для определения содержания воды. Остальные образцы были разделены на две части, заморожены в жидком азоте и хранились при -80 ° C перед использованием для анализа ABA и экспрессии генов.Содержание воды в бутонах и междоузлиях измеряли через 5 и 10 недель эксперимента. Сухую массу образцов измеряли после сушки в течение 24 ч при 80 ° C. Относительное содержание воды рассчитывали по формуле [(свежий вес — сухой вес) / свежий вес] × 100%.

Содержание ABA в бутонах

образцов почек для анализа ABA были собраны через 7 и 10 недель эксперимента. В то время деревья выращивали при 18 ° C в течение 16- или 10-часового фотопериода в течение 7 и 10 недель или при 0,5 ° C в течение 2 и 5 недель при соответствующей продолжительности светового дня.Образцы взвешивали (свежий вес), замораживали в жидкости N ₂ и сушили вымораживанием, чтобы получить сухой вес. Образцы экстрагировали в течение 1 ч при 4 ° C в 0,5 мл 50 мМ натрий-фосфатного буфера, pH 7,0, с 0,02% (мас. / Об.) Na-диэтилдитиокарбаматом в качестве антиоксиданта и [ ² H ₄ ] ABA в качестве внутренний стандарт. После центрифугирования pH супернатанта доводили до 2,7, и ABA связывали с Amberlite XAD-7 путем встряхивания в течение 30 минут при 4 ° C. Буфер удаляли, и Amberlite XAD-7 дважды промывали 2 мл 1% (об. / Об.) Уксусной кислоты.Смолу сушили в Speed ​​Vac, и ABA элюировали из Amberlite XAD-7 дважды 2 мл дихлорметана путем встряхивания в течение 30 минут при 4 ° C. Дихлорметан выпаривали в Speed-Vac, образцы метилировали и анализировали с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии с использованием мониторинга выбранных ионов.

Устойчивость к замерзанию стебля и листьев

Испытания на замораживание проводились с сегментами стебля, включая почки; каждая температура испытания состояла из двух параллелей с пятью сегментами стержня.Стебли были испытаны на замораживание в контролируемых условиях с использованием скорости замораживания 3 ° C h ^-1 до -17 ° C и далее при 10 ° C h ^-1 . Образцы удаляли с интервалом 4 ° C. После оттаивания в течение ночи при 6 ° C образцы инкубировали при 18 ° C между влажными бумажными полотенцами и повреждение оценивали визуально. Устойчивость к замерзанию листьев и соответствующих стеблей измеряли в контролируемой замораживающей ванне, а повреждение определяли методом утечки электролита, как описано у Lång et al.(1989). Образец листа представлял собой листовой диск диаметром 1,5 см, вырезанный с обеих сторон средней жилки двух самых верхних взрослых листьев. Морозостойкость стебля измеряли по 10-сантиметровой части стебля, расположенной на 3 см ниже верхушечной почки. Образцы были завернуты в Miracloth и помещены в пробирки в контролируемую замораживающую баню. После начала образования льда при -1,5 ° C температура бани была снижена на 2 ° C ч ^-1 . Образцы отбирали с интервалами 2 ° C и оставляли на ночь таять во льду при 4 ° C.Электропроводность (R0) измеряли после встряхивания (200 об / мин) образцов в 40 мл деионизированной воды в течение 2 ч при комнатной температуре. Для измерения общей проводимости (R1) образцы умерщвляли кипячением в течение 30 мин, а после охлаждения до комнатной температуры повторно экстрагировали встряхиванием в течение 2 ч при 200 об / мин в исходном растворе. Утечка ионов рассчитывалась как R0 / R1 × 100%. Установки с утечкой 50% (LT ₅₀ ) или более от общего количества растворенных веществ считались мертвыми.

Анализ выделения и гибридизации РНК

Суммарную РНК из почек, стебля и верхушки очищали, как описано Verwoerd et al.(1989). Образцы замораживали в жидком N ₂ , гомогенизировали до мелкого порошка в ступке с помощью пестика и экстрагировали в 500 мкл горячего (80 ° C) фенольного буфера (1: 1 фенол: [100 мМ LiCl, 100 мМ Tris , pH 8,0, 10 мМ EDTA и 1% (мас. / об.) SDS]) встряхиванием в течение 60 с. Образцы дважды экстрагировали 250 мкл смеси хлороформ: изоамиловый спирт 1:24, и РНК осаждали 2 м раствора LiCl при 4 ° C. Полученный осадок растворяли в воде и осаждали этанолом. Концентрацию РНК измеряли с помощью спектрофотометра, и 10 мкг общей РНК денатурировали и разделяли на формальдегид-агарозном геле (Sambrook et al., 1989). После капиллярного переноса на положительно заряженную нейлоновую мембрану (Roche Molecular Biochemicals, Мангейм, Германия) РНК иммобилизовали на мембране путем запекания.

I-фрагмент Pst длиной 800 п.н. клона кДНК pcC6-19 DHN из Craterostigma plantagineum Hochst., Соответствующий гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990), был использован в качестве зонда в северных регионах. промокание. Фрагмент содержал последовательности, соответствующие N-концевой консенсусной последовательности DEYGNP, повторению Ser и двум копиям предполагаемого амфипатического домена, образующего α-спираль, KIKELPGH (Piatkowski et al., 1990). Зонд метили [α- ³² P] dCTP с использованием набора для маркировки Ready-To-Go (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) и очищали на микроколонках ProbeQuant G-50 (Amersham Pharmacia Biotech). Мембраны гибридизовали в течение ночи при 55 ° C в модифицированном фосфатном буфере (Church and Gilbert, 1984), содержащем 7% (мас. / Об.) SDS и 500 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 7,2. Промывку мембран после гибридизации проводили при 55 ° C согласно Черч и Гилберту (1984). Сигналы на фильтре количественно оценивали сканером BAS 1500 (Fuji Photo Film, Токио), и рибосомный ген 18S использовали в качестве гетерологичного зонда для оценки различий в загрузке образцов.

Анализ белка

Образцы

почек, коры или верхушки измельчали ​​в пробирках Эппендорфа с буфером для экстракции (50 мм Трис, основа, 0,1% [мас. / Об.] SDS и 200 мм DTT) и центрифугировали при 10 000 g дважды в течение 10 мин. Содержание белка измеряли с помощью процедуры микроанализа для микротитровальных планшетов (Bio-Rad, Hercules, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Пятнадцать микрограммов белка разбавляли загрузочным буфером Towbin и разделяли с помощью SDS-PAGE, как описано ранее (Welling et al., 1997). Были запущены два параллельных геля. Один был окрашен 0,1% (мас. / Об.) Кумасси бриллиантовым синим R-250 в 40% (об. / Об.) Метаноле и 10% (об. / Об.) Уксусной кислоте для обеспечения равной нагрузки на дорожку. Для иммуноблоттинга белки из параллельных неокрашенных гелей подвергали электроблоттингу на нитроцеллюлозных мембранах 0,45 мкм (Micron Separations, Westborough, MA), как описано ранее (Welling et al., 1997). Мембрану зондировали в течение ночи в разведении 1: 1000 поликлональным антителом, которое было индуцировано против синтетического полипептида из клона pcC6-19 из C.plantagineum (Schneider et al., 1993), соответствующий гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990).

Статистический анализ

Влияние продолжительности светового дня, линии и температуры на содержание АБК анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Однофакторный дисперсионный анализ ANOVA был использован для проверки значительной разницы в содержании воды между различными обработками внутри линий.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим доктора Доротею Бартельс (Max-Planc-Institut, Кельн, Германия) за ее подарок клона pcC6-19 и соответствующего антитела.Мы благодарим доктора Пекку Хейно и доктора Маркку Аалто (Университет Хельсинки) за полезные замечания по рукописи.

Сноски

• №1 Эта работа была поддержана Академией Финляндии (проекты №№ 44252, 44262, 44883 и 49952; Программа Финского центра передового опыта 2000–2005 гг.), Biocentrum Helsinki, Национальным технологическим агентством, Хельсинкским университетом. Foundation и Фондом Эмиля Аалтонена.

• ↵ * Автор, ответственный за переписку; электронная почта welling оперони.helsinki.fi; факс 358–9–1

  79.

• Информацию о статье, дате публикации и цитировании можно найти на сайте www.plantphysiol.org/cgi/doi/10.1104/pp.003814.

• Получено 5 февраля 2002 г.
• Исправление получено 27 февраля 2002 г.
• Принято 26 апреля 2002 г.

Веллинг, Альберта

Первыми обитателями области Веллинг были индейцы. Древний
кемпинг всего в нескольких милях к югу на земле, которая сейчас обрабатывается Ридом Хегги
дал много древних артефактов, включая наконечники стрел.

С приближением времени некоторые торговцы мехом, вероятно, посетили
область. Затем торговцы виски и другие грузовые суда, использующие Ft.
Benton — Whoop Up Trail проходила поблизости. След прошел
земля теперь обрабатывается пекарями. В 1874 году Северо-Западная конная полиция
прибыл для поддержания правопорядка. Вскоре после этого Доминион
Землемеры измеряли и отмечали каждую милю в обоих
направления. Среди землемеров был К.А. Маграт.

В начале 1880-х годов CPR строили по всей Канаде. Александр
Галт понимал, что железной дороге потребуется уголь для работы локомотивов.
поэтому он послал своего сына Эллиота на поиски. Он обнаружил, что было
много в Coal Banks (позже Lethbridge). Компания под названием Northwest
Coal and Navigation Co. была создана для транспортировки угля в Medicine Hat для
СЛР. Сначала они попытались переправиться на баржах по реке Олдман, но
был провалом.Затем они получили грант от Оттавы на строительство железной дороги из
Летбридж — к Медисин Хет. Грант составлял 3840 акров земли на каждого.
миля построенной железной дороги. Железная дорога была построена в 1885 году.
период строительства К. А. Маграт присоединился к компании Galt, а позже
женился на сестре Эллиота Галта Лауре.

Железная дорога была успешной, поэтому Галты решили построить железную дорогу, чтобы
Грейт-Фолс для доставки угля. В 1889 году название компании было изменено на
Alberta Railway and Coal Co.и получил 3700 акров за милю за
новая железная дорога. Как видно, Галты стали обладателями крупных
участки земли. Мы подробно разбираемся в этом вопросе, потому что большая часть земли
в районе Веллинг была часть земли, предоставленной этой компании.

В 1888 году поселение в Кардстоне было основано в основном как убежище для
Мужчины-мормоны, которые жили многоженством. Их эффективный и энергичный
колонизацию этой области заметил мистер Маграт.Он имел
ответственность за восстановление больших земельных владений его
Компания. Он понял, что если к земле добавить орошение,
стали бы более ценными, а также увеличили бы объем бизнеса для
железная дорога.

После серии переговоров с Орой Кард и церковью мормонов в
Солт-Лейк-Сити заключен контракт на строительство канала от г.
Кимбалл — Стирлингу. Контракт также требовал, чтобы два города были
установлено не менее 300 человек в каждом городе.Работа началась
канал в сентябре 1898 года. Маграт и Стерлинг были обследованы в 1899 году.
Вода достигла Стерлинга в 1900 году.

Некоторые из наиболее интенсивных строительных работ велись к юго-западу от
Веллинг. Требовался длинный разрез, чтобы отвести воду из выбоины.
Кули на возвышенность возле Веллинга. Видный лидер из
Летбридж посетил строительную площадку на разрезе Хаммонд в ноябре.
1899. Он рассказывает о поездке по восточному берегу Потхола (позже Веллинг).
к каналу в процессе становления.»Он казался переполненным на пару миль,
с командами, кропотливо очищающими эту коричневую траншею на склоне холма.
Мы сразу сошлись во мнении, что эти пришельцы из Юты могут быть волшебниками.
с водой, но они никогда не могли заставить ее подняться на этот холм ». (Орошение
Строители стр. 78.) Этот канал использовался постоянно до начала 1950-х годов.
С тех пор многое было выровнено, но канал вдоль Ямы
до сих пор стоит как памятник промышленности наших первых пионеров.

Первым поселенцем в Веллинге был Джеймс Пирс, владелец ранчо, который как
Еще в 1885 г. занял скваттеров прямо на Sec 7, twp 6, rg 21.(рядом с
нынешнее шоссе пересекает выбоину).

11 августа город Раймонд был основан Джесси Найтом и
другие. В течение следующих двух лет была лихорадочная деятельность, и к 1903 г.
действовал сахарный завод. Джесси Найт купил большие участки
земли вокруг Раймонда, которые впоследствии были проданы поселенцам.
Часть земли в Веллинге принадлежала мистеру Найту.

Первые поселенцы Веллинга 1901-10

Джоспех К.Петерсон, его жена Сесилия и семья купили первую землю
на том месте, где сейчас Веллинг, и переехал туда примерно в апреле 1901 года. Он построил
дом, сделал ограждение, вспахал землю и вырастил небольшой урожай
овса в том году. Его дом был построен на девятимильном дворе, и он
его друзья называли девятимильным Петерсоном. Хайрам Рири и
Следующим поселился Кристиан Д. Петерсон, и к весне 1902 г.
к ним присоединились братья Кристиана, Нильс и Джон. Жена Джона
Женевра и их семья, Майкл Шумерс, его жена Мэри и семья
и его брат Луи.Братья Буллок, Эрнест К. Буллок-старший.
и Амаса Буллок-старший также прибыли той весной в сопровождении Джеймса
Стратон и его сын Рой. Они водили свои команды и фургоны
из Прово, штат Юта. Их жены и семьи присоединились к ним в октябре
в том же году, прибыв поездом по Великой Северной железной дороге к Грейт-Фоллс,
затем по железной дороге Альберты и Ирригации (АРИ) до Стерлинга. Вот они
их мужья встретили в крытых фургонах и отвезли в их новые
дома.Поскольку денег было мало, они приветствовали работу по строительству заборов.
для Knight Ranching Company. Ограждение восточнее шоссе
через этот район зачисляется Буллокам.

А. М. Уайлд и сыновья Уильям и Верн и дочь Милли с ней
муж и двое маленьких детей приехали весной 1902 года.
сделали свой первый дом в Раймонде в «землянке», пока строили
дом в Веллинг. Остальные члены семьи приехали осенью. В октябре
В 1903 году они переехали в свой новый дом на ферме в Веллинге.

Все эти фермеры-первопроходцы принесли или купили необходимое
машины и принялись за работу. Дерн вспахали на 14 дюймов
шагающие плуги, запряженные четырьмя лошадьми, затем расчлененные и боронованные
и засеян вручную. Мужчина сидел бы в кузове фургона
бросать и раскладывать зерно сначала одной рукой, а затем
другой, в то время как его сосед или жена гнали команду .. Урожайность была
хорошо, пшеница около 30 бушелей на акр и овес около 50
бушели.Количество осадков в 1902 году составило 28 дюймов.

Гораций Веллинг приехал где-то в 1902 году и посадил свой первый урожай.
в 1903 году. Он построил довольно большой дом к югу от железной дороги.
трактатов, и он вместе с Хайрамом Рири, братьями Петерсон и
Братья Шумерс купили первую молотильную машину с приводом от
двенадцать лошадей идут по кругу.

Джеймс С. Томпсон, его жена Элис Джейн и сыновья-близнецы Джеймс
и Генри приехал в Канаду из Моава, штат Юта, в октябре 1903 года.
и поселились в Стирлинге до февраля 1904 г., когда
Веллинг.Сообщество продолжало расти. Иосиф Елисей
Дэй, его жена Харриет и семья из Дрейпера, штат Юта, приехали в 1904 году.
В том же году Хибер Роберт Макбрайд, его жена Элизабет и
их семья приехала из Эдема, штат Юта. Где-то до 1908 года
Бренаман и Мириам Битнер, Крис и Энни Кристенсен
пришел.

Джон и Либби Хенингер с семьей приехали в 1908 году и жили
у лифта и станции, где построил Гораций Веллинг.
Они управляли первым почтовым отделением и владели первым
автомобиль.Джон начал делать большие дела в
Веллинг, он почти сам построил деревню. Были огромные
сараи, тысячи кур и овец. Это был настоящий сайт
езда на поезде.

Каким образом получено название и организация
Веллинг Филиал

Вновь сформированное президентство кола Тейлора состояло из
Президент Хибер С. Аллен, бывший Кардстон, с Теодором
Брэндли из Стирлинга в роли Первого и Дж. Уильям Найт из Раймонда
как вторые советники.Они почувствовали потребность в какой-то церкви
Организация для людей на фермах в 6 милях к западу от Раймонда.
Тогда это было большое расстояние с лошадью и телегой, грязь
дороги и никаких мостов через кули. Это было почти
для этих разбросанных фермеров невозможно добраться до Раймонда.
Воскресная школа и церковь. Президентство кола
созвали собрание, и все жители района были уведомлены.
Некоторым сказали, когда они пришли в Раймонд за продуктами, и
они уведомили других.Большинство из них находились в доме
Авраама и Луизы Уайльд на встречу. (Точная дата
неизвестно, потому что минуты были потеряны в пожаре, но это было
где-то между октябрем 1903 и февралем 1904. Президент
Аллен приветствовал всех и сказал, что цель встречи —
организовать отделение прихода Раймонда. После пения и
молитве было предложено сначала определиться с именем. В соответствии
Уильяму Уайльду «Апостол Джон В. Тейлор встал и предложил
имя Веллинг, в честь его хорошего друга Джоба Веллинга из
Фармингтон, штат Юта.Он замечательный человек, с отличной репутацией,
и, кроме своего сына Горация, построил один из первых приличных размеров
дома в этом сообществе. Его предложение было поставлено на голосование и было
единогласно принято. Другое дело этого памятного
Встреча была назначением лидера нового Веллинг Бранча.
Его звали Авраам Марш Уайльд.

Организация воскресной школы

22 февраля 1904 года суперинтендант воскресной школы кола Лафайет
Холбрук приехал в Веллинг, чтобы организовать воскресную школу.В
были поддержаны следующие офицеры: суперинтендант Гораций Веллинг
с помощниками Джеймсом К. Томсоном и Джоном С. Петерсоном, также как
Секретарь казначей. Учителя — Взрослый класс: Абрахам М. Уайльд:
Промежуточный класс: Кристиан С. Петерсон: детский сад и начальная школа:
Женевра Петерсон.

Еженедельное обслуживание

Еженедельные службы проводились в доме президента Авраама Уайльда до тех пор, пока
осенью 1904 г., когда был построен Школьный Дом. Большая
Комната в Доме школы использовалась для всего: школы, церкви.
Воскресная школа, Хоровая практика, Свадебные приемы, Похороны,
Танцы и домашняя драматика.

The Welling Ward Organization

Веллинг-приход кола Тейлора был организован 18 мая.
1908. Встреча проходила в Веллингском школьном доме с
Присутствуют 58 членов. Апостол Джордж Ф. Ричардс: президент
Б. Х. Робертс, член Первого Кворума Семидесяти: Хибер С.
Аллен, президент кола: Джордж Х. Бадд, секретарь кола: Джон Т.
Смели, советник колья, и Джон Ф. Андерсон, епископ
Раймонда Уорда были все присутствующие.Джон С. Петерсон
был поддержан как епископ с Авраамом М. Уайльдом и Хайрамом Рири
в качестве консультантов и Б. Х. Битнера в роли клерка отделения.

Организация Общества милосердия

Общество милосердия Веллингского прихода было организовано 27 июня 1908 г.
с президентом Общества милосердия кола Ханной Рассел в
посещаемость. Встреча прошла в Welling School.
Дом в 17:00 перед причастным собранием. Луиза Уайлд
был выбран президентом вместе с Женеврой Петерсон и
Гарриет Дэй в роли советников и Энн Кристенсен в роли секретаря.Позднее в тот же день они были поддержаны на причастном собрании.

Организация ассоциации взаимного улучшения

Ассоциация взаимного улучшения организована 3 января.
1909 г. Крис Кристенсен был поддержан в качестве президента
Ассоциация взаимного улучшения молодых мужчин с Нильсом
В. Петерсон и Джеймс К. Томсон в качестве советников и
Альма Баллок в качестве секретаря. Энни Кристенсен была поддержана
Президент Общества взаимного совершенствования молодых девушек
Ассоциация с Эмбер Петерсон и Эффи Дэй в качестве советников
и День Женевы в качестве секретаря.

Основная организация

14 июня была организована ассоциация первичного образования Веллинг-Уорд.
1914. Эми И. Аллен, президент Первоначального общества кола, присутствовала на
встреча. Были поддержаны: Хэтти В. Хенингер
в качестве президента с Лией Уайлд и ЛаВоном Петерсоном в качестве советников
и Делекта Макбрайд в качестве секретаря. Делекта МакБрайд также была
поддержан как хористер и Эльва Буллок как органист. Учителя
были Кэти Баллок, Женевра Петерсон и Ирета Петерсон.

Здания

Зернохранилище десятины:

В дневнике Луизы Уайлд от субботы 20 июня 1916 г.
Общество милосердия продавало напитки во время дневных занятий спортом, чтобы поднять
фонды, чтобы помочь обставить новое здание Общества милосердия. Этот новый
здание было бывшим Зернохранилищем десятины. Он был построен епископом
Дом Петерсона, где хранится выплаченная десятина.
своего рода. Здание было перенесено на территорию школы и сделано
в очень уютную комнату с занавесками, органом и
каждой сестре дали стул.Он также использовался как класс для
Воскресная школа, а затем и школьная комната, а также скаутский зал.
В 1935 году он был продан Джону Уолси-старшему, который перевез его и
построил на нем и превратил его в хороший дом. Как настоящий дом
все еще живет в.

Школьный дом

Школьный дом был построен осенью 1904 года. Большой —
Комната в Доме школы использовалась для всего. Большой раунд
угольная печь стояла в северо-восточном углу, большой шкаф
в юго-восточном углу стояли ведра для обеда,
в большом застекленном шкафу хранились библиотечные книги, рядом с ним стояли
пианино, к северу от западной стены была карта
Мир.

Здание Веллинг-палаты

В марте 1929 года земля была взломана и началось строительство.
В течение года его использовали для церковных собраний. В
подвал использовался для танцев, вечеринок и классных занятий. Это
потребовалось еще 6 лет, прежде чем он был готов к посвящению. На
20 августа 1936 г. Мелвин Дж. Баллард, Совет Двенадцати
посвятил здание. Антуан Р. Ирвинс, один из первых
Также присутствовали семь президентов семидесяти.Взятый
из записей в Солт-Лейк-Сити «Посвященная служба в четверг
Вечером 20 августа 1936 года в 19:30 состоится в новой часовне прихода.
Вступительная молитва Джона К. Петерсона из прихода Этна. Он был
первый епископ Веллингского прихода. Финансовый отчет предоставлен
Епископ Стерлинг Флойд Уайлд: «Стоимость строительства», 12 638 долларов —
Оборудование 2138 долларов США на ремонт, 176 долларов на изготовление
всего 14 952 доллара, и мы свободны от долгов. Веллинг
люди собрали 7 476 долларов, а Доверительный управляющий церкви
в Солт-Лейк-Сити дали такую ​​же сумму.»Брат Баллард
в своей молитве посвящения благословил всех, кто встанет за
эту кафедру, чтобы говорить, что их языки развяжутся и
людям были даны другие чудесные обещания, если они
жили бы своей религией.

Позже в здании были произведены капитальные ремонты и дополнения.
В 1951-52 годах был построен Дом культуры и вход в
здание было изменено. Часовню переделали с подиумом.
изменился с западного конца на восточный.Подвал
был превращен в классы и комнату для младших классов воскресной школы.
был построен над старым топочным помещением. Было больше
ремонт был проведен в 1958-59 годах, и здание было переосвящено
от старейшины Брюса Р. Макконки.

Весной 1985 г. здание снесли, а
началось строительство нового здания. Веллинг-палата
участники отправились в Маграт на воскресные собрания в течение года
пока новое здание не было завершено весной 1986 года.Новое здание было разорвано 13 марта 1988 г.
Президент В. Тайлер Олстон.

Независимая активация акклиматизации к холоду при низкой температуре и коротком фотопериоде у гибридной осины | Физиология растений

Древесные растения умеренной зоны акклиматизируются к холоду в ответ как на короткий световой день (SD), так и на низкие температуры (LT). Мы смогли показать, что эти два сигнала окружающей среды независимо индуцируют акклиматизацию к холоду, сравнивая осину дикого типа (WT) и трансгенную гибридную осину ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.) линия 22, сверхэкспрессирующая ген овса ( Avena sativa ) ФИТОХРОМ А ген. Линия 22 не смогла обнаружить SD и, следовательно, не перестала расти в условиях SD. Это привело к нарушению развития толерантности к замораживанию при SD. Напротив, воздействие LT привело к акклиматизации линии 22 к холоду до степени, сравнимой с WT. В отличие от WT линия 22 не могла обезвоживать зимующие ткани или индуцировать продукцию дегидринов (DHN) в условиях SD.Кроме того, содержание абсцизовой кислоты (ABA) в почках линии 22 было одинаковым при стандартном дневном освещении и при продолжительном световом дне, тогда как длительное воздействие SD снижало уровень ABA у WT. Воздействие LT привело к быстрому накоплению DHN как у WT, так и у линии 22. Аналогичным образом, содержание ABA временно увеличивалось как у WT, так и у линии 22. Наши результаты показывают, что фитохром A участвует в фотопериодической регуляции уровней ABA и DHN, но LT они регулируются другим механизмом. Хотя SD и LT вызывают холодовую акклиматизацию независимо, ABA и DHN могут играть важную роль в обоих режимах акклиматизации.

Способность к холодной акклиматизации древесных растений умеренного пояса намного выше, чем у травянистых видов. Травянистые растения обычно выживают под изолирующим снежным покровом, и для выживания достаточно умеренной устойчивости к низким температурам (LT). Тем не менее, деревья должны быть в состоянии выдерживать экстремальные температурные и световые условия, и из-за долгого времени и возраста их поколения высокая способность к холодовой акклиматизации имеет первостепенное значение для их выживания. Чрезвычайная морозостойкость древесных растений достигается последовательными стадиями акклиматизации к холоду, первая из которых инициируется коротким световым днем ​​(SD), а вторая и третья — LT и отрицательной температурой соответственно (Weiser, 1970).Хотя недавние открытия расширили наши знания о молекулярных основах морозостойкости травянистых видов, которые акклиматизируются в первую очередь в ответ на LT (Thomashow, 1999), очень мало известно об акклиматизации древесных растений к холоду.

Фитохромы — это фоторецепторы, отвечающие за определение фотопериода у растений. Восприятие фотосигнала рецептором активирует сигнальные пути, ведущие к изменениям в экспрессии генов, лежащих в основе физиологической реакции и реакции развития на свет.У арабидопсиса обнаружено пять различных генов фитохромов, получивших названия от фитохром A ( phyA ) до phyE (Quail, 1991). Участие фитохрома в фотопериодической индукции холодовой акклиматизации деревьев известно давно (Williams et al., 1972; McKenzie et al., 1974). Более поздние молекулярные исследования подтвердили и подчеркнули центральную роль phyA в определении продолжительности светового дня древесными растениями. Сверхэкспрессия гена phyA овса ( Avena sativa ) ( PHYA ) в гибридной осине ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.) значительно изменяет критическую продолжительность светового дня и препятствует акклиматизации к холоду (Olsen et al., 1997). С другой стороны, снижение уровня PHYA в трансгенной гибридной осине приводит к повышенной чувствительности к продолжительности светового дня (Eriksson, 2000).

Признано, что способность растений к холодовой акклиматизации является количественной характеристикой, включающей действие многих генов с небольшими аддитивными эффектами (Thomashow, 1999). Одним из наиболее важных факторов адаптации к холоду является развитие толерантности к клеточной дегидратации, вызванной внеклеточным замораживанием.Считается, что накопление совместимых растворенных веществ, сахаров и определенных белков защищает клеточные структуры во время обезвоживания, связывая молекулы воды (см. Ingram and Bartels, 1996). Одним из наиболее широко изученных классов таких защитных белков являются дегидрины (DHN), которые индуцируются в вегетативных органах стрессами, ведущими к дефициту воды или в семенах на поздних стадиях эмбриогенеза (Ingram and Bartels, 1996; Campbell and Close, 1997). . Экспрессия гена DHN в большинстве случаев также зависит от фитогормона абсцизовой кислоты (ABA; см. Campbell and Close, 1997).Функция DHN до конца не изучена, но кажется, что они обеспечивают связный водный слой для ряда макромолекул, предотвращая их коагуляцию при экстремальном обезвоживании (Campbell and Close, 1997) или спасая функцию гидролитических ферментов в сухих условиях (Rinne et al. др., 1999). Структура DHN и их субклеточная локализация привели к предположению, что DHN стабилизирует мембраны в условиях дегидратации (Danyluk et al., 1998; Ismail et al., 1999). Wisniewski et al.(1999) недавно показали, что DHN персика также обладает криозащитной и антифризной активностью.

Целью настоящего исследования было изучение факторов, влияющих на холодовую акклиматизацию древесных растений. Поскольку древесные растения умеренной зоны могут акклиматизироваться в ответ как на SD, так и на LT, мы использовали трансгенный подход для анализа LT- и SD-индуцированной акклиматизации. Мы использовали трансгенный гибрид осины, сверхэкспрессирующий ген овса PHYA , который не отвечает на SD прекращением роста, что приводит к нарушению развития толерантности к замораживанию при SD (Olsen et al., 1997). Используя эту модель, мы смогли показать, что LT вызывает развитие толерантности к замораживанию независимо от фотопериодической акклиматизации. Наши результаты также демонстрируют, что ABA и DHN по-разному регулируются при SD и LT, и предполагают их участие в обоих типах акклиматизации.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Сверхэкспрессия PhyA приводит к изменению привычки к росту в условиях длительного светового дня (LD) и SD

В предыдущем исследовании Olsen et al.(1997) представили трансгенные линии гибридных осин, сверхэкспрессирующих ген PHYA овса . В отличие от дикого типа (WT), трансгенная линия 22, сверхэкспрессирующая ген PHYA овса , не отвечала на SD прекращением роста или зачатком апикальной почки. Другая трансгенная линия (8) имела очень низкий уровень экспрессии гена PHYA овса и реагировала на SD так же, как и WT (Olsen et al., 1997). Мы хотели изучить, имеют ли WT и линия 22 такие же характеристики роста при LT при LD и при SD.В условиях LD рост WT был быстрее по сравнению с PHYA , сверхэкспрессирующим линию 22 (фиг. 1A), хотя процентное увеличение высоты было примерно одинаковым в обеих линиях (данные не показаны). LT (4 ° C) немедленно предотвращал рост WT и линии 22, и рост восстанавливался до нормального через 1 день после того, как растения были переведены обратно в 18 ° C (фиг. 1A). В условиях SD рост WT прекращался через 3 недели (фиг. 1B), и терминальная почка формировалась на всех растениях WT через 4 недели (фиг. 1C).Линия 22 продолжала рост SD даже более энергично, чем LD (рис. 1B), предполагая, что прекращение роста при SD не было связано, например, с истощением фотосинтетическая энергия, но это был феномен, контролируемый развитием. Линия 22 не образовывала терминальную почку при SD (фиг. 1D), а также LT не индуцировала образование терминальной почки даже после 5 недель воздействия 0,5 ° C в любой из линий (данные не показаны). Взятые вместе, эти результаты показывают, что гибридная осина по-разному воспринимает сигналы SD и LT. Оба экологических сигнала приводят к прекращению роста, но при SD это происходит из-за медленного перехода развития от вегетативного роста к состоянию покоя, тогда как LT препятствует удлинению роста растений более непосредственно без индукции покоя.

Рис. 1.

Характеристики роста гибрида осины WT и линии 22, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . A, рост WT (●) и линия 22 (○) при LD (16 часов, 18 ° C) и LT (16 часов, 4 ° C). Продолжительность лечения LT отмечена белой полосой. B, рост WT (●) и линия 22 (○) при SD (10 ч, 18 ° C). C, терминальная почка WT и D, вершина линии 22 после 3 недель обработки SD (10 ч, 18 ° C). Значения — это средние значения от трех до пяти деревьев. Вертикальные полосы представляют ± se.

Рис. 1.

Характеристики роста гибрида осины WT и линии 22, сверхэкспрессирующей ген овса PHYA . A, рост WT (●) и линия 22 (○) при LD (16 часов, 18 ° C) и LT (16 часов, 4 ° C). Продолжительность лечения LT отмечена белой полосой. B, рост WT (●) и линия 22 (○) при SD (10 ч, 18 ° C). C, терминальная почка WT и D, вершина линии 22 после 3 недель обработки SD (10 ч, 18 ° C). Значения — это средние значения от трех до пяти деревьев. Вертикальные полосы представляют ± se.

Сверхэкспрессия PhyA и LT предотвращают обезвоживание зимующих тканей

Развитие покоя характеризуется исчезновением бесклеточной воды (Faust et al., 1991). Было показано, что фитохром опосредует это обезвоживание, что может быть связано с наблюдаемым увеличением толерантности к замораживанию во время SD (McKenzie et al., 1974). Мы хотели изучить, связана ли дегидратация тканей только с акклиматизацией, вызванной SD, или она также вызвана LT.Поэтому мы измерили содержание воды в бутонах и междоузлиях после 5 и 10 недель воздействия LD и SD при 18 ° C и после последующих 5 недель воздействия 0,5 ° C при соответствующей продолжительности светового дня. Содержание воды в междоузлиях показано на Рисунке 2, содержание воды в бутонах соответствовало аналогичной схеме (данные не показаны). Перенос растений на SD при 18 ° C привел к значительному снижению содержания воды в междоузлиях в WT и строке 8; через 10 недель содержание воды уменьшилось на 30% (мас. / мас.) в обеих линиях (рис.2). Линия 22 не реагировала на SD, и содержание воды в этой строке оставалось на том же уровне, что и в LD на протяжении всего периода исследования. LT не приводил к снижению содержания воды в условиях LD, и если растения были переведены на LT после 5 недель воздействия SD, дальнейшее обезвоживание было предотвращено (рис. 2). Взятые вместе, эти результаты показывают, что снижение содержания воды в зимующих тканях опосредовано phyA. Это обезвоживание характерно для акклиматизации, вызванной SD, и является активным процессом, которому способствует высокая температура.

Рис. 2.

Содержание воды в межузловых сегментах WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . Растения выращивали 5 недель в условиях LD (16 часов, 18 ° C) или SD (10 часов, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переводили в LT (0,5 ° C). в течение 5 недель при соответствующей продолжительности светового дня. Цифры относятся к продолжительности лечения в неделях. Вертикальные полосы представляют ± se. Значимые отличия не менее 0.05 уровень достоверности между разными видами лечения в каждой строке отмечен разными буквами.

Рис. 2.

Содержание воды в межузловых сегментах WT, линии 8 и линии 22 гибридной осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса . Растения выращивали 5 недель в условиях LD (16 часов, 18 ° C) или SD (10 часов, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переводили в LT (0,5 ° C). в течение 5 недель при соответствующей продолжительности светового дня. Цифры относятся к продолжительности лечения в неделях.Вертикальные полосы представляют ± se. Значительные различия уровня достоверности не менее 0,05 между разными видами лечения в каждой строке отмечены разными буквами.

Влияние сверхэкспрессии phyA на устойчивость к замерзанию стебля и листьев

Было показано Olsen et al. (1997), что избыточное производство овса PHYA эффективно предотвращало холодовую акклиматизацию стебля гибридной осины, когда растения акклиматизировались в SD с последующей LT. Это объяснялось неспособностью трансгенных линий прекращать рост, что, как было показано, является предпосылкой для фотопериодической холодовой акклиматизации древесных растений (Fuchigami et al., 1971; Хунттила и Каурин, 1990). Однако, если древесные растения подвергаются прямому воздействию LT в условиях LD, они могут акклиматизироваться без развития состояния покоя (Christersson, 1978; Li et al., 2002). Мы хотели изучить, может ли LT в условиях LD вызывать акклиматизацию у трансгенной гибридной осины и существуют ли тканеспецифические различия в способности акклиматизации между этими двумя стратегиями акклиматизации. В соответствии с предыдущими результатами, линия 22 была серьезно нарушена при фотопериодической индукции толерантности к замораживанию.SD не вызывал развития морозостойкости ни листовой, ни стеблевой ткани (рис. 3 и 4). Напротив, воздействие SD привело к значительному увеличению морозостойкости стеблей WT и линии 8 (рис. 3 и 4) и некоторому увеличению листьев WT (рис. 4). Только LT (0,5 ° C) под LD увеличивало устойчивость к замерзанию стебля всех линий в некоторой степени (рис. 3), но немного более высокая температура (4 ° C) была более эффективной для индукции устойчивости к замерзанию (рис. 4). . В частности, листья линии 22 эффективно акклиматизировались при обработке LT (рис.4). Наиболее эффективной обработкой, индуцирующей устойчивость к замерзанию стебля WT и линии 8, была SD, за которой следовала LT, но в этих условиях линия 22 не развивала устойчивости к замерзанию (фиг. 3). Результаты показывают, что SD и LT могут независимо вызывать холодовую акклиматизацию гибридной осины. Акклимация, индуцированная SD, опосредуется phyA и работает в основном в зимующих тканях, но индуцированная LT акклиматизация также наблюдается в листьях, и для нее не требуется phyA.

Рис. 3.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на морозостойкость стебля WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса .Растения выращивали в течение 5 недель в условиях LD (●; 16 ч, 18 ° C) или SD (○; 10 ч, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переносили при 0,5 ° C на 5 недель в условиях LD (; 16 ч, 0,5 ° C) или SD (; 10 ч, 0,5 ° C). LT ₅₀ показывает температуру, при которой погибла половина стеблей.

Рис. 3.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на устойчивость к замерзанию стебля WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины, сверхэкспрессирующей ген овса PHYA .Растения выращивали в течение 5 недель в условиях LD (●; 16 ч, 18 ° C) или SD (○; 10 ч, 18 ° C), после чего их оставляли при той же температуре на 5 недель или переносили при 0,5 ° C на 5 недель в условиях LD (; 16 ч, 0,5 ° C) или SD (; 10 ч, 0,5 ° C). LT ₅₀ показывает температуру, при которой погибла половина стеблей.

Рис. 4.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на устойчивость к замораживанию листа и стебля осины WT и гибридной линии 22 осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса .Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их переводили в условия SD (10 часов, 18 ° C) на 3 недели или в LT в условиях LD (16 часов, 4 ° C) на 1 неделю. , после чего измеряли устойчивость к замерзанию. LT ₅₀ показывает температуру 50% утечки электролитов.

Рис. 4.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на устойчивость к замораживанию листа и стебля осины WT и гибридной линии 22 осины, сверхэкспрессирующей ген PHYA овса .Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их переводили в условия SD (10 часов, 18 ° C) на 3 недели или в LT в условиях LD (16 часов, 4 ° C) на 1 неделю. , после чего измеряли устойчивость к замерзанию. LT ₅₀ показывает температуру 50% утечки электролитов.

Дифференциальное регулирование ABA и DHN по SD и LT

Считается, что

ABA играет важную роль в толерантности к обезвоживанию и стрессу (Chandler and Robertson, 1994).Чтобы выяснить роль АБК в развитии толерантности к замораживанию, мы изучили регуляцию ее уровней во время акклиматизации в условиях SD и LT. При 18 ° C уровни АБК были значительно выше в условиях LD, чем в условиях SD, в почках WT и линии 8 (Таблица I). Содержание АБК в почек линии 22 было примерно одинаковым при SD и LD и значительно ниже, чем в строке 8 или в WT (Таблица I). Через 7 недель в условиях SD при 18 ° C уровни АБК были примерно одинаковыми во всех линиях, но с 7 по 10 неделю уровни снизились в строке 8 и WT и увеличились в строке 22.Воздействие 0,5 ° C в течение 2 недель привело к значительному увеличению уровней АБК во всех линиях под SD; в условиях LD уровни увеличивались в WT и строке 22 и немного снижались в строке 8 (Таблица I). После 3 дополнительных недель при 0,5 ° C уровни значительно снизились как при LD, так и при SD во всех трех линиях (Таблица I). Эти результаты предполагают, что фотопериод и температура по-разному регулируют уровень АБК, и хотя фотопериодическая регуляция линии 22 была нарушена, эта линия реагировала на LT таким же образом, как и WT.

Таблица I.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на содержание АБК в почках WT, линии 8 и линии 22 гибридной осины со сверхэкспрессией овса PHYA

9065 4,4 9047 9047 909 SD

9065 9065

2,58 9047

SD

Таблица I.

Влияние продолжительности светового дня и температуры на содержание АБК в почках WT, линии 8 и линии 22 гибридной осины со сверхэкспрессией овса PHYA

9065 9047 9047 9047 SD 2,53

Растения повышают свою способность переносить стрессы окружающей среды за счет изменений в экспрессии генов (Thomashow, 1999). DHN широко изучается в исследованиях по акклиматизации к холоду, поскольку считается, что они способствуют защите клеточных органелл во время вызванной замораживанием клеточной дегидратации (Campbell and Close, 1997). Чтобы выяснить роль DHN в SD- и LT-индуцированной акклиматизации, мы изучили изменения в экспрессии гена DHN в гибридной осине.В качестве модельного гена мы использовали DHN DSP16 из Craterostigma plantagineum Hochst. (Piatkowski et al., 1990), который использовали в качестве зонда в нозерн-блотах. Характер экспрессии гомологичных генов DHN в почках, стебле и верхушке гибридной осины со сверхэкспрессией овса PHYA охарактеризован в условиях LD и SD при 18 ° C и 0,5 ° C. Паттерны экспрессии DHN в разных тканях были сходными, поэтому показаны только результаты для верхушки. Транскрипты DHN были индуцированы 3-недельным воздействием SD при 18 ° C в WT и в линии 8, тогда как в строке 22 количество транскриптов DHN было таким же, как в контроле LD, даже после 10 недель в условиях SD. (Рисунок.5). Напротив, LT увеличивал уровень транскрипта DHN как в трансгенных линиях, так и в WT в условиях LD и SD (фиг. 5).

Рис. 5.

Нозерн-блоттинг-анализ экспрессии гена DHN, гомологичного DSP16 из C. plantagineum (Piatkowski et al., 1990) в вершине WT, линии 8 и линии 22 гибрид осины, сверхэкспрессирующий ген PHYA овса . Растения выращивали в условиях LD (16 ч, 18 ° C), после чего подвергали LT (16 ч, 0.5 ° C), SD (10 ч, 18 ° C) или SD с последующей обработкой LT (10 ч, 0,5 ° C). Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях. Гистограмма показывает нормализованные значения DSP16 (после стандартизации по интенсивности рибосомного сигнала), представленные как процент от наивысшего значения.

Рис. 5.

Нозерн-блоттинг-анализ экспрессии гена DHN, гомологичного DSP16 из C. plantagineum (Piatkowski et al., 1990) на вершине WT, линии 8 и линии 22 гибрид осины, сверхэкспрессирующий ген PHYA овса .Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их подвергали LT (16 часов, 0,5 ° C), SD (10 часов, 18 ° C) или SD, а затем LT (10 часов, 18 ° C). 0,5 ° C) обработка. Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях. Гистограмма показывает нормализованные значения DSP16 (после стандартизации по интенсивности рибосомного сигнала), представленные как процент от наивысшего значения.

В вестерн-блот-анализе мы использовали поликлональные антитела, которые были индуцированы против синтетического полипептида, соответствующего продукту того же гена DSP16 (Piatkowski et al., 1990). Результаты вестерн-блоттинга почек, стебля и верхушки были аналогичными, поэтому показаны только репрезентативные результаты для ткани почек. Антитело распознает ряд конститутивно экспрессируемых белков в почках. Кроме того, экспрессия белка массой 30 кДа коррелировала с экспрессией гена, гомологичного DSP16 (фиг.6). Подобно транскрипту DHN, экспрессия 30-кДа DHN-родственного белка (DRP) постепенно повышалась в течение 10-недельного периода исследования в условиях SD у WT и в линии 8, но его уровень оставался на уровне контроля LD. в строке 22 (рис.6). Напротив, LT увеличивал уровень DRP 30 кДа во всех линиях, а также в линии 22, как в условиях LD, так и в условиях SD. Индукция с помощью LT была намного быстрее, чем индукция с помощью SD; через 2 недели при 0,5 ° C количество DRP 30 кДа было таким же, как после 10 недель обработки SD у WT и линии 8. SD и LT также оказали аддитивный эффект на накопление белка DHN у WT и линии 8 (фиг. .6). Взятые вместе, эти результаты показывают, что как SD-, так и LT-индуцированная акклиматизация сопровождается экспрессией гена DHN.Дифференциальное накопление DHN в линии 22 с помощью SD или LT показывает, что эти экологические сигналы независимо индуцируют экспрессию гена дегидрина.

Рис. 6.

Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии DHN-подобных белков в почках WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины со сверхэкспрессией овса PHYA . Растения выращивали в условиях LD (16 часов, 18 ° C), после чего их подвергали LT (16 часов, 0,5 ° C), SD (10 часов, 18 ° C) или SD, а затем LT (10 часов, 18 ° C). 0,5 ° C) обработка. Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях.Слева указаны молекулярные массы стандартов белка. Поликлональное антитело было продуцировано против синтетического полипептида из клона pcC 6-19 C. plantagineum (Schneider et al., 1993), соответствующего гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990).

Рис. 6.

Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии DHN-подобных белков в почках WT, линии 8 и линии 22 гибрида осины со сверхэкспрессией овса PHYA . Растения выращивали в условиях LD (16 ч, 18 ° C), после чего подвергали LT (16 ч, 0.5 ° C), SD (10 ч, 18 ° C) или SD с последующей обработкой LT (10 ч, 0,5 ° C). Цифры указывают на продолжительность лечения в неделях. Слева указаны молекулярные массы стандартов белка. Поликлональное антитело было продуцировано против синтетического полипептида из клона pcC 6-19 C. plantagineum (Schneider et al., 1993), соответствующего гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990).

ОБСУЖДЕНИЕ

Наши результаты показывают, что два разных фактора окружающей среды, SD и LT, независимо вызывают холодовую акклиматизацию гибридной осины.Мы смогли проанализировать эти два пути, используя трансгенный гибрид осины линии 22, сверхэкспрессирующий ген PHYA овса . Эта линия не ответила на SD акклиматизацией к холоду, тогда как WT и трансгенная линия 8, в которых экспрессия PHYA овса была незначительной (Olsen et al., 1997), акклиматизировались к холоду в течение 3 недель при SD при 18 ° C ( Рис.3 и 4). Однако при LT (4 ° C) и LD, особенно листья линии 22 были способны акклиматизироваться в степени, сравнимой с WT (рис. 4). Наши результаты подтверждают идею о том, что восприятие SD-сигнала при акклиматизации древесных растений к холоду опосредуется через phyA (Williams et al., 1972; McKenzie et al., 1974; Olsen et al., 1997) и предполагают, что индуцированная LT акклиматизация не зависит от этого механизма.

Хотя SD- и LT-индуцированная акклиматизация имеет некоторые общие компоненты, механизм, лежащий в основе этих стратегий акклиматизации, был другим. Наиболее заметным различием было участие покоя в индуцированной SD акклиматизации и противоположный эффект LT на развитие этого покоя. Одним из ключевых факторов покоя было снижение влажности перезимовавших тканей.Было показано, что обезвоживание является неотъемлемой частью развития покоя почек (см. Rohde et al., 2000). С другой стороны, было показано, что обезвоживание, вызванное SD, коррелирует с повышенной толерантностью к замораживанию (McKenzie et al., 1974; Junttila and Kaurin, 1990). Мы предполагаем, что, хотя обезвоживание связано с развитием покоя, оно является одним из ключевых факторов, повышающих устойчивость к замораживанию в условиях SD, и является предпосылкой для максимальной устойчивости во время последующей обработки LT. В строке 22 не наблюдалось снижения содержания воды в почках или междоузлиях, и устойчивость стебля к замерзанию не увеличивалась в условиях SD или при последующей обработке LT (рис.3). Напротив, уменьшение содержания воды в бутонах и междоузлиях у WT и линии 8 коррелировало с повышенной морозостойкостью при SD (рис. 2 и 3). Обезвоживание может напрямую повысить толерантность к замораживанию за счет осмотической адаптации (Levitt, 1980; Sakai and Larcher, 1987) или может вызвать адаптивные реакции, которые косвенно повышают толерантность к замораживанию (Guy et al., 1992; Xiong et al., 1999). Уменьшение содержания воды в условиях SD может частично быть следствием накопления сухого вещества, например.грамм. белки и углеводы (Levitt, 1980). Sauter et al. (1996), например, показали, что накопление крахмала в условиях SD и его преобразование в сахара при LT необходимы для правильной акклиматизации тополя. В заключение, прекращение роста, опосредованное phyA, приводит к снижению содержания воды и накоплению запасов, которые затем используются во время последующего LT для достижения максимальной устойчивости к замораживанию. Неспособность линии 22 осушать и накапливать запасы в SD частично объясняет ее неспособность акклиматизироваться в SD и во время последующих LT условий.

DHN, как полагают, выполняет защитные функции в клетках растений против стрессов, вызванных дегидратацией (Campbell and Close, 1997). Мы изучили роль DSP16 -подобных DHN в SD- и LT-индуцированной акклиматизации гибридной осины к холоду. Неспособность линии 22 накапливать DSP16 -подобный DHN при SD (фиг. 5 и 6) указывает на то, что phyA участвует в фотопериодической регуляции этого гена. Медленное накопление DSP16 -подобного DHN во время SD у WT и линии 8 предполагает, что эта регуляция является непрямой, возникающей в результате медленной дегидратации цитоплазмы.Однако LT (0,5 ° C) индуцировал сильное и быстрое накопление транскрипта и белка DHN во всех трех линиях в условиях LD и SD (рис.5 и 6), показывая, что LT индуцирует отдельный путь, который не зависит от действия phyA . Более ранние исследования показали, что DHN накапливаются в древесных растениях в ответ на SD (Welling et al., 1997; Rinne et al., 1998) и LT (Levi et al., 1999; Richard et al., 2000). Мы смогли показать, что эти экологические сигналы независимо индуцируют экспрессию гена DHN.Это соответствует Artlip et al. (1997), которые предположили, что LT и SD индуцируют различные пути передачи сигнала в экспрессии гена DHN у персика.

Было показано, что накопление DHN следует за сезонными изменениями у многих древесных видов, что поставило вопрос о том, связаны ли они с покоем или морозостойкостью (Wisniewski et al., 1996; Rinne et al., 1998; Sauter et al. ., 1999). Мы предполагаем, что DSP16 -подобный DHN играет роль как в развитии покоя, так и в развитии устойчивости к замерзанию у гибридных осин.В условиях SD накопление DSP16 -подобных DHN коррелировало с развитием покоя (рис. 1), обезвоживанием почек и стебля (рис. 2) и повышением устойчивости к замораживанию (рис. 3). В условиях LD, LT-индуцированное накопление DSP16 -подобного DHN коррелирует исключительно с толерантностью к замораживанию, потому что LT не индуцирует развитие покоя (Fig. 1). Следовательно, оба этих экологических сигнала индуцируют экспрессию DSP16 -подобного DHN, который затем может обеспечивать защиту от обезвоживания как во время развития покоя, так и во время замораживания.Интересно, что стебли линии 22 не могли акклиматизироваться при воздействии LT в условиях SD, хотя они были способны накапливать низкие уровни DSP16 -подобного DHN в этих условиях. Это демонстрирует сложность холодовой акклиматизации гибридной осины и предполагает, что у древесных растений вторая стадия акклиматизации требует как SD, так и LT сигналов.

АБК считается одним из ключевых регуляторов реакции акклиматизации к холоду (Heino et al., 1990; Lång et al., 1994; Tamminen et al., 2001). Кратковременное увеличение содержания АБК, предшествующее акклиматизации, у тех видов, которые способны к акклиматизации, является одним из первых событий в процессе акклиматизации (Chen et al., 1983; Lång et al., 1994). У березы ( Betula pubescens Ehrh.) Кратковременное повышение содержания АБК наблюдается в течение 1-й недели лечения SD (Welling et al., 1997; Rinne et al., 1998). Мы смогли показать, что у древесных растений содержание АБК контролируется разными механизмами во время SD- или LT-индуцированной акклиматизации. Фотопериод явно влиял на содержание АБК в почках у WT и линии 8, но в строке 22 уровень АБК был примерно одинаковым для обеих длин светового дня (Таблица I).Однако LT индуцировал временное увеличение содержания АБК во всех линиях (Таблица I). Более высокие или аналогичные уровни ABA в LT в строке 22 по сравнению с WT и линией 8 продемонстрировали, что линия 22 не испытывала недостатка в синтезе ABA, а, скорее, была неспособна реагировать на фотопериодический сигнал. Эти результаты предполагают, что phyA участвует в фотопериодической регуляции уровня ABA, но при LT уровень ABA регулируется другим механизмом.

Наши результаты показывают, что деревья воспринимают сигнал SD и LT по отдельности и что оба фактора окружающей среды могут запускать акклиматизацию к холоду независимо.Результаты показывают, что образование апикальных зачатков, опосредованное phyA, при SD является «главным переключателем», который переводит метаболизм от вегетативного роста к состоянию покоя и к индукции толерантности к замораживанию. Обезвоживание перезимовавших тканей и накопление белков, особенно DHN во время SD, являются важными факторами во время фотопериодической акклиматизации. Без этих изменений древесные растения не смогут достичь максимальной морозостойкости в последующем LT. Напротив, LT-индуцированное развитие толерантности к замораживанию и регуляция уровней DHN и ABA не зависели от phyA на LD, что свидетельствует о наличии отдельных, но взаимодействующих путей акклиматизации к холоду.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Растительный материал

В экспериментах использовали две трансгенные линии гибридной осины ( Populus tremula × Populus tremuloides Michx.), Экспрессирующие ген овса ( Avena sativa ) PHYA вместе с WT. Линия 22 показывает сильную эктопическую экспрессию овса PHYA , которая приводит к уменьшению длины междоузлий в условиях LD по сравнению с WT.Линия 22 также снизила чувствительность к SD, проявляясь как непрерывный рост в условиях SD, тогда как WT прекращает рост и образует терминальную почку. Экспрессия овса PHYA в строке 8 незначительна, и его ростовые реакции в разные фотопериоды аналогичны WT (Olsen et al., 1997).

Условия роста растений и экспериментальный план

Растения размножали с помощью культуры побегов in vitro и после этого выращивали в камерах с контролируемой средой при 18 ° C (± 0.5 ° C) при фотопериоде 16 ч в течение примерно 6 недель перед использованием в экспериментах. Плотность потока фотонов светового периода составляла от 150 до 200 мкмоль · м ⁻² с ⁻¹ при длине волны от 400 до 700 нм (флуоресцентные лампы TL 65W / 83, Philips, Эйндховен, Нидерланды). Влажность в камерах для выращивания доводили до дефицита давления водяного пара 0,5 кПа. Растения ежедневно поливали полноценным питательным раствором (Junttila, 1976). Сначала растения выращивали в течение 5 недель при 18 ° C (± 0,5 ° C) в короткий (10 часов, стандартное отклонение) или длительный (16 часов, LD) фотопериод.Затем половину растений в соответствующие фотопериоды переносили в LT (0,5 ° C) на 5 недель. Остальные растения хранили при 18 ° C. Дополнительный краткосрочный эксперимент был проведен с растениями WT и линии 22 для проверки морозостойкости стебля и листьев. Микроразмножающиеся растения выращивали в теплице при LD (16 ч в день, 18 ° C) в течение 5 недель перед экспериментами. Часть растений подвергали 3-недельной обработке SD в теплице путем уменьшения продолжительности светового дня до 10 ч с помощью занавесок; температура была доведена до 18 ° C.Для обработки LT часть растений перемещали в камеру для выращивания. Через неделю адаптации температуру снизили до 4 ° C, а продолжительность светового дня поддерживали на уровне 16 часов. Прекращение апикального роста и формирование терминальной почки отслеживали на протяжении всего периода исследования.

Сбор проб и определение содержания воды

В каждый момент времени были собраны разные типы образцов: (а) почки от узлов с 3 по 12, (b) соответствующие междоузлия вдоль почки и (c) вершина (терминальная почка с 1-2 см стебля под ней).От каждого генотипа и обработки были собраны два параллельных набора образцов, и каждая параллель состояла из двух растений. Два таких образца почек (3–5) и междоузлий (2–3) были взяты для определения содержания воды. Остальные образцы были разделены на две части, заморожены в жидком азоте и хранились при -80 ° C перед использованием для анализа ABA и экспрессии генов. Содержание воды в бутонах и междоузлиях измеряли через 5 и 10 недель эксперимента. Сухую массу образцов измеряли после сушки в течение 24 ч при 80 ° C.Относительное содержание воды рассчитывали по формуле [(свежий вес — сухой вес) / свежий вес] × 100%.

Содержание ABA в бутонах

образцов почек для анализа ABA были собраны через 7 и 10 недель эксперимента. В то время деревья выращивали при 18 ° C в течение 16- или 10-часового фотопериода в течение 7 и 10 недель или при 0,5 ° C в течение 2 и 5 недель при соответствующей продолжительности светового дня. Образцы взвешивали (свежий вес), замораживали в жидкости N ₂ и сушили вымораживанием, чтобы получить сухой вес.Образцы экстрагировали в течение 1 ч при 4 ° C в 0,5 мл 50 мМ натрий-фосфатного буфера, pH 7,0, с 0,02% (мас. / Об.) Na-диэтилдитиокарбаматом в качестве антиоксиданта и [ ² H ₄ ] ABA в качестве внутренний стандарт. После центрифугирования pH супернатанта доводили до 2,7, и ABA связывали с Amberlite XAD-7 путем встряхивания в течение 30 минут при 4 ° C. Буфер удаляли, и Amberlite XAD-7 дважды промывали 2 мл 1% (об. / Об.) Уксусной кислоты. Смолу сушили в Speed ​​Vac, и ABA элюировали из Amberlite XAD-7 дважды 2 мл дихлорметана путем встряхивания в течение 30 минут при 4 ° C.Дихлорметан выпаривали в Speed-Vac, образцы метилировали и анализировали с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии с использованием мониторинга выбранных ионов.

Устойчивость к замерзанию стебля и листьев

Испытания на замораживание проводились с сегментами стебля, включая почки; каждая температура испытания состояла из двух параллелей с пятью сегментами стержня. Стебли были испытаны на замораживание в контролируемых условиях с использованием скорости замораживания 3 ° C h ^-1 до -17 ° C и далее при 10 ° C h ^-1 .Образцы удаляли с интервалом 4 ° C. После оттаивания в течение ночи при 6 ° C образцы инкубировали при 18 ° C между влажными бумажными полотенцами и повреждение оценивали визуально. Устойчивость к замерзанию листьев и соответствующих стеблей измеряли в контролируемой замораживающей ванне, а повреждение определяли методом утечки электролита, как описано у Lång et al. (1989). Образец листа представлял собой листовой диск диаметром 1,5 см, вырезанный с обеих сторон средней жилки двух самых верхних взрослых листьев. Морозостойкость стебля измеряли по 10-сантиметровой части стебля, расположенной на 3 см ниже верхушечной почки.Образцы были завернуты в Miracloth и помещены в пробирки в контролируемую замораживающую баню. После начала образования льда при -1,5 ° C температура бани была снижена на 2 ° C ч ^-1 . Образцы отбирали с интервалами 2 ° C и оставляли на ночь таять во льду при 4 ° C. Электропроводность (R0) измеряли после встряхивания (200 об / мин) образцов в 40 мл деионизированной воды в течение 2 ч при комнатной температуре. Для измерения общей проводимости (R1) образцы умерщвляли кипячением в течение 30 мин, а после охлаждения до комнатной температуры повторно экстрагировали встряхиванием в течение 2 ч при 200 об / мин в исходном растворе.Утечка ионов рассчитывалась как R0 / R1 × 100%. Установки с утечкой 50% (LT ₅₀ ) или более от общего количества растворенных веществ считались мертвыми.

Анализ выделения и гибридизации РНК

Суммарную РНК из почек, стебля и верхушки очищали, как описано Verwoerd et al. (1989). Образцы замораживали в жидком N ₂ , гомогенизировали до мелкого порошка в ступке с помощью пестика и экстрагировали в 500 мкл горячего (80 ° C) фенольного буфера (1: 1 фенол: [100 мМ LiCl, 100 мМ Tris , pH 8.0, 10 мМ ЭДТА и 1% (мас. / Об.) SDS]) встряхиванием в течение 60 с. Образцы дважды экстрагировали 250 мкл смеси хлороформ: изоамиловый спирт 1:24, и РНК осаждали 2 м раствора LiCl при 4 ° C. Полученный осадок растворяли в воде и осаждали этанолом. Концентрацию РНК измеряли с помощью спектрофотометра, и 10 мкг общей РНК денатурировали и разделяли на формальдегид-агарозном геле (Sambrook et al., 1989). После капиллярного переноса на положительно заряженную нейлоновую мембрану (Roche Molecular Biochemicals, Мангейм, Германия) РНК иммобилизовали на мембране путем запекания.

I-фрагмент Pst длиной 800 п.н. клона кДНК pcC6-19 DHN из Craterostigma plantagineum Hochst., Соответствующий гену DSP16 (Piatkowski et al., 1990), был использован в качестве зонда. северное блоттинг. Фрагмент содержал последовательности, соответствующие N-концевой консенсусной последовательности DEYGNP, повторению Ser и двум копиям предполагаемого амфипатического домена, образующего α-спираль, KIKELPGH (Piatkowski et al., 1990). Зонд метили [α- ³² P] dCTP с использованием набора для маркировки Ready-To-Go (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) и очищали на микроколонках ProbeQuant G-50 (Amersham Pharmacia Biotech).Мембраны гибридизовали в течение ночи при 55 ° C в модифицированном фосфатном буфере (Church and Gilbert, 1984), содержащем 7% (мас. / Об.) SDS и 500 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 7,2. Промывку мембран после гибридизации проводили при 55 ° C согласно Черч и Гилберту (1984). Сигналы на фильтре количественно оценивали сканером BAS 1500 (Fuji Photo Film, Токио), и рибосомный ген 18S использовали в качестве гетерологичного зонда для оценки различий в загрузке образцов.

Анализ белка

Образцы почек, коры или верхушек измельчали ​​в пробирках Эппендорфа с буфером для экстракции (50 мм Трис, основание, 0.1% [мас. / Об.] SDS и 200 мм DTT) и центрифугировали при 10000 g дважды в течение 10 мин. Содержание белка измеряли с помощью процедуры микроанализа для микротитровальных планшетов (Bio-Rad, Hercules, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Пятнадцать микрограммов белка разбавляли загрузочным буфером Towbin и разделяли с помощью SDS-PAGE, как описано ранее (Welling et al., 1997). Были запущены два параллельных геля. Один был окрашен 0,1% (мас. / Об.) Кумасси бриллиантовым синим R-250 в 40% (об. / Об.) Метаноле и 10% (об. / Об.) Уксусной кислоте для обеспечения равной нагрузки на дорожку.Для иммуноблоттинга белки из параллельных неокрашенных гелей подвергали электроблоттингу на нитроцеллюлозных мембранах 0,45 мкм (Micron Separations, Westborough, MA), как описано ранее (Welling et al., 1997). Мембрану зондировали в течение ночи в разведении 1: 1000 с поликлональным антителом, которое было индуцировано против синтетического полипептида из клона pcC6-19 из C. plantagineum (Schneider et al., 1993), соответствующего гену DSP16 (Piatkowski et al. др., 1990).

Статистический анализ

Влияние продолжительности светового дня, линии и температуры на содержание АБК анализировали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA).Однофакторный дисперсионный анализ ANOVA был использован для проверки значительной разницы в содержании воды между различными обработками внутри линий.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим доктора Доротею Бартельс (Max-Planc-Institut, Кельн, Германия) за подарок клона pcC6-19 и соответствующего антитела. Мы благодарим доктора Пекку Хейно и доктора Маркку Аалто (Университет Хельсинки) за полезные замечания по рукописи.

ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

1

Сезонная экспрессия гена дегидрина у родственников лиственных и вечнозеленых генотипов персика ( Prunus persica [L.] Партия.).

Завод Мол Биол

33

1997

61

70

2

Дегидрины: гены, белки и ассоциации с фенотипическими признаками.

Новый Фитол

137

1997

61

74

3

Экспрессия гена, регулируемая абсцизовой кислотой, и ее отношение к стрессоустойчивости.

Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol

45

1994

113

141

4

Участие абсцизовой кислоты в холодовой акклиматизации картофеля.

Физиология растений

71

1983

362

365

5

Влияние фотопериода и температуры на развитие морозостойкости проростков Pinus silvestris и Picea abies .

Физиологический завод

44

1978

288

294

6

Геномное секвенирование.

Proc Natl Acad Sci USA

81

1984

1991

1995

7

Накопление кислого дегидрина вблизи плазматической мембраны во время акклиматизации пшеницы к холоду.

Растительная клетка

10

1998

623

638

8

Изучение роли фитохрома А и гиббереллинов в росте в условиях длинного и короткого дня на гибридной осине. Кандидатская диссертация.

2000

Шведский университет сельскохозяйственных наук

Умео

9

Связанная и свободная вода в спящих бутонах яблони: теория эндодормальности.

HortScience

26

1991

887

890

10

Индукция холодовой акклиматизации Cornus stolonifera Michx.

Физиология растений

47

1971

98

103

11

Белки, отвечающие за состояние гидратации, связывают в шпинате стрессы от холода и засухи.

Планта

188

1992

265

270

12

Дефицит абсцизовой кислоты предотвращает развитие морозостойкости у Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.

Theor Appl Genet

79

1990

801

806

13

Молекулярные основы устойчивости растений к обезвоживанию.

Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol

47

1996

377

403

14

Очистка и частичная характеристика дегидрина, участвующего в толерантности к холоду во время появления всходов вигны.

Физиология растений

120

1999

237

244

15

Прекращение апикального роста и опадание кончика побега Salix .

Физиологический завод

38

1976

278

286

16

Экологический контроль акклиматизации к холоду Salix pentandra .

Scand J для Res

5

1990

195

204

17

Низкотемпературная акклиматизация и обработка экзогенной абсцизовой кислотой индуцируют общие полипептиды у Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.

Theor Appl Genet

77

1989

729

734

18

Изменения водного статуса, содержания эндогенной абсцизовой кислоты и экспрессии гена rab18 во время развития морозостойкости у Arabidopsis thaliana .

Физиология растений

104

1994

1341

1349

19

Комплементарное клонирование ДНК, секвенирование и экспрессия необычного дегидрина из цветочных почек черники.

Физиологический завод

107

1999

98

109

20

Реакция растений на стрессы окружающей среды: переохлаждение, замерзание и высокотемпературные стрессы

1

1980

Academic Press

Нью-Йорк

21

Li C, Puhakainen T, Welling A, Viherä-Aarnio A, Ernstsen A, Junttila O, Heino P, Palva ET (2002) Холодная акклиматизация у березы повислой ( Betula pendula Roth.): развитие морозостойкости в разных тканях и климатических экотипах. Physiol Plant (в печати)

22

Влияние красного и дальнего красного света на начало холодовой акклиматизации у Cornus stolonifera Michx.

Физиология растений

53

1974

783

789

23

Эктопическая экспрессия фитохрома А овса в гибридной осине изменяет критическую продолжительность светового дня для роста и препятствует акклиматизации к холоду.

Завод J

12

1997

1339

1350

24

Характеристика пяти клонов кДНК, чувствительных к абсцизовой кислоте, выделенных из устойчивого к высыханию растения Craterostigma plantagineum и их взаимосвязи с другими генами водного стресса.

Физиология растений

94

1990

1682

1688

25

Фитохром: активируемый светом молекулярный переключатель, который регулирует экспрессию генов растений.

Annu Rev Genet

25

1991

389

409

26

Выделение и характеристика гена дегидрина белой ели, индуцированного ранениями, засухой и холодом.

Завод Мол Биол

43

2000

1

10

27

Начало морозостойкости у березы ( Betula pubescens Ehrh.) включает в себя белки LEA и осморегуляцию и нарушается при генотипе с дефицитом ABA.

Среда растительных клеток

21

1998

601

611

28

Дегидрины в акклиматизированных к холоду верхушках березы ( Betula pubescens Ehrh.): Продукция, локализация и потенциальная роль в восстановлении функции ферментов во время обезвоживания.

Планта

209

1999

377

388

29

Молекулярные аспекты покоя почек деревьев.

Молекулярная биология древесных растений

1

2000

89

134

Kluwer Academic Publisher

Дордрехт, Нидерланды

30

Морозостойкость растений: реакции и адаптация к морозному стрессу.

1987

Springer-Verlag

Берлин

31

Молекулярное клонирование

Эд 2

1989

Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор

Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк

32

Иммунологическая идентификация белков, связанных с дегидрином, в древесине пяти видов Populus и Salix caprea L.

Дж. Физиол растений

154

1999

781

788

33

Взаимосвязь между ультраструктурой, уровнем сахара и морозостойкостью клеток лучевой паренхимы во время акклиматизации и деакклимации к морозам древесины тополя ( Populus × canadensis Moench ).

Дж. Физиол растений

149

1996

451

461

34

Десикация приводит к быстрому накоплению цитозольных и хлоропластных белков в воскрешающем растении Craterostigma plantagineum Hochst.

Планта

189

1993

120

131

35

Эктопическая экспрессия гена ABI3 усиливает устойчивость к замораживанию в ответ на абсцизовую кислоту и низкую температуру у Arabidopsis thaliana .

Завод J

25

2001

1

8

36

Акклимация растений к холоду: гены морозостойкости и механизмы регуляции.

Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol

50

1999

571

599

37

Мелкомасштабная процедура для быстрого выделения растительных РНК.

Nucleic Acids Res

17

1989

2362

38

Холодостойкость и травмы древесных растений.

Наука

169

1970

1269

1278

39

Фотопериодическая индукция покоя и толерантности к замерзанию у Betula pubescens : участие АБК и дегидринов.

Физиологический завод

100

1997

119

125

40

Фитохромный контроль прекращения роста и инициации холодовой акклиматизации отобранных древесных растений.

Физиология растений

50

1972

262

265

41

Сезонные закономерности содержания дегидринов и белков теплового шока 70 кДа в тканях коры восьми видов древесных растений.

Физиологический завод

96

1996

496

505

42

Очистка, иммунолокализация, криопротектор и антифриз активность PCA60: дегидрина из персика ( Prunus persica ).

Физиологический завод

105

1999

600

608

43

Взаимодействие осмотического стресса, температуры и абсцизовой кислоты в регуляции экспрессии генов у Arabidopsis.

Физиология растений

119

1999

205

211

Заметки автора

Авторские права © 2002 Американское общество физиологов растений

Эта статья публикуется и распространяется в соответствии с условиями модели публикации стандартных журналов Oxford University Press (https://academic.oup.com/journals/pages/open_access/funder_policies/chorus / standard_publication_model)

Дэйв Веллинг | RIABiz

909 65 13 сентября 2012 г.