симптомы, причины, лечение, профилактика, осложнения

Причины

В период беременности любые значительные отклонения в химическом составе крови могут негативно сказаться на гестации и развитии плода. Во избежание плачевных последствий будущей маме следует регулярно наблюдаться у акушера-гинеколога, сдавать все необходимые анализы и своевременно лечить все инфекционные и другие заболевания.  

Как было сказано выше, моноцитоз развивается как следствие различных заболеваний.

Основные заболевания, которые могут привести к моноцитозу:

• вирусные и инфекционные заболевания ( в первую очередь сифилис, туберкулёз, острые и хронические респираторные заболевания, ротовирусная инфекция),
• аутоиммунные нарушения также вызывают увеличение лейкоцитов и моноцитов (среди часто встречающихся у беременных можно выделить красную системную волчанку, атипичный сахарный диабет, ревматоидный артрит),
• различные болезни крови и кроветворных органов (лейкоз, мононуклеоз, моноцитопения, железодефицитная анемия),
• онкологические заболевания ( особенно рак крови — лейкемия),
• наследственный фактор (встречается у четверти пациенток),
• прочие индивидуальные отклонения женского организма (гормональный сбой, увеличение объёма крови, стрессы, повышенная утомляемость и прочее).

У беременных незначительное повышение уровня лейкоцитов и моноцитов является нормальной реакцией организма на появление “чужеродного” тела в организме. Однако следует регулярно проверять их уровень, который не должен значительно увеличиваться.

Симптомы

Моноцитоз сам является симптомом основного заболевания. По этой причине клиническая картина при моноцитозе в первую очередь зависит от причин данной аномалии крови.

При отсутствии явной симптоматики основного заболевания моноцитоз можно определить по следующим признакам:

• общая слабость,
• быстрая утомляемость,
• небольшое повышение температуры тела.

Данные симптомы характерны для различных болезней. В период беременности они могут быть физиологически обусловлены. В любом случае для подтверждения или опровержения диагноза необходимо сдать анализ крови.

Диагностика моноцитоза у беременной

Определить наличие заболевания можно по результатам анализа крови. При этом можно говорить об абсолютном и относительном моноцитозе.

Абсолютный моноцитоз — это высокий уровень клеток крови в общем объёме. Такое состояние крови требует немедленной коррекции. При относительном моноцитозе говорят о повышении уровня моноцитов в процентном соотношении с другими клетками крови. Именно такое состояние можно назвать относительно нормальным в период беременности.

Для того, чтобы выявить причины патологии крови необходим ряд других диагностических методов:

• сбор и изучение анамнеза и жалоб пациентки,
• общий и химический анализ крови, мочи и кала,
• УЗИ внутренних органов,
• компьютерная и магнитно-резонансная томография,
• исследование мокроты,
• влагалищный мазок.

Осложнения

В целом прогноз моноцитоза у беременных благоприятен, если он связан с физиологическими изменениями женского организма. При развитии моноцитоза во время основной болезни, наличие и степень тяжести осложнений будет зависеть именно от основной болезни.

У беременных любые серьёзные заболевания могут быть опасны:

• выкидышем,
• необходимостью проведение искусственного прерывания беременности,
• развитием внутриутробных патологий плода,
• инфицирование плода,
• отставание в физическом и психическом развитии,
• сложности при родоразрешении,
• дисфункция отдельных органов и тканей,
• инвалидизация,
• летальный исход.

Лечение

Что можете сделать вы

Будущие мамы при ухудшении самочувсвтия должны незамедлительно обратиться к акушеру-гинекологу, который назначит сдачу анализов и ряд других исследований. По их результатам врач ставит диагноз.

Если подтвердился мононуклеоз, то беременная во избежание осложнений и для скорейшего выздоровления должна:

• выполнять все врачебные назначения в полном объёме,
• отказаться от самолечения,
• соблюдать специальную диету,
• принимать витамины,
• оградить себя от стрессовых ситуаций,
• минимизировать физическую активность,
• вести здоровый образ жизни,
• отказаться от вредных привычек.

Что делает врач

Для лечения моноцитоза необходимо выявить основное заболевание. Именно его излечение и будет основой лечения моноцитоза. Схема лечения разрабатывается с учётом основного диагноза, срока беременности, степени тяжести моноцитоза и основного заболевания.

В качестве терапевтических мер используются:

• медикаментозное лечение,
• переливание крови,
• плазмоферез,
• хирургическое вмешательство,
• витаминотерапия,
• диетотерапия,
• проведение физиопроцедур,
• симптоматическое лечение.

Профилактика

Не существует специальных мер по предотвращению моноцитоза, поскольку он может быть признаком самых различных заболеваний и патологий.

Во избежание ухудшения состояния крови в период беременности необходимо:

• до зачатия пройти полное медицинское обследование и вылечить имеющиеся заболевания и санировать очаги инфекции,
• своевременно лечить и предупреждать заболевания в период гестации,
• укреплять иммунитет (принимать витамины, отказаться от вредных привычек, придерживаться правил рационального сбалансированного питания, регулярно выходить на свежий воздух, заниматься физкультурой),
• минимизировать стрессовые ситуации,
• вести здоровый образ жизни,
• регулярно посещать женскую консультацию и сдавать все необходимые анализы.

Оцените материал:

спасибо, ваш голос принят

Статьи на тему

Показать всё

Вооружайтесь знаниями и читайте полезную информативную статью о заболевании моноцитоз при беременности. Ведь быть родителями – значит, изучать всё то, что поможет сохранять градус здоровья в семье на отметке «36,6».

Узнайте, что может вызвать недуг моноцитоз при беременности, как его своевременно распознать. Найдите информацию о том, каковы признаки, по которым можно определить недомогание. И какие анализы помогут выявить болезнь и поставить верный диагноз.

В статье вы прочтёте всё о методах лечения такого заболевания, как моноцитоз при беременности. Уточните, какой должна быть эффективная первая помощь. Чем лечить: выбрать лекарственные препараты или народные методы?

Также вы узнаете, чем может быть опасно несвоевременное лечение недуга моноцитоз при беременности, и почему так важно избежать последствий. Всё о том, как предупредить моноцитоз при беременности и не допустить осложнений. Будьте здоровы!

Норма общего анализа крови во время беременности. Гемоглобин, тромбоциты, гематокрит, эритроциты и лейкоциты при беременности. Клинический анализ крови во время беременности. Гематологические изменения при беременности.

Перевод материалов сайта UpTodate.com
Нормально протекающая беременность характеризуется значительными изменениями почти во всех органах и системах для приспособления к требованиям фетоплацентарного комплекса, в том числе, во время беременности меняются показатели анализов крови.

Нормы анализа крови при беременности: краткое содержание статьи

• Значимыми гематологические изменениями в течение беременности являются физиологическая анемия, нейтрофилия, умеренная тромбоцитопения, повышение факторов свертывания крови и снижение фибринолиза.




• К 6-12 неделям беременности объем плазмы крови повышается примерно на 10-15 %. Самые быстрые темпы увеличения объема плазмы крови отмечаются в период с 30 по 34 недели беременности, после чего объем плазмы изменяется незначительно.




• Количество эритроцитов начинает увеличиваться на 8-10 неделях беременности и к концу беременности увеличивается на 20-30% (250-450 мл) относительно нормального уровня для небеременных женщин к концу беременности Значительное увеличение объема плазмы относительно увеличения количества гемоглобина и объема эритроцитов приводит к умеренному снижению уровня гемоглобина (физиологическая анемия беременных), что наблюдается у здоровых беременных.




• У беременных женщин возможно незначительное снижение количества тромбоцитов по сравнению со здоровыми небеременными женщинами.




• Количество нейтрофилов начинает расти на втором месяце беременности и стабилизируется во втором или третьем триместрах, в это время количество лейкоцитов. Абсолютное количество лимфоцитов не изменяется.




• Уровень некоторых факторов свертывания крови меняется в течение беременности.

В данной статье описаны гематологические изменения, происходящие во время беременности, наиболее важными из которых являются:

• Повышение объема плазмы крови и уменьшение гематокрита




• Физиологическая анемия, низкий гемоглобин




• Повышенные лейкоциты при беременности




• Нейтрофилия




• Умеренная тромбоцитопения




• Повышение прокоагулянтных факторов




• Уменьшение фибринолиза

Анализы, упоминаемые в статье

Как сдать анализы крови и получить скидку 5%? Зайдите в интернет-магазин лабораторий ЦИР!

Объем плазмы крови

К 6-12 неделям беременности объем плазмы крови повышается примерно на 10-15 %. Самые быстрые темпы увеличения объема плазмы крови отмечаются в период с 30 по 34 недели беременности, после чего объем плазмы изменяется незначительно. В среднем объем плазмы крови увеличивается на 1100-1600 мл в триместр, и в результате объем плазмы за беременность увеличивается до 4700-5200 мл, что на 30 до 50% выше объема плазмы у небеременных женщин.

В течение беременности активность ренина плазмы крови имеет тенденцию повышаться, при этом уровень предсердного натрийуретического пептида несколько снижается. Это говорит о том, что увеличение объема плазмы вызвано недостаточностью сосудистой системы, к которой приводит системная вазодилатация (расширение сосудов во всем организме) и увеличение сосудистой емкости. Так как изначально увеличивается именно объем плазмы крови, то его воздействие на почечные и предсердные рецепторы приводит к противоположным воздействиям на гормональный фон (снижение активности ренина плазмы и увеличение натрийуретического пептида). Эта гипотеза также подтверждается наблюдением, что повышение потребления натрия не влияет на дальнейшее увеличение объема плазмы крови.

После родов объем плазмы сразу снижается, но вновь повышается через 2-5 дней, возможно из-за увеличения секреции альдостерона, происходящей в это время. Затем объем плазмы вновь постепенно снижается: через 3 недели после родов он все ещё повышен на 10-15% относительно нормального уровня для небеременных женщин, но обычно полностью приходит норме через 6 недель после родов.

Эритроциты при беременности, СОЭ при беременности

Количество эритроцитов начинает увеличиваться на 8-10 неделе беременности и к концу беременности увеличивается на 20-30% (250-450 мл) относительно нормального уровня для небеременных, в особенности у женщин, принимавших препараты железа во время беременности. Среди беременных, не принимавших препараты железа, количество эритроцитов может увеличиваться только на 15-20%. Продолжительность жизни эритроцитов немного снижается в течение нормальной беременности.

Уровень эритропоэтина при нормальной беременности повышается на 50% и его изменение зависит от наличия осложнений беременности. Повышение эритропоэтина в плазме приводит к увеличению количества эритроцитов, которые частично обеспечивают высокие метаболические требования в кислороде в течение беременности.

У женщин, не принимающих препараты железа, средний объем эритроцитов снижается во время беременности и в третьем триместре в среднем составляет 80-84 фл. Однако, у здоровых беременных и у беременных с умеренным дефицитом железа средний объем эритроцитов увеличивается примерно на 4 фл.

СОЭ при беременности увеличивается, что не имеет диагностического значения.

Анемия при беременности, гемоглобин при беременности, гематокрит при беременности, низкий гемоглобин при беременности

Снижение гемоглобина при беременности

Значительное увеличение объема плазмы относительно увеличения количества гемоглобина и объема эритроцитов приводит к умеренному снижению уровня гемоглобина (физиологическая анемия или низкий гемоглобин у беременных), что наблюдается у здоровых беременных. Самая большая разница между темпами роста объема плазмы крови и количества эритроцитов в материнском кровотоке, формируется в течение конца второго, начале третьего триместра (снижение гемоглобина обычно происходит в 28-36 недель беременности). Концентрация гемоглобина повышается благодаря прекращению увеличения объема плазмы и продолжения повышения количества гемоглобина. Наоборот, отсутствие появления физиологической анемии является фактором риска мертворождения.

Анемия при беременности

Установление четкого определения анемии у беременных женщин достаточно сложно, т.к. оно складывается из связанных с беременностью изменений в объеме плазмы крови и количества эритроцитов, физиологическими различиями в концентрации гемоглобина между женщинами и мужчинами и частотой использования препаратов железа при беременности.

• Центр профилактики и контроля заболеваний определил анемию, как уровень гемоглобина меньше, чем 110 г/л (гематокрит меньше 33%) в первом и третьем триместрах и менее, чем 105 г/л (гематокрит менее 32%) во втором триместре.




• ВОЗ определила анемию у беременных, как снижение гемоглобина меньше 110 г/л (11 г/дл) или гематокрит меньше 6,83 ммоль/л или 33%. Тяжелая анемия беременных определяется уровнем гемоглобина меньше 70 г/л и нуждается в медицинском лечении. Очень тяжелая анемия определяется уровнем гемоглобина меньше 40 г/л и нуждается в неотложной медицинской помощи в связи с риском застойной сердечной недостаточности.

Женщины со значением гемоглобина ниже этих уровней считаются анемичными и должны подвергаться стандартным анализам (общий анализ крови с оценкой мазка периферической крови, подсчет ретикулоцитов, сывороточное железо, ферритин, трансферрин). Если при обследовании отклонений не выявлено, то гемоглобин, сниженный до уровня 100 г/л можно считать физиологической анемией с большим разнообразием факторов, влияющих на нормальный уровень гемоглобина у конкретного человека.

Хроническая тяжелая анемия наиболее распространена у женщин в развивающихся странах. Снижение материнского гемоглобина ниже 60 г/л приводит к уменьшению объема амниотической жидкости, вазодилатации мозговых сосудов плода и изменение частоты сердечного ритма плода. Также повышается риск преждевременных родов, самопроизвольных выкидышей, рождения детей с низким весом и мертворождения. Кроме того, тяжелая анемия (гемоглобин меньше 70 г/л) повышает риск материнской смертности. Нет данных, что анемия повышает риск врожденных аномалий плода.

Тяжелая хроническая анемия обычно связана с недостаточным запасом железа (из-за недостаточного потребления с пищей или кишечных глистных инвазий), дефицитом фолатов (из-за недостаточного потребления и хронических гемолитических состояний, таких как малярия). Таким образом, предупреждение хронической анемии и улучшение исход беременности возможно при применении пищевых добавок и использовании мер контроля за инфекциями.

Проведение переливания крови и эритроцитарной массы (в тех местах, где доступно безопасное переливание крови) является разумным агрессивным лечением тяжелой формы анемии, особенно если есть признаки гипоксии плода.

Признаки физиологической анемии беременных исчезают через 6 недель после родов, когда объем плазмы возвращается к норме.

Потребность в железе

При одноплодной беременности потребность в железе составляет 1000 мг за беременность: примерно 300 мг для плода и плаценты и, примерно, 500 мг, если таковые имеются, для увеличения количества гемоглобина. 200 мг теряется через кишечник, мочу и кожу. Так как у большинства женщин нет адекватного запаса железа для обеспечения потребностей во время беременности, то железо обычно назначают в составе мультивитаминов, или как отдельный элемент. В целом, у женщин, принимающих препараты железа, концентрация гемоглобина выше на 1 г/дл, чем у женщин, не принимающих железо.

Потребность в фолатах

Ежедневная потребность в фолатах для небеременных женщин составляет 50-100 мкг. Повышение количества эритроцитов во время беременности приводит к увеличению потребностей в фолиевой кислоте, что обеспечивается увеличением дозы фолиевой кислоты до 400-800 мкг в сутки, для предотвращения дефектов нервной трубки у плода.

Тромбоциты при беременности

В большинстве случаев, количество тромбоцитов во время неосложненной беременности остается в пределах нормы для небеременных женщин, но так же у беременных женщин возможно и снижение количества тромбоцитов по сравнению со здоровыми небеременными женщинами. Количество тромбоцитов начинает расти сразу после родов и продолжает увеличиваться в течение 3-4 недель, пока не вернется к нормальным значениям.

Тромбоцитопения при беременности

Наиболее важное в акушерстве изменение в физиологии тромбоцитов при беременности — это тромбоцитопения, которая может быть связана с осложнениями беременности (тяжелая преэклампсия, HELLP-синдром), медикаментозными расстройствами (иммунная тромбоцитопения) либо может являться гестационной тромбоцитопенией.

Гестационная или случайная тромбоцитопения протекает бессимптомно в третьем триместре беременности у пациенток без предшествующей тромбоцитопении. Она не ассоциирована с материнскими, плодными или неонатальными осложнениями и спонтанно разрешается после родов.

Лейкоциты при беременности

При беременности наблюдается лейкоцитоз, в основном связанный с повышением циркулирующих нейтрофилов. Количество нейтрофилов начинает расти на втором месяце беременности и стабилизируется во втором или третьем триместрах, в это время количество лейкоцитов увеличивается с 9*10^9 /л до 15*10^9/л. Количество лейкоцитов снижается до референсного интервала для небеременных женщин к шестому дню после родов.

В периферической крови у беременных женщин может быть небольшое количество миелоцитов и метамиелоцитов. По данным некоторых исследований наблюдается увеличение количества юных форм нейтрофилов во время беременности. Тельца Доли (голубое окрашивание цитоплазматических включений в гранулоцитах) считаются нормой у беременных женщин.

У здоровых женщин при неосложненной беременности не происходит изменений абсолютного количества лимфоцитов и нет значительных изменений в относительном количестве Т- и В-лимфоцитов. Число моноцитов обычно не изменяется, число базофилов может немного снижаться, а число эозинофилов может несколько повышаться.

Факторы свертывания крови и ингибиторы

При нормальной беременности происходят следующие изменения уровней факторов свертывания крови, приводящие к физиологической гиперкоагуляции:

• Из-за гормональных изменений при беременности снижается активность общего протеин S антигена, свободного протеин S антигена и протеина S.




• Устойчивость к активированному протеину С повышается во втором и третьем триместрах. Данные изменения были выявлены при проведении тестов первого поколения с использованием чистой плазмы крови (т.е. не лишенной фактора V), однако этот тест редко применяется клинически и имеет лишь исторический интерес.




• Фибриноген и факторы II, VII, VIII, X, XII и XIII повышаются на 20-200%.




• Повышается фактор фон Виллебранда.




• Повышается активность ингибиторов фибринолиза, TAF1, PAI-1 и PAI-2. Так же заметно повышается уровень PAI-1.




• Уровни антитромбина III, протеина С, фактора V и фактора IX чаще всего остаются без изменений или повышаются незначительно.

Конечный результат данных изменений — повышение тенденции к тромбообразованию, увеличение вероятности венозных тромбозов в течение беременности и, особенно, в послеродовый период. Наряду с сокращением миометрия и повышением уровня децидуального тканевого фактора, гиперкоагуляция защищает беременную от чрезмерного кровотечения во время родов и отделения плаценты.

АЧТВ остается в норме в течение беременности, но может немного снижаться. Протромбиновое время может укорачиваться. Время кровотечения не изменяется.

Сроки нормализации активности свертывания крови в послеродовый период могут варьировать в зависимости от факторов, но все должно вернуться в нормальные рамки через 6-8 недель после родов. Гемостазиограмму не нужно оценивать ранее, чем через 3 месяца после родов и после завершения лактации для исключения влияния факторов беременности.

Влияние факторов приобретенной либо наследственной тромбофилии на беременность является сферой для исследований.

Послеродовый период

Гематологические изменения, связанные с беременностью, возвращаются в нормальные рамки через 6-8 недель после родов. Скорость и характер нормализации изменений, связанных с беременностью, конкретных гематологических показателей описаны выше в разделе, посвященном каждому параметру.

Гематологические осложнения при беременности

• Железодефицитная анемия.




• Тромбоцитопения.




• Неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения.




• Приобретенная гемофилия А.




• Венозные тромбозы.




• Резус- и не резус-аллоиммунизация. Для диагностики проводится анализ на резус-антитела и антигрупповые антитела.




• Проявление ранее нераспознанного нарушения свертывающей системы, такое как болезнь фон Виллебранда, наиболее часто манифестирует у женщин в период беременности и родов. Для скрининга болезни фон Виллебранда сдается анализ для оценки агрегации тромбоцитов с ристоцетином.




• Апластическая анемия.

Моноциты повышены при беременности в крови — что это значит?

В период вынашивания малыша женщинам приходится сдавать много анализов. Они помогают врачам вовремя диагностировать проблемы со здоровьем. Анализ крови будущие мамочки сдают регулярно. Существуют определенные нормы результатов такого исследования. О чем же свидетельствует повышение такого компонента крови, как моноциты? Чем грозит это будущей маме? Разберемся в вопросе.

О моноцитах, их функциях и норме

Так называют разновидность лейкоцитов. Как специфические клетки крови моноциты защищают организм от атак чужеродных биологических агентов. Если длительное время у взрослого человека эти компоненты крови повышены, то это может быть свидетельством проблем со здоровьем. Само явление повышенного уровня моноцитов называется моноцитозом. Он бывает относительным и абсолютным. О последнем говорят, когда их показатель в составе крови превышает 0,7×109/л.

Если говорить об относительном моноцитозе, то уровень этих компонентов остается в пределах нормы, однако увеличивается их присутствие в общей лейкоцитарной формуле. Другими словами, число моноцитов остается прежним, а количество прочих видов лейкоцитов снижается.

Относительный моноцитоз диагностируют, когда доля моноцитов на 8-10% превышает их обычное количество в общей численности лейкоцитов. Такое происходит при нейтропении и лимфоцитопении. Относительный моноцитоз сам по себе существенной диагностической ценностью не обладает. А вот абсолютный моноцитоз является свидетельством активного иммунного ответа организма при серьезных проблемах со здоровьем. Повышенные моноциты могут наблюдаться при таких заболеваниях: бактериальные, грибковые, вирусные инфекции в острой форме; паразитарные поражения в виде туберкулеза, малярии, бруцеллеза, сифилиса. Также моноцитоз может свидетельствовать о болезни Крона и хронических воспалительных процессах в организме. Такую же картину крови дают злокачественные заболевания, например, лейкоз, миелолейкоз, лимфома, полицитемия, остеомиелофиброз, лимфогранулематоз.

У женщин моноциты могут быть повышенными после гинекологических операций.

Стоит знать, что уровень моноцитов повышается на начальных стадиях развития злокачественных новообразований. Порой это первый сигнал о таком неблагополучии со здоровьем.

Беременность и высокие моноциты

Вынашивание ребенка большинство медиков расценивает как иммунодефицитное состояние. Но вместе с этим многие имеющиеся хронические воспалительные процессы на фоне беременности затухают.

Моноциты при беременности могут повышаться, поскольку в этот период главными клетками иммунной защиты женщины становятся как раз они, а не лимфоциты. Это происходит на фоне общего повышения уровня лейкоцитов. Моноциты будущих мам выделяют больше противовоспалительных веществ (их называют цитокинами), нежели обычных женщин. В периферической крови беременных также возрастет количество гранулоцитов.

Поэтому моноцитоз у беременных на ранних сроках может быть нормой. Скорее всего, это свидетельство адаптации иммунной системы женского организма к новому состоянию. Активизация природного иммунитета обеспечивает надежную защиту от бактериальных инфекций. Вот только вирусов это касается в меньшей степени. Поэтому при выявленном у беременной женщины моноцитозе ей советуют также сдать анализы на вирусные инфекции. И в первую очередь речь идет о вирусе Эпштейна-Барр, то есть герпесе 4 типа и наличии признаков мононуклеоза, который этим вирусом вызывается.

Если отклонения моноцитов от нормы незначительные, то можно предположить, что организм будущей мамы самостоятельно справиться с атакой патогенных микроорганизмов. Когда же отклонения от нормы значительные, к тому же они наблюдаются в течение длительного периода, то такое состояние требует детального медицинского обследования.

Сам по себе моноцитоз — это не болезнь. Он всего лишь является свидетельством наличия в организме патологий и заболеваний. Поэтому устранение моноцитоза — это лечение основного заболевания, то есть его причины. Многие специалисты подчеркивают, что часто нарушение уровня моноцитов в крови связано с наличием в организме паразитов. Поэтому стоит сдать анализы на их присутствие и сделать это без промедлений.

причины, правила сдачи анализа, последствия и профилактика

Женщины при вынашивании ребенка вынуждены постоянно проходить исследование крови, что помогает своевременно выявить наличие проблем со здоровьем и оперативно их устранить. Особо важно взять под контроль ситуацию, при которой в крови повышены моноциты. При беременности постановка такого диагноза после обследования вызывает у женщин большое количество вопросов – что это за клетки, о чем говорит их чрезмерное количество, а также, к чему это может привести? В большинстве случаев резкое поднятие уровня моноцитов на длительное время указывает на то, что в организме человека происходят серьезные сбои, которые нужно устранять.

Моноциты и их норма в организме

Моноциты – это разновидность лейкоцитов, которые играют роль защитников в организме, предотвращая проникновение и распространение по нему патогенных микроорганизмов. Повышенный уровень этих крупных клеток в крови принято также называть моноцитозом. Он, в свою очередь, делится на два вида – относительный и абсолютный.

При относительном моноцитозе число таких клеток в организме находится на нормальном уровне, хотя при расчете по лейкоцитарной формуле их число возрастает. Если говорить простым языком, то данные показатели остаются в исходном количестве, в то время как уровень лейкоцитов иного типа заметно понижается.

Такое состояние выявляется в том случае, когда в общем количестве иммунных кровяных клеток моноцитов больше стандартных на 10 процентов, что случается во время нейтропении и лимфоцитопении. Патология абсолютного типа ставится тогда, когда число данного компонента становится больше показателя 0,7*109 литров.

Важно помнить, что относительная форма моноцитоза не несет никакой информации во время диагностических мероприятий, в то время как абсолютная стадия говорит о наличии серьезных заболеваний и патологических воспалительных процессов, происходящих в организме.

Когда повышается уровень моноцитов?

Повышенные моноциты в крови при беременности наблюдаются в следующих случаях:

• на начальных стадиях острых инфекций, из-за проникновения вирусов;
• туберкулезе полости легких;
• патологиях, вызванных бактериологической инфекцией;
• развитии сифилиса;
• малярии;
• возникновении злокачественных новообразований в организме.

Помимо этого, моноцитоз довольно часто становится симптомом запущенной формы воспалительного процесса и даже болезни Крона. В организме женщины число таких компонентов часто увеличивается в результате недавно проведенного оперативного вмешательства, связанного с гинекологическими заболеваниями.

Важно помнить, что повышенный уровень моноцитов чаще всего является первым признаком ранней стадии развития злокачественных новообразований. Подобная патология нуждается в своевременной диагностике и комплексном лечении, особенно во время вынашивания ребенка.

Функции моноцитов в организме

Как уже было отмечено, такой тип лейкоцитарных клеток принимает участие в защите организма человека от отрицательного воздействия чужеродных тел. По своему внешнему виду моноциты представляют собой структуры белого цвета, которые захватывают и губят инородных агентов.

Чаще всего в роли фагоцитов (структур, которые способны уничтожать посторонних агентов) выступают именно незрелые клетки. При попадании в организм человека патогенов моноциты оказывают им отпор, осуществляя их инактивацию. В результате такого процесса погибают все болезнетворные микробы, проникшие в организм человека, а также белковые фракции.

Помимо этого, моноциты выполняют следующие функции:

• выводят погибшие лейкоциты из организма;
• способствуют ускоренной выработке интерферонов;
• активно участвуют в формировании тромбов;
• несут противоопухолевой эффект.

Исходя из этого, можно уверенно сказать, что моноциты – это серьезное препятствие на пути к дальнейшему прохождению инфекционного процесса по организму.

Симптомы недомогания

Если всю беременность повышены лимфоциты (моноциты в том числе), то у женщины наблюдаются следующие симптомы:

• сильная утомляемость;
• чувство слабости, недомогание, ухудшение состояния;
• хроническая усталость;
• повышение температуры тела до 37-37,5 градусов Цельсия, при этом она сохраняется на длительное время.

Чаще всего понять, что в организме присутствует моноцитоз можно не по личным ощущениям, а по показателям исследования крови в лаборатории. Однако специалисты выделили описанные выше симптомы в группу основных, которые чаще всего говорят о проблемах с состоянием здоровья. Если у беременной женщины внезапно возникли подобные признаки, то ей важно незамедлительно обратиться за помощью к врачу.

Повышенный уровень моноцитов во время беременности

Повышены моноциты — причин такого состояния множество. Многие специалисты описывают период вынашивания ребенка как иммунодефицитное состояние. Однако в то же время многие хронические воспалительные процессы со временем ослабевают либо полностью проходят. Главной причиной повышения моноцитов при беременности является то, что основными защитными клетками в это время становятся именно они, а не лимфоциты, что происходит по причине увеличения белых кровяных структур.

В этот период они могут выделять в кровь огромное количество цитокинов (полезные компоненты, несущие противовоспалительный эффект). Также в данный промежуток времени в крови женщины значительно увеличивается и количество гранулоцитов.

Именно по этой причине в первом триместре после зачатия моноцитоз у будущей мамы считается нормальным явлением и говорит о хорошей адаптации иммунитета к новому состоянию. Это приводит к улучшению защитных функций, которые начинает эффективно противостоять разным бактериям и патогенам, препятствуя различным заболеваниям. Однако это не относится к заболеваниям.

При выявлении у беременной моноцитоза ей следует пройти обследование крови на наличие вирусных воспалительных процессов. В особенности, когда дело касается герпеса 4 типа, который сильно вредит здоровью. Также важно обратить внимание на симптомы мононуклеоза, возникающего по причине воздействия подобных вирусов.

Другие причины

Еще одной довольно распространенной причиной нарушения количества моноцитов, как говорят многие специалисты, является наличие в организме женщины в положении паразитов. Важно своевременно сдать анализы крови для их выявления:

• если уровень моноцитов отошел от нормы незначительно, то лечащий специалист может самостоятельно понизить воздействие патогенных бактерий на организм;
• при сильных отклонениях от нормального состояния женщине важно пройти комплексное лечение, которое поможет нормализовать прежние показатели.

Важно помнить, что моноцитоз – это не заболевание. Оно сигнализирует о том, что в организме человека на этот отрезок времени развивается какое-то недомогание, которое нуждается в обязательном лечении. Важно как можно раньше устранить причину моноцитоза, чтобы в короткий срок избавиться от патологического процесса.

Лечебные мероприятия

Заниматься лечением моноцитоза при беременности без устранения главной причины его появления не получится, так как нет никаких народных рецептов и медикаментов для снижения количества данных структурных единиц. Чтобы нормализовать их уровень в крови пациента, важно в обязательном порядке провести углубленную диагностику и выявить очаг распространения инфекции и воспаления.

Лишь после постановки диагноза можно переходить к составлению плана эффективного лечения:

• при увеличении количества защитных клеток в результате проникновения инфекции, врач выписывает антибактериальные медикаменты;
• при моноцитозе, возникшем вследствие воспалительного процесса, врач прописывает женщинам соответствующие лекарства;
• при системных заболеваниях, вызванных этой причиной, назначается комплексная терапия.

Чтобы диагностика моноцитоза сбыла максимально подробной, важно сдавать анализ крови натощак.

Меры профилактики

Если лечащий специалист выявил, что моноциты у взрослого при беременности повышены, то он назначает дополнительное исследование, которое помогает определиться с точной причиной болезни.

Будущей маме важно следить за своим здоровьем. Очевидно, не всегда является патологией состояние, когда повышены моноциты при беременности. Профилактика заболеваний, провоцирующих нежелательные нарушения в уровне защитных структурных единиц, заключается в следующем:

• нужно прекратить занятия спортом, избегать стрессовых ситуаций, эмоциональных потрясений, чувства недомогания;
• употреблять только те медикаменты, которые были выписаны лечащим специалистом, и в установленной дозировке;
• реже ходить в места скопления большого количества людей в период обострения вирусных заболеваний;
• чаще гулять на свежем воздухе;
• больше отдыхать, хорошо высыпаться;
• перестать употреблять еду с пищевыми добавками и суррогатами, заменив ее на натуральную продукцию, содержащую витамины и питательные вещества.

Нормы содержания у ребенка и взрослого человека

В норме в крови должно содержаться от 3 до 11 процентов моноцитов (у ребенка количество таких клеток варьируется от 2 до 12 процентов) от общего числа лейкоцитарных элементов в биологической.

Чаще всего специалисты выявляют относительное количество таких элементов (для этого осуществляют общий анализ крови). Но при подозрении на серьезные проблемы с работой костного мозга проводится анализ на абсолютное содержание моноцитов, плохие результаты которого должны насторожить каждого человека.

У женщин (в особенности во время вынашивания ребенка), в крови всегда намного больше лейкоцитов, чем у мужчин, помимо этого, это значение может изменяться в зависимости от возраста (у ребенка их может быть и больше).

Зачем знать уровень моноцитов?

Когда моноциты повышены при беременности, правила сдачи анализа следующие:

• за 12 часов оградить себя от физической и эмоциональной нагрузки;
• не употреблять сладкую, жирную, жареную и соленую пищу, не пить кофе и энергетические напитки;
• перед тестированием запрещено есть в течение четырех часов.

Моноциты – это важные составляющие лейкоцитарной формулы, которые помогают специалисту определить точное состояние здоровья пациентки. Повышение и понижение этих структурных единиц, которые случаются у детей и взрослых, указывают на то, что в организме имеются нарушения. Особое внимание важно уделять значению моноцитов у беременных женщин, ведь в это время их иммунитет направляет основные силы на поддержание здоровья плода.

Значение моноцитов

Врачи дают моноцитам определение — «дворники организма», так как они очищают кровь от патогенов и паразитов, поглощают погибшие клетки и восстанавливают функции кровеносной системы. Иногда повышение и понижение уровня защитных клеток происходит по причине стресса, перенапряжения, физических нагрузок, безграмотного употребления медикаментов. Когда моноциты при беременности повышены, последствия не так опасны для женщины, как для развития будущего ребенка.

Общий анализ крови у беременной

Итак, что же отличает нормальную кровь небеременной женщины от крови беременной?

Прежде всего, это количество плазмы.⠀

Объем циркулирующей крови при беременности постепенно увеличивается, так как мама работает за себя и за будущего малыша. Во время беременности происходит физиологическое снижение некоторых параметров: снижается общее количество эритроцитов и соответственно, гемоглобина. Теперь ВНИМАНИЕ! для диагностики анемии беременных недостаточно только этих показателей. При сниженном количестве гемоглобина (ниже 110) и эритроцитов (ниже 3,5) рекомендовано не сразу выставлять диагноз АНЕМИЯ, а посмотреть еще на несколько параметров:⠀

✔️Форма эритроцитов.⠀

Зрелый, богатый железом эритроцит — это  двояковпуклый диск, который в анализе крови выглядит ярким кругом. А если он бледное кольцо, меньшее по размеру то вы увидите в анализе -«гипохромия» и «анизоцитоз» — верные признаки анемии.⠀

Как убедиться?➡️⠀

✔️Определение ферритина крови.⠀

Именно этот анализ показывает наличие железа в закромах организма. Только он даст ответ на вопрос: это просто незначительное разбавление крови беременной или все-таки болезненное состояние, требующее терапии. Более того, как раз уровень ферритина является показателем эффективности проведенного лечения. Не гемоглобин в общем анализе крови(!), а ферритин в дополнительном.⠀

Вторая особенность:

✔️общее количество лейкоцитов — лейкоцитоз (в среднем до 11х10 в 9ст.)

чем выше срок беременности — тем большее количество лейкоцитов. Организм реагирует таким образом на то, что в организме «кто-то еще, не совсем свой»

кстати, именно по этой причине количество лейкоцитов увеличено в вагинальном мазке, а никак не с воспалением!

✔️увеличение СОЭ — скорость оседания эритроцитов.

Сила, которая заставляет эритроциты склеиваться друг с другом, оседать — это изменение состава крови. Это бывает при инфекциях, воспалительных заболеваниях, травмах.

во время всех этих состояний увеличивается количества свободного белка в крови и он оседает на поверхности эритроцита, тот тяжелеет и быстрее прилипает к «собрату».

Во время беременности в составе крови увеличивается количество белков и под их тяжестью эритроциты быстрее и в бОльшем количестве оседают.

Поэтому, если возникло сомнение в цифрах СОЭ, и есть подозрение на воспалительный процесс — необходимо сдать еще один анализ — ПРОКАЛЬЦИТОНИН. это единственный неспецифический маркер воспаления у беременных женщин.

Индивидуально проконсультироваться, пройти диагностику, сделать разбор анализов Вы можете у наших врачей акушеров-гинекологов  по предварительной записи по телефону +7 3452 593957 или онлайн 

моноциты при беременности — 25 рекомендаций на Babyblog.ru

Доделали ремонт в нашей спальне. Осталось немного — купить кровать и детскую кроватку. Есть у меня правда кроватка, нам отдали, но цвет не подходит. Нужна белая. Хочу трансформер (которая с пеленальником) т.к. места мало. Совсем мало))) С мужем шутили, что рожать пока рано, пока кровать не купили)))) На след.день пошла за талончиком к гематологу в консультацию (это отдельная блин история) и отправили меня по скорой в роддом с подозрением на преждевременные роды! А началось все с того, что накануне целый день давило в низ живота. Прям капец. С первым такого не было. А тут обычно ребра болели (на последнем узи поставили косое положение плода, головка была под правым ребром), а тут такое ощущение что живот опустился. В туалет схожу и через 5 минут опять потихоньку начинается ощущение, что хочу в туалет. Бегала целый день. Еще и дергает внизу живота. В общем я все это врачу рассказала. Она меня на кушетке посмотрела и говорит — мне тоже кажется что опустился. И отправила меня. В общем приехала я в роддом, посмотрели меня на кресле, сделали узи. Обматерили консультацию мою и врачей))) Сказали что кресло и узи и в консультации есть и не зачем было меня в роддом отправлять. Типа работать нормально не хотят и т.д. и т.п. Вот пойду сейчас в консультацию с пламенным приветом от врачей с роддома))) Написал мне в отказном листе — необоснованность направления в роддом и отсутствие показаний для госпитализации. Назначил цервикометрию в динамике. Это видимо чтобы врачей моих понапрягать лишний раз)))) А еще хорошая новость — малышка моя перевернулась))) Может поэтому низ живота давит? Вчера вечером икала, вообще в самом низу. Я руку положила между ног (извиняюсь за подробности) и чувствовала рукой как она икает! Рано, рано мне еще рожать!!! Еще кровать не купили))))

А, еще про гематолога. Я ж пошла за номерком к врачу. Так вот, не могла записаться я к гематологу давно. Номерки мигом разбирают. Тут вдруг получилось. Я аж сама офигела. Записали меня, а потом через часа 2 перезванивают и говорят, что теперь запись по другому происходит. Теперь талончик надо брать в своей консультации. Ну вот я и пошла. А врач мне и говорит, что им на март на все беременных дали всего 2 номерка!!!! И вообще у них есть беременная с гемоглобином 86, и даже она скорее всего не попадет! Вот так! А еще я тут увидела последний анализ крови, так он ухудшился еще больше…

Общий белок — в первый раз 68,7; сейчас 62,4 при норме 66-87

креатинин крови — в первый раз 45,8; сейчас 34 при норме 40-80

концетрация железа — в первый раз 33,6; сейчас 36,3 при норме 6,6-26

*тут отступление небольшое, моя врач мне железо прописала))) Типа гемоглобин низкий. Я скоро железным человеком с ней стану блин!!!))) Результаты ДО того как я железо это пить начала. Пропила наверно дней 5, пока не увидела результаты последние)))

скорость клубочковой фильтрации — в первый раз 155,973, сейчас 219,969 при норме 80-130

глюкоза крови — в первый раз 3,70, сейчас 3,20 при норме 4,22-6,11

общий холестерин — в первый раз 3,9; сейчас 6,6 при норме 3-6,2

лейкоциты — в первый раз 7,1; сейчас 10,96 при норме 4-10

эритроциты — в первый раз 3,51, сейчас 3,24 при норме 3,7-5

гемоглобин — был 110, стал 111 при норме 115-150

средний объем эритроцитов — был 92, стал 99,1, при норме 80-95

среднее содержание гемоглобина — был 31,3, стал 34,3, при норме 27-31

гематокрит — был 32,3, стал 32,1, при норме 36-42

незрелые гранулоциты — было 0,02, стало 0,6 при норме 0-0,5

моноциты — были 0,65, стали 1,3 при норме 0,09-0,6

СОЭ — было 41, стало 39 при норме 2-20

То, что выделено — не укладывается в норму. Вот я и думаю очень плохо это или ничего страшного. Девочки, как у вас? от врача моего пользы мало.

В первый раз еще сдавала на антитела к различным возбудителям инфекций. Положительный результат — Toxoplasma gondii IgG, простому герпесу I типа IgG, ЦМВ Ig G (цитомегаловирусу), и к краснухе. Ну краснуху мне уже сняли. Ездила в инфекционку. Сдавала там анализы. Вообще краснухой болела в детстве еще!

Много так написала) Под кат не знаю как убрать(((

Физиологические изменения показателей крови при беременности

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Изменение показателей коагулограммы и клинического анализа крови. 

Изменения в коагулограмме (№№ 1, 2, 3, 4, 190, 164, 194)* беременной это физиологический процесс, связанный с появлением маточно-плацентарного круга кровообращения. Данный процесс связан с эволюционными, приспособительными реакциями организма беременной женщины. Организм женщины готовиться к затратам во время вынашивания плода и возможной кровопотери во время родов. При физиологическом течении беременности повышается активность прокоагулянтного звена. Уже на 3-м месяце беременности повышается фибриноген (это фактор I (первый) свёртывающей системы плазмы) и достигает максимальных значений накануне родов. Поэтому гинекологи обоснованно рекомендуют контролировать данный показатель во время беременности (1 раз в триместр, при наличии отклонений данных показателей чаще, 1 раз в неделю). В конце III триместра беременности в сыворотке повышается концентрация фибриногена, что может соответствовать усилению процессов внутрисосудистого свёртывания крови в маточно-плацентарном кровотоке. 

Одновременно с повышением фибриногена и активности внешнего пути коагуляции повышается и активность внутреннего механизма свёртывания крови, при этом отмечается укорочение АЧТВ. Изменяются во время беременности и другие звенья системы гемостаза, такие как ингибитор свёртывания — антитромбин III, который имеет белковую структуру и обладает способностью ингибировать два и более факторов свёртывания фибринолиза и систему комплимента. По мере развития беременности происходит постепенное снижение активности антитромбина III. У беременных женщин, начиная с ранних сроков беременности, уровень D-димера в крови постепенно повышается. К концу срока беременности значения его могут быть в 3 — 4 раза выше исходного уровня. Волчаночный антикоагулянт не должен вырабатываться в норме у беременной. У беременных могут наблюдаться незначительные изменения общего анализа крови (№5). Такие показатели как гемоглобин, гематокрит могут снижаться во второй половине беременности, а лейкоциты повышаться (№119)*.

Изменения биохимических показателей

При беременности снижение общей концентрации белка в плазме крови обусловлено как частичным разведением, в результате задержки жидкости в организме, так и понижением концентрации альбумина (№10)*. Снижение альбумина обусловлено усиленным расходованием его на биосинтетические процессы. Однако нельзя исключить фактор повышения проницаемости сосудов и перераспределение жидкости и белка в межклеточном пространстве, нарушение гемодинамики. Изменение концентрации белков крови обнаруживаются и на протеинограмме. В первый и во второй триместр беременности уменьшается альбумин, что связано с физиологической гиперволемией. В третьем триместре выявляется увеличение альфа-1-глобулиновой фракции (№29)*, альфа-фетопротеина (№ 92)*. Альфа-2-глобулиновая фракция (№29)* может повышаться за счет белков, связанных с беременностью (начинают повышаться с 8-12 недели беременности и достигают максимума в III триместре). Бетта-глобулины (№29)* увеличиваются из-за роста концентрации трансферрина (№50)*. Также в большинстве случаев наблюдается незначительное увеличение уровня гамма-глобулинов (№29)*.

Незначительные изменения С-реактивного белка (№43)*, наблюдаемые чаще в ранние сроки беременности, могут быть реакцией организма на процессы пролиферации (усиленного деления клеток). Изменение объёма циркулирующей крови (ОЦК) и кровоснабжения почек приводит к изменениям азотовыделительной функции почек. Происходит задержка и накопление азотистых веществ, при этом количество мочевины (№26)* снижается, особенно в поздние сроки беременности в связи с повышением утилизации белка (положительный азотистый баланс).

Креатинин (№22)* снижается максимально в I — II триместре (его концентрация может снижаться почти в 1,5 раза), что связано с ростом объёма мышечной массы матки и плода. Уровень мочевой кислоты (№27)* чаще снижен за счёт усиления кровоснабжения почек, но даже незначительные нарушения функции почек могут привести к повышению данного показателя, и это расценивается как симптомы токсемии.

Существенно изменяется во время беременности липидный обмен (профиль №53)*. Так как усиливаются окислительные процессы, происходит повышенная утилизация холестерина в надпочечниках, плаценте. Это приводит к компенсаторной транзиторной гиперхолестеринемии, характеризующаяся увеличением показателей холестерола, ЛПВП. Уровень ЛВПП практически не изменяется. Повышение уровня эстрогенов приводит к гипертриглицеридемии, чему способствует гипопротеинемия, функциональный холестаз. При этом усиливается отложение жира в молочных железах, подкожно-жировой клетчатке, данный процесс также связан с увеличением перехода углеводов в жиры за счёт повышения выработки инсулина.

Показатель, отражающий уровень эндогенной секреции инсулина это С-пептид (№148)*. Показатели глюкозы (№16)* могут меняться незначительно, не достигая при этом уровня гипергликемии. Так как во время беременности повышается скорость клубочковой фильтрации и повышается проницаемость эпителия почечных канальцев, то периодически может наблюдаться глюкозурия (физиологическая). Чаще глюкозурия появляется на сроке беременности 27 — 36 недели. Особенностями минерального обмена у здоровых беременных по сравнению с небеременными женщинами является задержка в организме солей натрия, калия, хлора (№39)*, фосфора (№41)*, именно изменения показателей фосфора в организме беременной связано с повышением щёлочной фосфатазы (№36)*. Это обусловлено изменениями во время беременности со стороны костной ткани и изменениями со стороны печени. Как известно, во время беременности повышается потребность в солях кальция, которые необходимы для формирования скелета плода, и у мамы может наблюдаться дефицит кальция (№37)*. Гипокальциемия у беременных может проявляться в судорогах мышц, спастических явлениях. Повышение потребления железа во время беременности может приводить к анемии. Характеризуется данное состояние снижением железа (№48)*, ферритина (№51)*, витаминов: В12 (№117)*, фолиевой кислоты (№118)*. Изменения в эндокринной системе

Гипофиз, особенно передняя доля, увеличивается. Гормоны гипофиза АКТГ (№100)*, пролактин (№61)* играют большую роль в изменении обменных процессов организма беременной. Поэтому эти гормоны могут быть повышены. Плацента, также обладает гормональной активностью. В ней вырабатывается прогестерон (№63)*, эстриол свободный (№134)*, б-ХГЧ (№66)*, данные гормоны схожи по своему действию с соматотропином (№99)*. Претерпевает изменения и щитовидная железа, она несколько увеличивается, и в первой половине беременности отмечается её гиперфункция. Наблюдается повышение Т4 свободного (№55)*, при нормальных показателях Т4 (№54)*. Также отмечается усиление функции паращитовидных желёз относительным повышением паратгормона (№102)*. Выработка ФСГ (№59)* во время беременности снижается. 

* — Номера исследований в Независимой лаборатории ИНВИТРО.

При подготовке статьи использовались данные «Бюллетеня Лабораторной Службы» №9, 2001 г.

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Материнские моноциты при беременности и преэклампсии у людей и крыс

Основные моменты

•

Активация и созревание моноцитов наблюдалась во время беременности.

•

Дальнейшая активация и созревание моноцитов наблюдалась при преэклампсии.

•

Во время беременности крысы в ​​моноцитах происходят такие же изменения, как и во время беременности человека.

•

В моделях преэклампсии на крысах наблюдаются аналогичные изменения в моноцитах, как и во время преэклампсии человека.

•

Крыса является полезной моделью для изучения изменений моноцитов при беременности и экспериментальной преэклампсии.

Реферат

Моноциты — это короткоживущие клетки, возникающие из костного мозга и созревающие в кровотоке. Они играют важную роль в иммунных реакциях и считаются важными для здоровой беременности. У человека были идентифицированы 3 субпопуляции моноцитов: классические, промежуточные и неклассические моноциты.Эти субпопуляции имеют разные функции и фенотипические характеристики. Здоровая беременность характеризуется провоспалительным состоянием с повышенным числом моноцитов и активацией моноцитов, а также с повышенным числом промежуточных моноцитов и пониженным числом классических моноцитов. Это может указывать на созревание моноцитов. Преэклампсия — важное осложнение беременности, характеризующееся гипертонией и протеинурией, развивающимися во второй половине беременности. Патофизиология преэклампсии связана с дальнейшей активацией воспалительной реакции, дальнейшей активацией моноцитов и дальнейшим созреванием моноцитов.В настоящем обзоре мы сосредоточены на роли активации и созревания моноцитов при здоровой и преэклампсической беременности.

Ключевые слова

Моноциты

Субпопуляции моноцитов

Беременность

Преэклампсия

Крыса

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2016 Авторы. Опубликовано Elsevier Ireland Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Вредно ли количество лейкоцитов во время беременности?

Наша цель FirstCry Parenting — предоставить вам наиболее полную, точную и актуальную информацию.

Каждая статья, которую мы публикуем, соответствует строгим правилам и включает несколько уровней рецензирования, как нашей редакционной группой, так и экспертами. Мы приветствуем ваши предложения по повышению полезности этой платформы для всех наших пользователей. Напишите нам по адресу [email protected]

.

Последнее обновление 29 апреля 2020 г.

Беременность приносит много изменений в организм женщины. В течение девяти месяцев женщина претерпевает множество физических, психических и эмоциональных изменений, которые могут быть весьма травматичными, если человек не осознает этих изменений.Одно из таких изменений, вызывающих страх, — это гематологические изменения или изменения, происходящие в крови. Эти изменения связаны с тромбоцитами, гемоглобином, эритроцитами и лейкоцитами.

Что такое белые кровяные тельца?

Клетки иммунной системы — это белые кровяные тельца. Они защищают тело от инопланетных частиц и убивают любые элементы, которые могут причинить телу вред. Эти клетки, известные как лейкоциты, встречаются по всему телу. Следовательно, они становятся индикатором того, насколько человек физически здоров, непригоден или болен.

Какова роль белых кровяных телец?

Белые кровяные тельца, вырабатываемые костным мозгом, выполняют различные функции. В общем, их основная цель — быть в лошадиных силах иммунной системы, но, в частности, разные наборы белых кровяных телец играют разные роли.

1. Нейтрофилы : Они в основном заселены клетками и занимают самое большое помещение. Они борются с инфекциями бактериальной или грибковой природы.
2. Моноциты : они втягивают и всасывают токсичные отходы и бактерии, в конечном итоге уничтожая их.
3. Эозинофилы : это солдаты, которые защищают организм от паразитов и аллергических реакций.
4. Базофилы : они могут составлять менее 1% лейкоцитов, но они упорно работают над регуляризацией кровотока и увеличением клеток иммунной системы, чтобы оставаться сильной во время болезни.
5. Лимфоциты: Вырабатывают антитела против инородных частиц и разрушают их.

Изменения, специфичные для типов WBC

Увеличение или уменьшение этих пяти типов лейкоцитов приведет к изменениям в организме.Это ключевой фактор, вызывающий дисбаланс из-за гемолитических изменений во время беременности.

• Количество лейкоцитов увеличивается, когда иммунная система борется с инфекцией. Высокая популяция этих клеток указывает на необходимость поддержки иммунной системы. Причинами могут быть травмы, беременность, аллергические реакции или аутоиммунное заболевание. Некоторые симптомы, связанные с увеличением количества лейкоцитов, включают лихорадку, головокружение, частые аллергические реакции и воспаление.

• Количество лейкоцитов уменьшается, когда инфекция доминирует над клетками, что ослабляет иммунную систему и еще больше ослабляет организм.Причинами могут быть нарушение работы костного мозга, инфекции и сепсис. Некоторые симптомы, связанные с уменьшением количества лейкоцитов, включают в себя вялость, усталость и серьезные комплексы простых инфекций.

Эти изменения применимы ко всем. Беременные женщины увидят похожие изменения, и в большинстве случаев эти изменения безвредны:

1. Нейтрофилы

Во время беременности количество этих клеток увеличивается, но это не опасно для организма или плода.Это только указывает на реакцию костного мозга на повышенное производство красных кровяных телец.

2. Моноциты

Во время наступления беременности иммунная система матери претерпевает изменения, чтобы не атаковать плод. Одно из наблюдаемых изменений — увеличение моноцитов. Однако побочные эффекты заключаются в том, что это может привести к определенным осложнениям во время беременности, таким как преэклампсия. Чтобы избавиться от этих опасений, врач может порекомендовать пройти тест, если уровень моноцитов слишком высок.

3. Эозинофилы

Количество этих ячеек не изменилось. Любое изменение будет признаком слабого иммунитета или приступа инфекции.

4. Базофилы

Существенных изменений в количестве базофилов нет.

5. Лимфоциты

Он уменьшается в первых двух триместрах и увеличивается в последнем триместре и в послеродовом периоде. Эти изменения связаны с подавлением иммунологической активности во время беременности.

Какое нормальное количество лейкоцитов во время беременности?

Общее количество лейкоцитов у небеременных женщин в среднем составляет от 4500 до 11000 / куб. Мм.Во время беременности минимальное количество, которое необходимо поддерживать, составляет 6000 / куб. Мм. В третьем триместре нормальным считается диапазон от 12000 до 18000 на микролитр.

Что произойдет, если у вас высокий уровень лейкоцитов во время беременности?

По мере того, как иммунная система приспосабливается к росту вашего малыша внутри, вы можете ожидать, что количество лейкоцитов будет увеличиваться с разными интервалами. В этом нет ничего необычного, и любые мысли о серьезной неотложной медицинской помощи должны быть немедленно отброшены.

Однако, если есть такие симптомы, как лихорадка, гипертония, острый стресс или любые другие проблемы, связанные с иммунитетом, немедленно обратитесь к врачу.

Причины высокого количества лейкоцитов во время беременности

Причины увеличения или уменьшения различных типов лейкоцитов у беременной или небеременной женщины схожи. Неизвестное экстремальное увеличение вызывает патологическое состояние, и лучше избегать определенных элементов, которые могут вызвать его увеличение. Здесь объясняются четыре основные причины:

1.Стресс

Стресс во время беременности бывает не только эмоциональным, но и физическим. Это приводит к тому, что количество лейкоцитов выше обычного, чтобы защитить организм от вреда. Поэтому вам следует практиковать йогу и медитацию, чтобы снять стресс.

2. Инфекция

Любая бактериальная или грибковая инфекция, от простуды до ИМП, увеличивает количество белых кровяных телец. Примите меры, чтобы обезопасить себя от таких инфекций. Ваша иммунная система сейчас защищает вас больше, чем когда-либо, поэтому позаботьтесь о себе.

3. Воспаление

Воспалительные заболевания и связанные с ними аллергические реакции также могут привести к увеличению. Лейкоциты устремляются к тем областям, которые нуждаются в помощи и созревают. Помогут дыхательные техники и полное избегание аллергических зон.

4. Лейкемия или аутоиммунное заболевание

Аутоиммунные заболевания, такие как болезнь Крона, болезнь Грейвса или лейкемия, увеличивают нефункциональные лейкоциты. В отличие от других случаев, эти клетки ничего не делают, а просто увеличиваются до тревожных количеств.

Когда обращаться к врачу

Хотя количество лейкоцитов у беременных намного выше, есть определенные симптомы, на которые следует обратить внимание, которые могут быть поводом для беспокойства. Если вы заметили:

, немедленно обратитесь к врачу.

1. Лихорадка и боль

Жар и боль — признаки того, что ваше тело борется с инфекцией. Врачу необходимо диагностировать причину и лечить вас соответствующим образом, прежде чем она нанесет вред вам или плоду.

2.Проблемы с дыханием

Если у вас возникли проблемы с дыханием, например одышка, хрипы и т. Д., Немедленно обратитесь к врачу. Это может быть признаком аллергической реакции в легких, которую необходимо лечить как можно скорее.

3. Сыпь, зуд или крапивница

Кожная аллергия, вызывающая сыпь, зуд, крапивницу или покраснение, может быть потенциально опасной и указывать на инфекцию, поэтому обязательно проконсультируйтесь с врачом для получения соответствующего лечения.

Бесчисленные изменения происходят во время беременности и после нее. Повышение уровня лейкоцитов во время беременности — не повод для беспокойства, но любой признак иммунной слабости — это знак посетить врача. Обычно они меняются, чтобы укрепить материнское тело и матку. Однако продолжайте прислушиваться к своему телу. Если вы чувствуете дискомфорт, обратитесь к врачу и всегда оставайтесь позитивными. Счастливая мать обычно означает счастливую беременность.

Также читайте: Тест CBC во время беременности

Беременность и преэклампсия влияют на подгруппы моноцитов у людей и крыс

Аннотация

Введение

Как неклассические, так и промежуточные моноциты вовлечены в различные воспалительные состояния.Мы предположили, что эти моноциты будут увеличиваться во время беременности, состояние, связанное с генерализованной активацией воспалительных реакций, и что они будут увеличиваться еще больше во время преэклампсии, при которой воспалительные реакции дополнительно стимулируются. В настоящем исследовании мы исследовали изменения в субпопуляциях моноцитов во время здоровой беременности и преэклампсии у людей и крыс.

Методы

Подгруппы моноцитов крови небеременных, преэклампсических и здоровых беременных женщин были идентифицированы с CD14 и CD16.У небеременных и беременных крыс в моноцитах крови были идентифицированы CD172a и CD43, а также у крыс, которым вводили аденозинтрифосфат (АТФ), провоспалительный стимул, который, как известно, вызывает симптомы, подобные преэклампсии. Количество общих и CD206-положительных макрофагов определяли в плаценте этих животных.

Результаты

Более низкий процент классических моноцитов был обнаружен у беременных (91% — [83–98%]) по сравнению с небеременными женщинами (94% — [90–98%]) и еще меньше у пациентов с преэклампсией (90% — [61–98%]). 92%]).Напротив, процент комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов был выше у беременных (8,5% — [2,3–16,6%] против 5,6% — [1,9–9,5%]) и даже выше у пациентов с преэклампсией (9,9% — [7,8%]). –38,7%]), что было вызвано избирательным увеличением промежуточных моноцитов. У крыс мы также обнаружили более низкий процент классических моноцитов и более высокий процент неклассических моноцитов у беременных по сравнению с небеременными крысами. Инфузия АТФ еще больше увеличивала процент неклассических моноцитов у беременных крыс, но не у небеременных крыс.Эти неклассические моноциты показали более активный фенотип только у беременных крыс, которым вводили АТФ. Треугольники мезометрия крыс, которым вводили АТФ, имели меньше CD206-положительных макрофагов по сравнению с таковыми у крыс, которым вводили физиологический раствор.

Заключение

Более высокий процент неклассических / промежуточных моноцитов, обнаруженных при беременности и преэклампсии, подтверждает их связь с воспалительными реакциями. Наблюдение, что АТФ стимулировало количество / активацию неклассических моноцитов у беременных крыс только , предполагает, что неклассические моноциты специфически изменяются во время беременности и могут играть роль в патофизиологии преэклампсии.

Образец цитирования: Melgert BN, Spaans F, Borghuis T, Klok PA, Groen B, Bolt A, et al. (2012) Беременность и преэклампсия влияют на субпопуляции моноцитов у людей и крыс. PLoS ONE 7 (9):
e45229.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229

Редактор: Ана Клаудиа Зенклассен,
Университет Отто фон Герике, Магдебург, Германия

Поступила: 11.06.2012; Одобрена: 20 августа 2012 г .; Опубликован: 13 сентября 2012 г.

Авторские права: © Melgert et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Это исследование финансировалось Голландским фондом почек (грант C08.2266) и Голландским технологическим фондом STW (грант 10704). Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Во время беременности иммунная система матери адаптируется к полуаллогенному плоду [1], [2]. Основное изменение включает значительную активацию врожденной иммунной системы, что отражается в увеличении количества моноцитов периферической крови [3] — [7]. Начиная со второго триместра и далее эти клетки также демонстрируют активированный фенотип, сравнимый с фенотипом, наблюдаемым при системном сепсисе [7] — [11].Моноциты человека состоят из 3 подмножеств в соответствии с Номенклатурным комитетом Международного союза иммунологических обществ [12] и, по-видимому, выполняют разные функции [13]. Являются ли изменения количества моноцитов и поведения во время беременности результатом изменений субпопуляций моноцитов, неизвестно и является предметом настоящего сообщения.

Новая классификация моноцитов основана на экспрессии CD14 (рецептор липополисахарида) и CD16 (рецептор Fcγ III) [12].CD14-hi Моноциты CD16-neg обычно называют «классической подгруппой». Классические моноциты связаны с экстравазацией и воспалением. Проникнув в ткани, эти моноциты развиваются в макрофаги и помогают очищению от патогенов и заживлению ран [14]. Моноциты CD14-lo CD16-hi обычно называют «неклассической подгруппой», а моноциты CD14-hi CD16-int — «промежуточной подгруппой». Предполагается, что промежуточное подмножество представляет собой переходную совокупность между классическим и неклассическим подмножествами [12], и в литературе часто объединяется с неклассическим подмножеством, вместе также называемым неклассическим подмножеством.Функция промежуточного подмножества неизвестна, но считается, что объединенные неклассические и промежуточные подмножества пополняют резидентные в ткани макрофаги и дендритные клетки [14] и, как было показано, продуцируют провоспалительные цитокины [12], [15]. Их провоспалительная связь была также проиллюстрирована тем фактом, что их количество увеличивается во время воспалительных состояний, таких как сепсис [12], [16], [17].

У крыс такое же подразделение субпопуляций моноцитов, как у людей, может быть выполнено на основе маркера CD43 [18].Было обнаружено, что подмножество CD43-lo сходно с классическим подмножеством, а подмножество CD43-hi сходно с неклассическим подмножеством у людей [14]. Таким образом, крыса потенциально может служить моделью для изучения субпопуляций моноцитов во время беременности.

В настоящем исследовании мы исследовали субпопуляции моноцитов в периферической крови беременных и небеременных женщин и крыс. Мы предположили, что, поскольку беременность считается провоспалительным состоянием, в этом состоянии будет увеличиваться, в частности, неклассические / промежуточные моноциты.В дополнение к здоровой беременности мы также исследовали субпопуляции моноцитов у субъектов с преэклампсией, серьезным осложнением беременности с неизвестной этиологией и лишь частично известным патогенезом [19]. Это заболевание возникает в плаценте, которая содержит ишемизированные области. Факторы циркуляции в материнской крови, продуцируемые ишемической плацентой, вызывают эндотелиальную дисфункцию и системные воспалительные реакции, приводящие к клиническим проявлениям заболевания, то есть гипертонии, протеинурии и отекам [20].Системный воспалительный ответ отражается значительным увеличением моноцитов периферической крови и измененным статусом активации этих моноцитов по сравнению со здоровой беременностью [21] — [26]. Поэтому мы предположили, что во время преэклампсии количество неклассических / промежуточных моноцитов может даже увеличиваться по сравнению с нормальной беременностью.

Изменения в моноцитах во время преэклампсии могут быть результатом наличия провоспалительных факторов. Одним из провоспалительных факторов, повышенных в крови женщин с преэклампсией, является аденозинтрифосфат (АТФ) [28].Ранее мы показали, что инфузия АТФ беременным крысам оказывает провоспалительное действие и вызывает симптомы, подобные преэклампсии [29]. Следовательно, АТФ может быть фактором, влияющим на субпопуляции моноцитов у беременных. Таким образом, мы также изучили, может ли введение беременным крысам провоспалительного стимула АТФ вызывать изменения в субпопуляциях моноцитов, аналогичные тем, которые наблюдаются при преэклампсии у человека.

Было показано, что

моноциты инфильтрируют децидуальную оболочку с наступлением беременности и развиваются в регуляторные макрофаги и незрелые дендритные клетки [30] — [34].Было высказано предположение, что эти макрофаги необходимы для правильного ремоделирования спиральной артерии и индукции толерантности плода [32], [35], [36], но неизвестно, развиваются ли они из одной конкретной субпопуляции моноцитов. Поэтому мы также изучили плаценту этих беременных крыс, чтобы оценить, будет ли АТФ влиять на количество регуляторных макрофагов в децидуальной оболочке.

Материалы и методы

Заявление об этике

Настоящее исследование на людях было проведено после одобрения Комитета по медицинской этике (номер заявки NL25930.042.08) в Университетском медицинском центре Гронингена. Подписанные формы информированного согласия были получены от всех участников.

Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Университета Гронингена (номер заявки DEC-4270C). Все операции проводились под изофлурановой / кислородной анестезией, и были предприняты все усилия, чтобы минимизировать страдания, включая использование бупренорфина для снятия боли после операции.

Пациенты

Пациенты с преэклампсией с ранним началом (n = 26) и здоровые беременные из контрольной группы (n = 23) были набраны из женского отделения Медицинского центра Университета Гронингена.Преэклампсия определялась в соответствии со стандартами Международного общества по изучению гипертонии у беременных (ISSHP): диастолическое артериальное давление 90 мм рт. часы [37]. Мы включили женщин с преэклампсией с ранним началом, определяемым как начало преэклампсии до 34 недель. Образцы крови были взяты у небеременных женщин, а также у пациентов с преэклампсией и здоровых беременных женщин между 28 и 32 неделями беременности.Небеременные женщины (n = 19) были набраны из персонала больницы и студентов. Критериями исключения для всех групп были ранее существовавшая артериальная гипертензия, сахарный диабет, васкулит, заболевание почек, аутоиммунное заболевание, злокачественные новообразования или женщины, недавно перенесшие травму или операцию.

Образцы материнской крови как беременных, так и преэкламптических женщин были собраны во время обычного отбора проб крови. Образцы крови отбирали из антекубитальной вены в пробирки объемом 10 мл, содержащие ЭДТА (Venoject, Terumo Europe NV, Лёвен, Бельгия).Образцы были немедленно подготовлены для проточной цитометрии. См. Таблицу 1 с характеристиками пациента.

Количество лейкоцитов в крови человека

Перед окрашиванием клеток для проточной цитометрии часть (500 мкл) образцов крови человека использовали для определения общего количества лейкоцитов в крови. Лейкоциты подсчитывали с помощью счетчика микроэлементов (модель Sysmex PocH 100i, Sysmex Netherlands, Etten-Leur, Нидерланды).

Окрашивание крови человека для проточной цитометрии

Все образцы крови немедленно разбавляли RPMI-1640 (1 ± 1) и инкубировали с PE-конъюгированными анти-CD16-антителами (Biolegend, Uithoorn, Нидерланды) и с FITC-конъюгированными анти-CD14-антителами (Biolegend) в течение 30 минут в темнота.Затем эритроциты лизировали с использованием лизирующего раствора BD FACS ^TM (BD Biosciences, Бреда, Нидерланды) в течение 5 минут. Затем клетки дважды промывали (1% бычьим сывороточным альбумином в PBS), фиксировали 2% параформальдегидом и хранили в темноте при 4 ° C (не более одного дня) до анализа FACS. Все этапы выполнялись при комнатной температуре.

Сбор и оценка данных

Данные были собраны на проточном цитометре BD LSR II (BD Biosciences) и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree star, Inc., Ашленд, Орегон, США). За один анализ было подсчитано не менее 200000 событий.

В стратегии стробирования, используемой для анализа трех субпопуляций моноцитов в крови человека, сначала были выбраны живые клетки из графика прямого / бокового рассеяния (см. Рис. 1A). Впоследствии моноциты были отобраны из живых клеток на графике прямого / бокового рассеяния и затем скопированы на график CD14 / CD16 (см. Рисунок 1B). Были идентифицированы три подмножества: CD14-hi, CD16-neg (классическая подгруппа), CD14-lo, CD16-hi (неклассическая подгруппа) и CD14-hi, CD16-int (промежуточная подгруппа) (см. Фигуру 1С).Были рассчитаны процентные доли трех популяций в популяции моноцитов (% моноцитов). Мы использовали официальную номенклатуру для 3 подмножеств, но для сравнения с другими, более старыми публикациями, в которых не делалось различий между неклассическими и промежуточными моноцитами, мы также использовали комбинированную неклассическую / промежуточную подгруппу. Абсолютное количество моноцитов рассчитывали, используя количество лейкоцитов и процент моноцитов в популяции живых клеток.

Рисунок 1.Стратегия стробирования проточной цитометрии для субпопуляций моноцитов в периферической крови человека.

Мертвые клетки были исключены путем отбора всех живых клеток из графика прямого / бокового рассеяния (A), после чего были отобраны моноциты (B). Впоследствии клетки были построены для определения их экспрессии CD14 и CD16, после чего можно было выбрать и проанализировать три отдельные субпопуляции моноцитов (классические, неклассические и промежуточные) (C).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g001

Животные

Самок беспородных крыс линии Wistar (около 200 г) содержали в помещении с регулируемой температурой и освещением (свет включается с 7:30 до 19:30) со свободным доступом к пище и воде. До отбора для экспериментов мазки из влагалища брали ежедневно, и крыс забеременели, поместив их в период проэструса с фертильными самцами на одну ночь.

Когда сперматозоиды были обнаружены в мазке на следующий день, этот день был обозначен как день 0 беременности. У ряда крыс канюля вводилась в правую яремную вену под изофлурановой / кислородной анестезией, как описано ранее [38].Эта канюля позволяет проводить забор крови и инфузии без стресса. Были приложены все усилия, чтобы минимизировать страдания животных.

Экспериментальный план эксперимента на животных

В первом эксперименте мы проверили, изменились ли субпопуляции моноцитов при беременности крыс, как и при беременности человека. В этом эксперименте беременных (20 день; n = 5) и небеременных (n = 5) крыс умерщвляли пункцией аорты под анестезией (изофлуран / кислород). Образцы крови с ЭДТА были взяты для анализа количества лейкоцитов и проточной цитометрии.

Во втором эксперименте крысам вводили провоспалительный стимул АТФ [29], [39], чтобы оценить, увеличивает ли провоспалительный стимул во время беременности неклассическую подгруппу моноцитов. Беременным крысам вводили 3000 мкг / кг АТФ в 2,0 мл физиологического раствора (n = 9) или только 2,0 мл физиологического раствора (n = 7) на 14 день беременности, как описано ранее [29]. Небеременным крысам вводили 3000 мкг / кг АТФ в 2,0 мл физиологического раствора (n = 6) или только физиологический раствор (n = 5) во время диэструса.Для определения количества лейкоцитов и для проточной цитометрии образцы крови с ЭДТА (0,4 мл) были взяты из канюли яремной вены за 7 дней до (7-й день), за 1 день до (13-й день), через 1 день после (15-й день) и через 3 дня после. (17 день) настой. Образцы крови на 20 день брали во время умерщвления пункцией аорты под анестезией (изофлуран / кислород). Во время умерщвления плаценты с мезометриальным треугольником отделяли от рога матки и фиксировали в параформальдегиде (4%) в течение 24 часов. Затем их переводили в спирт (70%) до замачивания в парафине.

Лейкоциты крови крыс

Перед окрашиванием клеток для проточной цитометрии 20 мкл крови крысы с ЭДТА разводили в 500 мкл буфера pOCH (Sysmex, Нидерланды) для подсчета лейкоцитов. Лейкоциты подсчитывали с помощью счетчика микроэлементов (модель Sysmex PocH 100i, Sysmex, Нидерланды).

Окрашивание крови крыс для проточной цитометрии

Образцы цельной крови окрашивали для идентификации субпопуляций моноцитов (т.е. для экспрессии CD172a и CD43), а у крыс из эксперимента 2 также исследовали статус активации моноцитов с использованием экспрессии CD4 и CD62L.Образцы промывали PBS и затем инкубировали с PE-конъюгированным анти-CD172a (Biolegend) и AlexaFluor647-конъюгированным анти-CD43 (Biolegend) для идентификации двух субпопуляций моноцитов (30 минут в темноте). Кроме того, образцы крыс из эксперимента 2 также инкубировали с FITC-конъюгированными анти-CD4 (BD Pharmingen) и PercP-конъюгированными анти-CD62L (Biolegend) или с изотипическими контролями для оценки статуса активации моноцитов. После инкубации антител клетки промывали 0,5 мл буфера FACS (PBS с 2% эмбриональной телячьей сывороткой и 1,3 мМ EDTA), эритроциты лизировали и лейкоциты фиксировали путем инкубации с BD FACS ^TM Lysing Solution (BD Биологические науки) в течение 30 минут.Затем клетки дважды промывали, ресуспендировали в буфере FACS и хранили в темноте при 4 ° C (не дольше одного дня) до анализа FACS. Все этапы выполнялись при комнатной температуре.

Сбор и оценка данных

Данные были собраны на проточном цитометре BD LSR II (BD Biosciences) и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree star). За один анализ было подсчитано не менее 200000 клеток.

В стратегии стробирования, используемой для анализа субпопуляций моноцитов в крови крыс, сначала были выбраны живые клетки из графика прямого / бокового рассеяния (см. Рис. 2A).Из живых клеток были нарисованы широкие ворота вокруг моноцитов (моноциты крысы часто не являются отдельной популяцией в прямом / боковом разбросе, поэтому, чтобы обязательно включить все моноциты, мы решили установить более широкие ворота в прямом / боковом разбросе) и скопированы на точечный график, на котором классические (CD43-lo) и неклассические (CD43-hi) моноциты были идентифицированы на основе экспрессии CD43 и CD172a (см. рис. 2B – D).

Рисунок 2. Стратегия стробирования проточной цитометрии для субпопуляций моноцитов в периферической крови крыс.

Мертвые клетки и эритроциты были исключены путем отбора всех живых клеток на графике прямого / бокового рассеяния (A), после чего были выбраны широкие ворота вокруг моноцитов и гранулоцитов (B) и скопированы на график CD172a / CD43 ( C). Общая популяция моноцитов (использованная для расчета общего числа моноцитов) была выбрана из графика CD172a / CD43 (C) и затем нанесена на новый график для расчета процентного содержания двух классических (CD43-lo) и неклассических (CD43-hi) ) подмножества в общей популяции моноцитов (D).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g002

Для анализа экспрессии CD4 и CD62L на субпопуляциях моноцитов образцы крови, окрашенные контрольными изотипами, использовали для установки ворот, которые для каждой флуоресцентной метки (FITC для CD4 и PercP для CD62L) содержали не более 1% населения. Впоследствии этот гейт был скопирован в образцы, окрашенные CD4 и CD62L, после чего была рассчитана средняя интенсивность флуоресценции (MFI) экспрессии CD4 и CD62L на моноцитах.

На основе этих данных рассчитывали либо процент моноцитов определенной подгруппы в общем гейте моноцитов (% моноцитов), либо процент подгруппы моноцитов во всей живой популяции (% живых). Рассчитывали процентное отклонение на крысу с 13-го дня. Абсолютное количество моноцитов рассчитывали с использованием количества лейкоцитов и процентного содержания клеток CD172a + в популяции живых клеток.

Иммуногистохимический анализ CD68 и CD206

Суммарные макрофаги / моноциты и M2-подобные макрофаги были идентифицированы путем окрашивания на CD68 (разведение 1-100, клон ED1, AbD Serotec, Дюссельдорф, Германия) и CD206 (разведение 1-1000; Abcam, Кембридж, Великобритания) соответственно в соответствии со стандартом. методы.Короче говоря, фиксированные параформальдегидом (4%) парафиновые срезы (4 мкм) плаценты от крыс, которым вводили физиологический раствор или АТФ, депарафинизировали и инкубировали в 10 мМ Трис / 1 мМ буфере EDTA, pH = 9 (для CD68, 15 мин) или в 10 мМ цитратный буфер pH = 6 (для CD206, 10 мин) при 100 ° C для извлечения антигена. После инкубации с 10% нормальной козьей сывороткой (30 мин) в качестве первого шага (60 мин) использовали мышиные анти-CD68 или кроличьи антитела против CD206. Срезы промывали PBS (pH = 7,2), эндогенную пероксидазную активность блокировали с помощью 3% H ₂ O ₂ в метаноле, а эндогенную активность авидина / биотина блокировали с помощью набора для блокирования биотина (Dako, Heverlee, Бельгия).После промывания PBS на втором этапе добавляли конъюгированные с биотином козьи антимышиные (для CD68, Southern Biotech, Бирмингем, AL, США) и конъюгированные с биотином козьи антимышиные антитела (для CD206, Dako) (30 мин. .). Срезы промывали PBS, добавляли стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой (Dako) (30 мин), и затем визуализировали окрашивание с помощью 3-амино-9-этилкарбазола. Гематоксилин использовали для окрашивания ядер. Все этапы инкубации процедур окрашивания проводились при комнатной температуре.Контрольные срезы, которые всегда были отрицательными, представляли собой срезы, инкубированные без первого антитела.

Морфометрический анализ иммуногистохимических окрашиваний

Срезы, окрашенные на CD68 и CD206, сканировали с помощью Aperio ScanScope CS и анализировали с помощью Aperio ImageScope v10.2.2.2319 (Aperio, Vista, CA, USA). Алгоритм «Подсчет положительных пикселей V9» использовался для анализа CD68 или CD206-положительных (красных) пикселей, а также общего количества неокрашенных пикселей ткани как в децидуальной оболочке, так и в мезометрическом треугольнике (сравнимом с плацентарным ложем человека) плаценты крысы.Впоследствии эти данные были использованы для расчета процентного содержания CD68 или CD206-положительной ткани в каждом из двух отсеков.

Статистический анализ

Для статистического анализа различий в подмножествах моноцитов в образцах крови человека мы использовали непараметрический тест Краскалла-Уоллиса с последующим U-тестом Манна-Уитни. Для тестирования различий между субпопуляциями моноцитов в первом эксперименте на крысах и тестирования различий в окрашивании на CD68 и CD206 также выполнялись U-тесты Манна-Уитни.Для статистического анализа продольных данных во втором эксперименте на крысах были выполнены непараметрические тесты с повторными измерениями Фридмана, за которыми следовали посттесты Данна, сравнивающие значения до 13-го дня до инфузии со значениями на 15, 17 или 20 день после инфузии. Различия считались значимыми, если р <0,05, и статистической тенденцией, если р <0,1. Данные представлены в виде медианы с отображением либо размаха, либо межквартильного размаха.

Результаты

Субпопуляции моноцитов периферической крови человека у беременных и лиц с преэклампсией

По сравнению с небеременными женщинами, значительно большее количество лейкоцитов было обнаружено у здоровых беременных женщин и даже больше у женщин с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами (Таблица 2).Кроме того, общее количество моноцитов было значительно выше у здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными (таблица 2).

Для изучения изменений субпопуляций моноцитов во время беременности и преэклампсии периферическую кровь небеременных, здоровых беременных и преэклампсий окрашивали на 3 субпопуляции, то есть классическую, неклассическую и промежуточную субпопуляции. Значительно более низкий процент классических моноцитов (определяемый как процент от общей популяции моноцитов) был обнаружен у здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными контрольными женщинами (p <0.01, рисунок 3А). У пациентов с преэклампсией процент классических моноцитов был даже ниже по сравнению со здоровыми беременными женщинами (p <0,05, рис. 3A). С другой стороны, процент комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов был значительно выше у здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными (p <0,01, рис. 3B) и даже выше у пациентов с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами (p <0,05). , Рисунок 3B).

Рис. 3. Субпопуляции человеческих моноцитов в периферической крови.

Более низкий процент классических моноцитов наблюдался у здоровых беременных женщин (Pr, квадраты) по сравнению с небеременными (NP, кружки) и еще меньше у преэкламптических женщин (PE, треугольники) по сравнению со здоровыми беременными женщинами (A). Более высокий процент комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов был обнаружен у беременных женщин по сравнению с небеременными женщинами и даже более высокий процент у пациентов с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами (B). При подразделении на неклассические и промежуточные моноциты не наблюдалось значительных изменений в неклассических моноцитах (C), хотя тенденция к более низким неклассическим моноцитам наблюдалась у преэкламптических женщин по сравнению со здоровыми беременными женщинами.Напротив, более высокий процент промежуточных моноцитов был обнаружен у здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными женщинами и даже более высокий процент у пациентов с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами (D). Показаны медианы, # p <0,1, * p <0,05; ** р <0,01; *** p <0,001; U-тест Манна-Уитни.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g003

Разделение комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов на неклассическую подгруппу и промежуточную подгруппу [12] не показало значительных различий в процентном соотношении неклассических моноцитов между три группы (рис. 3C), хотя тенденция к снижению неклассических моноцитов наблюдалась у женщин с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами.Напротив, значительно более высокий процент промежуточных моноцитов был обнаружен в периферической крови здоровых беременных женщин по сравнению с небеременными (p <0,01, рис. 3D) и даже более высокий процент в периферической крови пациентов с преэклампсией по сравнению со здоровыми беременными женщинами (p < 0,001, рисунок 3D).

Субпопуляции моноцитов периферической крови крыс во время беременности

И количество лейкоцитов периферической крови (тенденция), и общее количество моноцитов (p <0,05) были выше у беременных крыс по сравнению с небеременными крысами (таблица 3).У крыс различают только две субпопуляции моноцитов: неклассические (CD43-hi) и классические (CD43-lo) моноциты. Чтобы оценить, происходят ли аналогичные изменения в субпопуляциях моноцитов при беременности крыс, как и при беременности человека, мы сравнили процентное содержание классических и неклассических моноцитов в периферической крови небеременных и беременных крыс в конце беременности (день 20). У беременных крыс процент классических моноцитов был значительно ниже, в то время как процент неклассических моноцитов был значительно выше по сравнению с небеременными крысами (p <0.01, рис. 4A и B).

Рис. 4. Субпопуляции моноцитов крыс в периферической крови на 20-й день беременности.

В конце беременности (20-й день) у крыс (Pr, квадраты) процент классических моноцитов уменьшается (A) и процент неклассических моноцитов увеличивается (B) по сравнению с небеременными крысами (NP, кружки). Показаны медианы, ** p <0,01; U-тест Манна-Уитни.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g004

Влияние провоспалительного АТФ на субпопуляции моноцитов во время беременности крысы

Поскольку беременность и преэклампсия являются провоспалительными состояниями, мы исследовали во втором эксперименте, может ли провоспалительный стимул во время беременности вызвать увеличение неклассических моноцитов, наблюдаемое при беременности и преэклампсии у человека.В качестве провоспалительного стимула мы использовали АТФ, поскольку он повышается при преэклампсии [28] и вызывает симптомы, подобные преэклампсии, у беременных крыс [29].

В качестве контроля мы использовали беременных крыс, которым вводили физиологический раствор, что позволило нам изучить ход изменений субпопуляций моноцитов во время беременности. На рисунках 5A и B показано, что моноциты CD43-lo существенно не различаются между беременными и небеременными животными в течение беременности (сравнения были сделаны между беременными крысами, получавшими физиологический раствор, и небеременными крысами, получавшими физиологический раствор), и что моноциты CD43-hi больше в беременные крысы, начиная с 13 дня.

Рис. 5. Субпопуляции моноцитов крысы после инфузии АТФ или физиологического раствора.

Никаких изменений в классических моноцитах (в процентах от живых клеток) (A) не было обнаружено после инфузии АТФ (сплошная линия, сплошные символы) или физиологического раствора (пунктирная линия, незакрашенные символы) между беременными (Pr, квадраты) и небеременными (NP, кружки) крысам, которым вводили инфузию на 14 день беременности, тогда как процент неклассических моноцитов (B) увеличивался после инфузии АТФ только у беременных крыс. Показаны медианы с межквартильным размахом, * p <0.05 в тесте с повторными измерениями Фридмана с последующим пост-тестом Данна по сравнению с 13-м днем ​​(до вливания). a = p <0,05 и b = p <0,1 в физиологическом растворе для беременных по сравнению с физиологическим раствором для небеременных по результатам тестирования с Mann Whitney U в тот же день. НП + физиологический раствор n = 5; НП + АТФ n = 6; Pr + физиологический раствор n = 7; Пр + АТФ п = 9.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g005

Никаких эффектов инфузии АТФ по сравнению с инфузией физиологического раствора не наблюдалось на процентное содержание субпопуляций моноцитов у небеременных крыс (рисунки 5A и 5B).Однако у беременных крыс инфузия АТФ вызвала значительное увеличение процента неклассических моноцитов на 17-й и 20-й день беременности по сравнению со значениями до инфузии на 13-й день, в то время как это значительное увеличение не наблюдалось у беременных животных, которым вводили физиологический раствор. (р <0,05, рис. 5В). Не было обнаружено изменений процентного содержания классических моноцитов после инфузии АТФ или физиологического раствора у беременных или небеременных крыс (рис. 5А).

Чтобы выяснить, активирует ли АТФ моноциты, мы оценили экспрессию CD62L и CD4 до и после инфузии АТФ или физиологического раствора у беременных крыс и у небеременных крыс.CD62L и CD4 являются маркерами ранней и поздней активации моноцитов крысы, соответственно, и их экспрессия, как известно, снижается после активации [21], [40] — [43]. Через день после инфузии АТФ беременным крысам экспрессия маркера ранней активации CD62L на неклассических моноцитах была снижена (тренд p <0,1 на 15 день, фиг.6А) по сравнению со значениями до инфузии. В более поздние сроки для этого маркера не было обнаружено различий. С другой стороны, экспрессия CD4 на неклассических моноцитах существенно не отличалась от значений до инфузии вскоре после инфузии АТФ (дни 15 и 17), но была значительно снижена на 20 день (p <0.05 на 20-й день, рис. 6В). Не наблюдали изменений в экспрессии CD4 и CD62L на классических моноцитах после инфузии АТФ или физиологического раствора беременным крысам (данные не показаны). Более того, не наблюдали влияния экспрессии CD62L и CD4 на классические или неклассические моноциты после инфузии АТФ или физиологического раствора небеременным крысам (данные не показаны).

Рисунок 6. Активация неклассических моноцитов после инфузии АТФ у беременных крыс.

Активацию неклассических моноцитов оценивали по более низкой средней интенсивности флуоресценции (MFI) двух маркеров активации, CD62L (A, маркер ранней активации) и CD4 (B, маркер поздней активации) [21], [40].Снижение экспрессии CD62L было обнаружено у крыс, подвергнутых инфузии АТФ, только на неклассических моноцитах на 15-й день беременности (тенденция) по сравнению с 13-м днем ​​до инфузии, в то время как экспрессия CD4 на неклассических моноцитах была снижена на 20-й день беременности по сравнению с пре-инфузионным днем. 13 человек в той же экспериментальной группе. Показаны отклонения в процентах от 13-го дня до инфузии. Показаны медианы с межквартильным размахом: # p <0,1 (тренд), * ​​p <0,05 в тесте с повторными измерениями Фридмана с последующим пост-тестом Данна по сравнению с 13-м днем ​​(до инфузии).НП + физиологический раствор n = 5; НП + АТФ n = 6; Pr + физиологический раствор n = 7; Пр + АТФ п = 9.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g006

Влияние провоспалительного АТФ на общие и M2-подобные макрофаги в плаценте крысы

Чтобы выяснить, связаны ли обнаруженные нами изменения в подгруппах моноцитов с изменениями в M2-подобных / регуляторных макрофагах в плаценте, мы количественно определили процентное содержание общих макрофагов (CD68-позитивные макрофаги) и M2-подобных / регуляторных макрофагов (CD206-позитивные макрофаги). ) в децидуальной оболочке и мезометриальном треугольнике (сравнимом с плацентарным ложем человека) плаценты крыс, подвергшихся воздействию физиологического раствора или АТФ (путем количественной оценки процента положительно окрашенной области в общей площади децидуального / мезометрического треугольника).

Большая часть окрашенных на CD68-положительные макрофаги была локализована в нижней части децидуальной оболочки, соседней с трофоспонгием, в то время как только несколько CD206-положительных макрофагов были обнаружены в децидуальной оболочке. Мы не обнаружили различий в процентном соотношении площади, окрашенной на CD68-позитивные и CD206-позитивные децидуальные макрофаги, у крыс, которым вводили физиологический раствор и АТФ (Фигуры 7A и 7C).

Рис. 7. Общее количество и CD206-положительные макрофаги в плаценте беременных крыс, которым вводили физиологический раствор и АТФ.

Никаких изменений в целом, CD68-положительные макрофаги (в процентах положительно окрашенной ткани) не были обнаружены после инфузии АТФ (квадраты) в децидуальной оболочке (A) и мезометриальном треугольнике (B) по сравнению с инфузией физиологического раствора (кружки).Было обнаружено, что окрашивание на CD206-положительные макрофаги ниже в ткани мезометрия (D) крыс, которым вводили АТФ, по сравнению с физиологическим раствором. Не было обнаружено различий для CD206 в децидуальной ткани между АТФ и крысами, которым вводили физиологический раствор (C). Показаны медианы, #p <0,1; U-тест Манна-Уитни.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0045229.g007

Макрофаги в мезометрическом треугольнике располагались по всему интерстицию и вокруг спиральных артерий. Мы не обнаружили различий в процентном соотношении площади, окрашенной на CD68-позитивные макрофаги мезометрия, у крыс, которым вводили физиологический раствор и АТФ (рис. 7В).CD206-положительные макрофаги в основном располагались вокруг спиральных артерий на внешнем крае мезометриального треугольника рядом с продольным слоем мышц миометрия. Было обнаружено, что процент площади, окрашенной для этих макрофагов, был ниже (p <0,1, тенденция) у крыс, которым вводили АТФ, по сравнению с крысами, которым вводили физиологический раствор (фигура 7D).

Обсуждение

Это исследование показывает, что процент комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов выше во время беременности у людей и крыс по сравнению с небеременными контрольными.Это увеличение неклассических / промежуточных моноцитов соответствует общему мнению о том, что беременность напоминает провоспалительное состояние [8]. Большинство исследований субпопуляций моноцитов сосредоточено на комбинированных неклассических / промежуточных моноцитах. В настоящем сообщении мы также исследовали отдельные промежуточные и неклассические подмножества, присутствующие у людей. Мы обнаружили, что более высокий процент промежуточных моноцитов по сравнению с неклассическими моноцитами отвечает за более высокий процент комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов.У беременных с преэклампсией, состоянием с еще более усиленным провоспалительным статусом по сравнению со здоровой беременностью [20], эти различия были еще более заметными. Более того, данные, полученные на беременных крысах, предполагают, что более высокий процент неклассических моноцитов индуцируется циркулирующими провоспалительными стимулами, присутствующими во время преэклампсии (АТФ в настоящем исследовании), и сопровождается меньшим количеством регуляторных / M2-подобных макрофагов вокруг спиральных артерий. в мезометриальном треугольнике.

Изменения в подгруппах моноцитов, наблюдаемые в этом исследовании, подтверждают мнение о том, что беременность является провоспалительным состоянием, которое еще более заметно при преэклампсии. Иммунологически беременность характеризуется сдвигом от Th2-ответа к Th3-ответам и генерализованной активацией неспецифического иммунитета [8], [44], [45]. Наблюдаемые изменения в субпопуляциях моноцитов в третьем триместре беременности могут хорошо соответствовать этому измененному воспалительному статусу, поскольку более высокое количество комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов было связано с несколькими воспалительными заболеваниями [46] — [49].Например, большее количество циркулирующих комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов было зарегистрировано при сепсисе, ревматоидном артрите, инфекции ВИЧ-1, метастатическом раке, туберкулезе и астме [46] — [49]. Комбинированная подгруппа неклассических / промежуточных моноцитов состоит из 2 подгрупп, и наши данные показывают, что увеличение промежуточных моноцитов отвечает за более высокий процент этой комбинированной подгруппы при здоровой беременности и преэклампсии. Данные других воспалительных состояний (сепсис, астма, ревматоидный артрит, атеросклероз, ВИЧ-1-инфекция) подтверждают, что промежуточные моноциты, как правило, присутствуют в больших количествах во время воспаления [46], [48], [50], [51] .

Хотя точные функции различных субпопуляций моноцитов остаются неопределенными, по сравнению с классическими моноцитами, комбинированные неклассические / промежуточные моноциты продуцируют более высокие количества TNF-α и IL-1β после стимуляции, проявляют более низкую фагоцитарную активность и обладают более высокой антиген-презентирующей способностью [15]. , [46], [51] — [54]. Что касается функции различных субпопуляций моноцитов во время беременности, насколько нам известно, никаких конкретных данных опубликовано не было. В небеременных ситуациях исследования показали, что транскриптом промежуточной подгруппы согласуется с провоспалительными характеристиками и что эти моноциты демонстрируют высокую продукцию токсичных кислородных радикалов [51].Данные других исследований показывают, что неклассические моноциты, в отличие от промежуточных моноцитов, готовы к выходу из кровообращения, потому что они имеют наивысшую экспрессию генов, участвующих в адгезии и трансэндотелиальной миграции [51], [55], [56]. Следовательно, может показаться, что неклассические моноциты играют определенную роль в тканях, потому что они демонстрируют фенотип, допускающий экстравазацию, и что промежуточные моноциты играют роль циркулирующих провоспалительных клеток, представляющих первую линию защиты хозяина.Повышенное состояние активации этих клеток может быть необходимо для компенсации адаптации адаптивного иммунитета во время беременности, то есть перехода от иммунных ответов типа Th2 [44].

Поскольку функциональные исследования субпопуляций человеческих моноцитов in vivo ограничены, мы исследовали, коррелируют ли обнаруженные нами изменения у беременных женщин с беременными крысами. У крыс обнаружены только две субпопуляции моноцитов. Они характеризуются высокой экспрессией CD172a (сигнально-регуляторный белок альфа) и низкой или высокой экспрессией CD43 (лейкосиалин) [18].Было обнаружено, что моноциты CD172a + CD43-lo сравнимы с классическими моноцитами, а моноциты CD172a + CD43-hi — с неклассическими моноцитами, при этом не сообщалось о дальнейшем подразделении этих неклассических моноцитов [14]. В конце беременности у здоровых беременных крыс мы обнаружили более высокий процент общих моноцитов в среднем по сравнению с небеременными животными, что аналогично ситуации с человеком. Более того, неклассическая подгруппа также была выше во время беременности у крыс, как и у человека. Это увеличение неклассических моноцитов наблюдалось уже с 13 дня беременности до конца беременности, что позволяет предположить, что провоспалительное состояние у крыс развивается на второй неделе беременности.Будет ли это время совпадать у людей, еще предстоит исследовать. Однако ранее было показано, что фенотипическая активация моноцитов увеличивается во втором триместре и еще больше увеличивается в третьем триместре [7], что позволяет предположить, что и при беременности у человека провоспалительное состояние развивается во втором триместре.

Чтобы выяснить, может ли более высокий процент неклассических моноцитов при преэклампсии быть вызван провоспалительными стимулами, мы вливали беременным крысам АТФ, провоспалительный стимул [29].Мы обнаружили дальнейшее увеличение неклассических моноцитов у беременных крыс, которым вводили АТФ, по сравнению с контрольными беременными крысами, которым вводили физиологический раствор. Это подтверждает нашу гипотезу о том, что провоспалительный стимул при преэклампсии ответственен за увеличение неклассических моноцитов в этом состоянии. Кроме того, у женщин с преэклампсией наблюдаются более высокие уровни АТФ по сравнению со здоровыми беременными, что позволяет предположить, что при преэклампсии АТФ может играть патофизиологическую роль [28].

Увеличение процента неклассических моноцитов после инфузии АТФ сопровождается более высоким статусом активации этой субпопуляции моноцитов по сравнению с обработкой физиологическим раствором.Для оценки их статуса активации мы использовали два маркера, которые, как известно, подавляются во время активации моноцитов, то есть CD62L (L-селектин) и CD4. CD62L быстро, но временно, выделяется после провоспалительных сигналов [41], [42], в то время как CD4 подавляется в течение более длительных периодов времени [40], [43]. Выделение CD62L считается защитным механизмом против чрезмерного или аберрантного рекрутирования моноцитов [42], в то время как функция подавления CD4 остается неизвестной. Интересно, что АТФ не оказывает такого воздействия на моноциты небеременных животных или классические моноциты беременных животных.По-видимому, состояние беременности per se изменяет реакцию неклассических моноцитов, что приводит к усиленной активации после провоспалительного стимула. Мы предполагаем, что характеристики преэклампсии после инфузии АТФ беременным крысам опосредованы (по крайней мере частично) повышенной активностью неклассических моноцитов [29], [57].

Наше исследование показывает, что изменения в подмножествах моноцитов в периферическом кровообращении в нашей модели на крысах, по-видимому, сопровождаются изменениями в подмножествах макрофагов в мезометрическом треугольнике, т.е.е. плацентарное ложе. Тенденция к уменьшению количества M2-подобных или регуляторных макрофагов наблюдалась в мезометриальном треугольнике на 20-й день беременности у крыс, которым вводили АТФ, по сравнению с контрольными крысами, которым вводили физиологический раствор. Это может быть похоже на ситуацию с человеком, в которой мы ранее показали более низкую экспрессию маркеров макрофагов M2 в децидуальных беременностях, позже осложненных гипертензией, вызванной беременностью [58]. Однако наши исследования до сих пор не дают ответа на вопрос, как связаны количество и тип моноцитов периферической крови и плацентарных макрофагов.Из исследований на мышах было высказано предположение, что классические моноциты инфильтрируют остро воспаленную ткань [59], в то время как неклассические моноциты, как предполагается, пополняют тканевые макрофаги в условиях устойчивого состояния [27], [60]. Возникает соблазн предположить, что во время нормальной беременности неклассические моноциты инфильтрируют мезометриальный треугольник и что этот процесс ингибируется после инфузии АТФ у беременных крыс.

Точный механизм, который вызывал более высокий процент неклассических моноцитов при беременности и преэклампсии, еще предстоит установить.АТФ, как предполагалось выше, а также провоспалительные цитокины, высвобождаемые из плаценты, могут быть ответственны за это [61], а также за выделение микрочастиц синцитиотрофобластной мембраны (STBM) [62]. Было обнаружено, что STBM активируют моноциты и значительно увеличиваются во время преэклампсии [63] — [65], но, к сожалению, ни одно из этих исследований не рассматривало различные субпопуляции моноцитов. Недавние исследования, посвященные взаимодействию между активированными тромбоцитами и моноцитами, также могут предложить объяснение увеличения промежуточных моноцитов [66].Преэклампсия характеризуется активацией тромбоцитов [67], и эти исследования показали, что активированные тромбоциты увеличивают пул промежуточных моноцитов в зависимости от циклооксигеназы-2 [66].

В заключение, во время беременности у людей и крыс процент провоспалительных комбинированных неклассических / промежуточных моноцитов выше, что соответствует провоспалительному статусу здоровой беременности. У людей это увеличение вызвано увеличением промежуточных моноцитов в этой комбинированной неклассической / промежуточной подгруппе моноцитов.Во время преэклампсии количество промежуточных моноцитов увеличивается еще больше. Наблюдение, что АТФ увеличивает количество и активацию неклассических моноцитов только у беременных крыс, предполагает, что эта подгруппа специфически изменяется во время беременности и что они могут играть роль в патофизиологии преэклампсии. Проникает ли эта конкретная подгруппа в мезометриальный треугольник, то есть в плацентарное ложе при здоровой беременности, еще предстоит установить.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: BNM FS PdV MGvP HvG WWB MMF.Проведены эксперименты: БНМ ФС ТБ ПАК БГ АБ TYW. Проанализированы данные: БНМ ФС ММФ. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: TB MMF WWB. Написал статью: БНМ ФС ММФ.

Ссылки

1. 1.
   Муньос-Суано А., Гамильтон А.Б., Бец А.Г. (2011) Приют Джимме: иммунная система во время беременности. Immunol Rev 241 (1): 20–38.
2. 2.
   Veenstra van Nieuwenhoven AL, Heineman MJ, Faas MM (2003) Иммунология успешной беременности. Обновление Hum Reprod 9 (4): 347–357.
3. 3.
   Veenstra van Nieuwenhoven AL, Bouman A, Moes H, Heineman MJ, de Leij LF и др. (2002) Производство цитокинов в естественных клетках-киллерах и лимфоцитах у беременных женщин по сравнению с женщинами в фолликулярной фазе яичникового цикла. Fertil Steril 77 (5): 1032–1037.
4. 4.
   Минагава М., Нарита Дж., Тада Т., Маруяма С., Симидзу Т. и др. (1999) Механизмы, лежащие в основе иммунологических состояний во время беременности: возможная ассоциация симпатической нервной системы.Клеточный иммунол 196 (1): 1–13.
5. 5.
   Kuhnert M, Strohmeier R, Stegmuller M, Halberstadt E (1998) Изменения в субпопуляциях лимфоцитов во время нормальной беременности. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 76 (2): 147–151.
6. 6.
   Siegel I, Gleicher N (1981) Изменения периферических лейкоцитов в ранних родах. Диагностический акушерский гинекол 3 (2): 123–126.
7. 7.
   Луппи П., Халущак С., Беттерс Д., Ричард К.А., Трукко М. и др. (2002) Моноциты постепенно активируются в кровообращении беременных женщин.J Leukoc Biol 72 (5): 874–884.
8. 8.
   Sacks G, Sargent I, Redman C (1999) Врожденный взгляд на беременность человека. Immunol Today 20 (3): 114–118.
9. 9.
   Sacks GP, Studena K, Sargent K, Redman CW (1998) Нормальная беременность и преэклампсия вызывают воспалительные изменения в лейкоцитах периферической крови, аналогичные таковым при сепсисе. Am J Obstet Gynecol 179 (1): 80–86.
10. 10.
    Smarason AK, Gunnarsson A, Alfredsson JH, Valdimarsson H (1986) Моноцитоз и моноцитарная инфильтрация децидуальной оболочки на ранних сроках беременности.J Clin Lab Immunol 21 (1): 1–5.
11. 11.
    Shibuya T, Izuchi K, Kuroiwa A, Okabe N, Shirakawa K (1987) Исследование неспецифического иммунитета у беременных женщин: Повышенная хемилюминесцентная реакция фагоцитов периферической крови. Am J Reprod Immunol Microbiol 15 (1): 19–23.
12. 12.
    Циглер-Хайтброк Л., Анкута П., Кроу С., Далод М., Грау В. и др. (2010) Номенклатура моноцитов и дендритных клеток в крови. Кровь 116 (16): e74–80.
13. 13.
    Wong KL, Yeap WH, Tai JJ, Ong SM, Dang TM и др.(2012) Три подгруппы человеческих моноцитов: последствия для здоровья и болезней. Immunol Res.
14. 14.
    Гордон С., Тейлор П. Р. (2005) Гетерогенность моноцитов и макрофагов. Nat Rev Immunol 5 (12): 953–964.
15. 15.
    Анкута П., Лю К.Ю., Мисра В., Ваклече В.С., Госселин А. и др. (2009) Транскрипционное профилирование выявляет взаимосвязь развития и различные биологические функции субпопуляций моноцитов CD16 + и CD16-. BMC Genomics 10: 403.
16. 16.
    Циммерманн Х.В., Зайдлер С., Наттерманн Дж., Гасслер Н., Хеллербранд С. и др.(2010) Функциональный вклад повышенных циркулирующих и печеночных неклассических моноцитов CD14CD16 в воспаление и фиброз печени человека. PLoS One 5 (6): e11049.
17. 17.
    Fingerle G, Pforte A, Passlick B, Blumenstein M, Strobel M и др. (1993) Новая субпопуляция моноцитов крови CD14 + / CD16 + расширяется у пациентов с сепсисом. Кровь 82 (10): 3170–3176.
18. 18.
    Ахуджа В., Миллер С.Е., Хауэлл Д.Н. (1995) Идентификация двух субпопуляций моноцитов крысы, экспрессирующих разные молекулярные формы и количества CD43.Клеточный иммунол 163 (1): 59–69.
19. 19.
    Redman CW, Sargent IL (2005) Последние достижения в понимании преэклампсии. Science 308 (5728): 1592–1594.
20. 20.
    Redman CW, Sargent IL (2010) Иммунология преэклампсии. Am J Reprod Immunol 63 (6): 534–543.
21. 21.
    Faas MM, Schuiling GA, Linton EA, Sargent IL, Redman CW (2000) Активация периферических лейкоцитов при беременности крыс и экспериментальной преэклампсии. Am J Obstet Gynecol 182 (2): 351–357.
22. 22.
    Faas MM, Broekema M, Moes H, van der Schaaf G, Heineman MJ, et al. (2004) Изменение функции моноцитов при экспериментальной преэклампсии у крыс. Am J Obstet Gynecol 191 (4): 1192–1198.
23. 23.
    Faas MM, Donker RB, van Pampus MG, Huls AM, Salomons J, et al. (2008) Плазма беременных и женщин с преэклампсией активирует моноциты in vitro. Am J Obstet Gynecol 199 (1): 84.e1–84.e8.
24. 24.
    Фаас М.М., ван Пампус М.Г., Аннинга З.А., Саломонс Дж., Вестра И.М. и др.(2010) Плазма женщин с преэклампсией активирует эндотелиальные клетки посредством активации моноцитов in vitro. J Reprod Immunol 87 (1-2): 28-38.
25. 25.
    Peracoli MT, Bannwart CF, Cristofalo R, Medeiros Borges VT, Araujo Costa RA и др. (2011) Повышенное производство активных форм кислорода и альфа-фактора некроза опухоли моноцитами связано с повышенным уровнем мочевой кислоты у женщин с преэклампсией. Am J Reprod Immunol.
26. 26.
    van Nieuwenhoven AL, Moes H, Heineman MJ, Santema J, Faas MM (2008) Производство цитокинов моноцитами, NK-клетками и лимфоцитами отличается у пациентов с преэклампсией по сравнению с нормальными беременными женщинами.Гипертоническая беременность 27 (3): 207–224.
27. 27.
    Auffray C, Fogg D, Garfa M, Elain G, Join-Lambert O и др. (2007) Мониторинг кровеносных сосудов и тканей популяцией моноцитов с патрулирующим поведением. Наука 317 (5838): 666–670.
28. 28.
    Баккер В.В., Донкер Р.Б., Тиммер А., ван Пампус М.Г., ван Сон В.Дж. и др. (2007) Активность плазменного гемопексина при беременности и преэклампсии. Гипертоническая беременность 26 (2): 227–239.
29. 29.
    Faas MM, van der Schaaf G, Borghuis T., Jongman RM, van Pampus MG, et al.(2010) Внеклеточный АТФ вызывает альбуминурию у беременных крыс. Трансплантат Nephrol Dial 25 (8): 2468–2478.
30. 30.
    Энгерт С., Ригер Л., Капп М., Беккер Дж. К., Дитл Дж. И др. (2007) Профилирование хемокинов, цитокинов и факторов роста в децидуальной оболочке ранней беременности человека с помощью набора белков. Am J Reprod Immunol 58 (2): 129–137.
31. 31.
    Gustafsson C, Mjosberg J, Matussek A, Geffers R, Matthiesen L, et al. (2008) Профили экспрессии генов децидуальных макрофагов человека: доказательства иммуносупрессивного фенотипа.PLoS One 3 (4): e2078.
32. 32.
    Каммерер У., Эггерт А.О., Капп М., Маклеллан А.Д., Гейтенбек ТБ и др. (2003) Уникальное появление пролиферирующих антигенпрезентирующих клеток, экспрессирующих DC-SIGN (CD209), в децидуальной оболочке на ранних сроках беременности человека. Am J Pathol 162 (3): 887–896.
33. 33.
    Lessin DL, Hunt JS, King CR, Wood GW (1988) Экспрессия антигена клетками вблизи границы раздела матери и плода. Am J Reprod Immunol Microbiol 16 (1): 1–7.
34. 34.
    Свенссон Дж., Дженмальм М.К., Матуссек А., Гефферс Р., Берг Дж. И др.(2011) Макрофаги на границе раздела плод-мать экспрессируют маркеры альтернативной активации и индуцируются M-CSF и IL-10. J Immunol 187 (7): 3671–3682.
35. 35.
    Smith SD, Dunk CE, Aplin JD, Harris LK, Jones RL (2009) Доказательства участия иммунных клеток в ремоделировании децидуальной спиральной артериолы на ранних сроках беременности человека. Am J Pathol 174 (5): 1959–1971.
36. 36.
    Houser BL, Tilburgs T, Hill J, Nicotra ML, Strominger JL (2011) Две уникальные популяции децидуальных макрофагов человека.J Immunol 186 (4): 2633–2642.
37. 37.
    Браун М.А., Линдхеймер М.Д., де Свиет М., Ван Аше А., Маутен Дж. М.. (2001) Классификация и диагностика гипертонических расстройств во время беременности: Заявление международного сообщества по изучению гипертонии у беременных (ISSHP). Гипертоническая беременность 20 (1): IX – XIV.
38. 38.
    Faas MM, Bakker WW, Valkhof N, Schuiling GA (1999) Влияние эстрадиола и прогестерона на вызванную низкими дозами эндотоксин-индуцированную гломерулярную воспалительную реакцию самок крыс.Am J Reprod Immunol 41 (3): 224–231.
39. 39.
    Junger WG (2011) Регуляция иммунных клеток с помощью аутокринной пуринергической передачи сигналов. Nat Rev Immunol 11 (3): 201–212.
40. 40.
    Scriba A, Schneider M, Grau V, van der Meide PH, Steiniger B (1997) Моноциты крысы активируют NKR-P1A и подавляют CD4 и CD43 во время активации in vivo: субпопуляции моноцитов у нормальных крыс и крыс, получавших IFN-гамма . J Leukoc Biol 62 (6): 741–752.
41. 41.
    Buhrer C, Graulich J, Stibenz D, Dudenhausen JW, Obladen M (1994) L-селектин подавляется в гранулоцитах и ​​моноцитах пуповинной крови новорожденных с острой бактериальной инфекцией.Pediatr Res. 36 (6): 799–804.
42. 42.
    Кернер Т., Алерс О., Шпильманн С., Кех Д., Бюрер С. и др. (1999) L-селектин у пациентов с травмами: маркер органной дисфункции и исхода? Eur J Clin Invest 29 (12): 1077–1086.
43. 43.
    Steiniger B, Stehling O, Scriba A, Grau V (2001) Моноциты у крысы: фенотип и функция во время острого отторжения аллотрансплантата. Immunol Rev 184: 38–44.
44. 44.
    Предупреждение JC, McCracken SA, Morris JM (2011) Уравновешивающее действие: механизмы, с помощью которых плод избегает отторжения материнской иммунной системой.Репродукция 141 (6): 715–724.
45. 45.
    Sargent IL, Borzychowski AM, Redman CW (2007) Иммунорегуляция при нормальной беременности и преэклампсии: обзор. Reprod Biomed Online 14 Спецификация № 1: 111–117.
46. 46.
    Rossol M, Kraus S, Pierer M, Baerwald C, Wagner U. (2011) Подмножество моноцитов CD14 (ярких) CD16 + увеличивается при ревматоидном артрите и способствует расширению Th27. Rheum артрита.
47. 47.
    Ривье А., Пене Дж., Рабесандратана Х., Чанез П., Буске Дж. И др.(1995) Моноциты крови нелеченных астматиков проявляют некоторые черты тканевых макрофагов. Clin Exp Immunol 100 (2): 314–318.
48. 48.
    Poehlmann H, Schefold JC, Zuckermann-Becker H, Volk HD, Meisel C (2009) Изменения фенотипа и нарушение функции подмножеств дендритных клеток у пациентов с сепсисом: проспективный наблюдательный анализ. Crit Care 13 (4): R119.
49. 49.
    Ziegler-Heitbrock L (2007) Моноциты крови CD14 + CD16 +: их роль в инфекции и воспалении.J Leukoc Biol 81 (3): 584–592.
50. 50.
    Moniuszko M, Bodzenta-Lukaszyk A, Kowal K, Lenczewska D, Dabrowska M (2009) Повышенная частота CD14 ++ CD16 +, но не CD14 + CD16 +, моноцитов периферической крови у пациентов с тяжелой астмой. Clin Immunol 130 (3): 338–346.
51. 51.
    Завада А.М., Рогачев К.С., Роттер Б., Винтер П., Марелл Р.Р. и др. (2011) Доказательства SuperSAGE для моноцитов CD14 ++ CD16 + как третьей подгруппы моноцитов. Кровь.
52. 52.
    Skrzeczynska-Moncznik J, Bzowska M, Loseke S, Grage-Griebenow E, Zembala M, et al.(2008) Моноциты CD14high CD16 + периферической крови являются основными продуцентами IL-10. Scand J Immunol 67 (2): 152–159.
53. 53.
    Frankenberger M, Sternsdorf T, Pechumer H, Pforte A, Ziegler-Heitbrock HW (1996) Дифференциальная экспрессия цитокинов в субпопуляциях моноцитов крови человека: анализ полимеразной цепной реакции. Кровь 87 (1): 373–377.
54. 54.
    Belge KU, Dayyani F, Horelt A, Siedlar M, Frankenberger M и др. (2002) Провоспалительные моноциты CD14 + CD16 + DR ++ являются основным источником TNF.J Immunol 168 (7): 3536–3542.
55. 55.
    Анкута П., Рао Р., Моисей А., Мехле А., Шоу С.К. и др. (2003) Фракталкин предпочтительно опосредует задержку и миграцию моноцитов CD16 +. J Exp Med 197 (12): 1701–1707.
56. 56.
    Рогачев К.С., Зайлер С., Завада А.М., Райхарт Б., Герат Э и др. (2011) CD14 ++ CD16 + моноциты и сердечно-сосудистые исходы у пациентов с хроническим заболеванием почек. Eur Heart J 32 (1): 84–92.
57. 57.
    Faas MM, Schuiling GA, Baller JF, Bakker WW (1995) Воспаление клубочков у беременных крыс после инфузии низких доз эндотоксина.иммуногистологическое исследование экспериментальной преэклампсии. Am J Pathol 147 (5): 1510–1518.
58. 58.
    Prins JR, Faas MM, Melgert BN, Huitema S, Timmer A и др. (2012) Измененная экспрессия иммуноассоциированных генов в децидуальной оболочке человека в первом триместре беременностей, позже осложненных гипертонией или задержкой роста плода. Плацента 33 (5): 453–455.
59. 59.
    Сандеркоттер С., Николич Т., Диллон М.Дж., Ван Ройен Н., Стеллинг М. и др. (2004) Субпопуляции моноцитов крови мышей различаются по стадии созревания и воспалительной реакции.J Immunol 172 (7): 4410–4417.
60. 60.
    Гейссманн Ф., Манц М.Г., Юнг С., Сивеке М.Х., Мерад М. и др. (2010) Развитие моноцитов, макрофагов и дендритных клеток. Наука 327 (5966): 656–661.
61. 61.
    Килан Дж. А., Митчелл, доктор медицины (2007) Плацентарные цитокины и преэклампсия. Front Biosci 12: 2706–2727.
62. 62.
    ван дер Пост Дж. А., Лок Калифорния, Бур К., Стурк А., Сарджент И. Л. и др. (2011) Функции микрочастиц при преэклампсии. Semin Thromb Hemost 37 (2): 146–152.
63. 63.
    Germain SJ, Sacks GP, Sooranna SR, Sargent IL, Redman CW (2007) Системное воспалительное праймирование при нормальной беременности и преэклампсии: роль циркулирующих микрочастиц синцитиотрофобласта. J Immunol 178 (9): 5949–5956.
64. 64.
    Мессерли М., Мэй К., Ханссон С.Р., Шнайдер Х., Хольцгрев В. и др. (2010) Взаимодействие плода и матери при беременности: микрочастицы плаценты активируют моноциты периферической крови. Плацента 31 (2): 106–112.
65. 65.
    Сауткомб Дж., Таннетта Д., Редман С., Сарджент I (2011) Иммуномодулирующая роль микровезикул синцитиотрофобластов.PLoS One 6 (5): e20245.
66. 66.
    Пассаквал Г., Вамадеван П., Перейра Л., Хамид С., Корригалл В. и др. (2011) Взаимодействие моноцитов и тромбоцитов вызывает провоспалительный фенотип в циркулирующих моноцитах. PLoS One 6 (10): e25595.
67. 67.
    Сибай Б., Деккер Г., Купферминц М. (2005) Преэклампсия. Ланцет 365 (9461): 785–799.

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Роль системы моноцитов – макрофагов в нормальной беременности и преэклампсии

2.1. Система моноцитов – макрофагов: происхождение и происхождение клеток.

Макрофаги играют ключевую роль в поддержании гомеостаза тканей, регуляции воспалительных процессов и восстановлении тканей. Согласно современным представлениям, тканевые макрофаги в онтогенезе млекопитающих развиваются из трех источников, которые соответствуют трем поколениям гемопоэтических клеток-предшественников [4,5]. Первое поколение гемопоэтических клеток специфицируется в стенке желточного мешка. Важно отметить, что эти кроветворные клетки имеют другое происхождение, чем клетки-предшественники, развивающиеся из кроветворных островков в эндотелии капилляров желточного мешка [5].Предполагается, что микроглиальные клетки центральной нервной системы произошли от этих самых первых гемопоэтических предшественников [6]. Жизненный цикл макрофага обычно включает миграционную стадию, представленную моноцитами, циркулирующими в крови; эта стадия отсутствует в развитии микроглии. Предшественники микроглии мигрируют непосредственно в центральную нервную систему и созревают внутри [6]. Второе поколение, эритромиелоидные клетки-предшественники, формируется из гематогенного эндотелия капилляров желточного мешка.Эти клетки впоследствии колонизируют печень эмбриона. По профилю молекулярных маркеров макрофаги, происходящие от этих предшественников, очень похожи на макрофаги, полученные от предшественников первого поколения; однако их созревание включает стадию моноцитов [5,6]. Третье поколение гематопоэтических предшественников развивается из гематогенного эндотелия зоны аорта-гонад-мезонефрос; впоследствии эти клетки мигрируют в печень и красный костный мозг. Макрофаги этого поколения колонизируют почти все органы эмбриона, кроме центральной нервной системы [5].Таким образом, популяции макрофагов большинства органов в пренатальном периоде состоят из гемопоэтических клеток, происходящих от второго и третьего поколений. В большинстве из них постепенно снижается доля макрофагов, происходящих от эритромиелоидных клеток-предшественников желточного мешка, и соответственно увеличивается доля макрофагов, происходящих от кроветворных клеток третьего поколения [4,5]. Однако есть три исключения. Первая из них — это центральная нервная система (которая, по-видимому, недоступна для моноцитов и макрофагов, за исключением макрофагов первого поколения).Два других — это печень и эпидермис, где обычно обнаруживаются только макрофаги, происходящие от второго поколения гемопоэтических клеток, называемые клетками Купфера и клетками Лангерганса соответственно [5]. Со временем макрофаги эмбрионального происхождения (потомки второго поколения гемопоэтических предшественников) полностью исчезают из соединительных тканей дермы кожи и слизистых оболочек кишечника, замещаясь макрофагами костномозгового происхождения [4,5,7]. Причины такого особого распределения макрофагов в организме млекопитающего неизвестны.Макрофаги второго и третьего поколения в своем развитии проходят стадию моноцитов. В постнатальном периоде на основе CD14 (липополисахаридный корецептор (LPS) и паттернов экспрессии CD16 (рецептор Fc-FcγRIII) различают три субпопуляции моноцитов крови: классические (CD14 ++, около 90%), неклассические (CD16 ++, около 10%). %), а также небольшую промежуточную популяцию моноцитов, экспрессирующих высокие уровни CD14 и CD16 [8]. Эти субпопуляции обладают разными свойствами. Моноциты CD14 ++ считаются зрелыми; они проявляют выраженную фагоцитарную активность и способны продуцировать активные формы кислорода и цитокины посредством активации. сигнального пути TLR [9].Клетки CD16 ++ не продуцируют активные формы кислорода, но лучше продуцируют провоспалительные цитокины. Клетки CD16 ++ представляют собой патрулирующие моноциты, которые постоянно оценивают состояние эндотелия и инфильтрата тканей в нормальных условиях и во время воспалительных процессов [8,9]. Роль промежуточной популяции моноцитов плохо изучена, но, учитывая высокий уровень экспрессии MHC-II, они, вероятно, участвуют в презентации антигена и активации Т-лимфоцитов [10].Данные по онтогенезу макрофагов млекопитающих получены в основном на различных линиях лабораторных мышей. Работ по изучению развития популяций макрофагов у человека немногочисленны. Есть основания полагать, что программа развития тканевых макрофагов у человека в целом согласуется с таковой у мышей [11,12]. Макрофаги представляют собой гетерогенную популяцию клеток не только с точки зрения источника их развития, но и по своим функциональным характеристикам. .Макрофаги способны к быстрой адаптации, изменяя свой фенотип и функции под влиянием различных сигнальных молекул. Активация макрофагов in situ может быть направлена ​​либо на провоспалительные M1, либо на противовоспалительные поляризованные макрофаги M2, которые различаются не только экспрессией специфических маркеров, но и их ролью в иммунном ответе [13]. Локальный сдвиг баланса M1 / ​​M2 в сторону M2 в зоне повреждения значительно улучшает динамику и эффективность репаративных процессов; это было убедительно продемонстрировано для кожных ран [14], повреждений спинного мозга [15], инфаркта миокарда и кардиомиопатии [16] среди других моделей.Макрофаги можно поляризовать с помощью специфических индукторов (то, что часто называют прямой поляризацией) или с помощью косвенного метода: блокировать нежелательный фенотип и получить обратный, желаемый фенотип. При этом часть макрофагов может оставаться в неактивированном состоянии [17]. Таким образом, фенотип M2 in vivo может быть достигнут путем блокирования передачи сигналов IL-6 [15] или путем добавления IL-4 [18] и IL-10, которые индуцируют поляризацию М2а и M2c соответственно [13]. Однако часто подчеркивается, что фенотипы активированных макрофагов следует рассматривать как континуум, причем M1 и M2 являются его экстремальными вариантами [19].Общими маркерами макрофагов M1 являются CD80 / 86, CD11c и iNOS, тогда как фенотип M2 обычно характеризуется экспрессией CD163, CD206 и аргиназы 1 (Arg1) [20,21]. В то же время CD68- и CD14-специфическое окрашивание является обычным подходом для идентификации общей популяции макрофагов в ткани, а количество положительных клеток часто служит значением нормализации для количества клеток M1 и M2.

2.2. Роль моноцитов при беременности

Во время нормальной беременности наблюдается увеличение количества моноцитов в крови и их активация.Эти события сопровождаются изменением соотношения субпопуляций моноцитов крови: увеличением количества промежуточных моноцитов с высоким уровнем CD14 и CD16 и уменьшением количества классической популяции моноцитов (CD14 ++) [22]. Другое исследование выявило увеличение количества классических моноцитов и уменьшение количества неклассических моноцитов [23]. Высокая гетерогенность популяций моноцитов хорошо известна; однако большинство исследований проводилось на моноцитах CD14 ++.Наблюдается повышение уровня маркеров моноцитов CD11b, CD14 и CD64 в крови беременных женщин наряду с высоким уровнем продукции свободных радикалов кислорода и снижением фагоцитарной активности [24]. Данные о продукции цитокинов нестимулированными моноцитами противоречивы, что может отражать влияние методов, используемых для выделения моноцитов. Однако стимуляция ЛПС способствует снижению продукции цитокинов в крови беременных женщин по сравнению с небеременными [25,26]. Другой недостаток исследований моноцитов при беременности связан со сроком гестации: большинство исследований проводилось на моноцитах крови, собранных в третьем триместре беременности, соответствующие данные для других сроков в значительной степени отсутствуют [25,26] .Точные механизмы активации моноцитов во время беременности неизвестны. Предполагается, что ведущую роль в этом процессе играет плацента. Моноциты, циркулирующие с кровью через плацентарные лакуны, вступают в контакт с синцитиотрофобластом, который может активировать их в направлении провоспалительного фенотипа [27,28]. Помимо прямых контактов, моноциты могут активироваться косвенно цитокинами [29,30], микровезикулами и экзосомами, высвобождаемыми из синцитиотрофобластов в материнскую кровь [31,32,33,34], и гормонами беременности, например.г., эстрогены. Ряд исследований показывает, что эстрогены оказывают противовоспалительное действие на моноциты [35,36,37,38]. Эстрогены подавляют экспрессию хемокиновых рецепторов CCR2 и CXCR3 и подавляют способность к миграции моноцитов, вызываемую стимуляцией MIP-1α и MCP-1 / JE [35,36,39]. Эстрогены также подавляют продукцию IL-1 моноцитами, стимулированными LPS [40]. В крови высокие уровни 17-эстрадиола связаны с увеличением количества моноцитов, экспрессирующих маркеры макрофагов M2 [41].Считается, что противовоспалительное действие эстрогенов на моноциты опосредуется специфическим сплайсинговым вариантом рецептора ERα36 [42]. In vitro эстрогены вызывают апоптоз моноцитов за счет увеличения экспрессии FasL [43]. До сих пор нет данных о возможном влиянии преэкламптической гипоэстрогенемии на количество и популяционную структуру моноцитов. Однако было установлено, что пониженные концентрации 17-эстрадиола способствуют экспрессии CD16 и повышают продукцию провоспалительных цитокинов TNFalpha (фактор некроза опухоли), IL-1 и IL-6 [37].

2.3. Роль макрофагов в женской репродуктивной системе до и во время беременности

Макрофаги обнаружены во всех органах женской репродуктивной системы, их популяции представлены как макрофагами, происходящими из моноцитов, так и резидентными макрофагами, которые колонизируют органы в пренатальном периоде [44 ]. Макрофаги неравномерно распределены в эндометрии; их количество и плотность варьируются в зависимости от стадии менструального цикла. Внутри эндометрия различают несколько популяций макрофагов.Один из них расположен ближе к просвету матки и, как предполагается, участвует в процессах десквамации и регенерации; другая популяция встречается в основном вокруг маточных желез [45]. Во время пролиферативной фазы макрофаги эндометрия экспрессируют поверхностные белки (белок рецептора трансферрина 1 (TFRC), CD69 и молекулу внутриклеточной адгезии 1), факторы ремоделирования матрикса, цитокины и факторы роста, которые подготавливают эндометрий к возможной имплантации или индукции десквамации [45] .Во время пролиферативной фазы макрофаги располагаются в строме поверхностного слоя эндометрия, окружают просветы маточных желез и проникают в них. Во время секреторной фазы количество макрофагов в эндометрии резко увеличивается [46]. Показано, что количество макрофагов CD14 + увеличивается примерно на 45% [47]. Во время пролиферативной фазы и в начале секреторной фазы количество макрофагов увеличивается из-за пролиферации резидентных макрофагов; в конце секреторной фазы наблюдается миграция моноцитов-макрофагов в эндометрий.Предполагается, что во время десквамации макрофаги эндометрия частично мигрируют из эндометрия в лимфатические узлы или погибают в результате апоптоза [48]. В случае оплодотворения инвазия трофобластов происходит в месте плацентации, что сопровождается накоплением макрофагов в децидуальной оболочке, эндометрии, измененном беременностью. Основными функциями децидуальных макрофагов являются секреция цитокинов и факторов роста для успешной плацентации, обеспечение иммунной толерантности полуаллогенного плода и защита плода от инфекций.Децидуальные макрофаги в основном происходят из моноцитов, циркулирующих в крови. Макрофаги, находящиеся в плаценте, составляют не менее 20–30% от общего количества макрофагов в организме; они играют ключевую роль в установлении иммунологических аспектов взаимодействия матери и плода [49,50]. Ремоделирование спиральных артерий в материнской матке также поддерживается локальными децидуальными макрофагами. Участие макрофагов в ремоделировании спиральных артерий определяется тем фактом, что макрофаги секретируют многие факторы, универсально участвующие в ангиогенезе и ремоделировании тканей [51,52].Ангиогенные факторы, секретируемые децидуальными макрофагами, включают ангиогенин, фактор роста кератиноцитов, фактор роста фибробластов B, фактор роста эндотелия сосудов А и ангиопоэтины 1 и 2. Факторы ремоделирования, синтезируемые децидуальными макрофагами, включают матриксные металлопротеиназы 1, 2, 7, 9 и 10 [ 52,53]. В то же время высокая фагоцитарная активность децидуальных макрофагов необходима для поглощения мертвых клеток, подвергающихся апоптозу во время ремоделирования спиральных артерий и децидуальной мембраны.Было показано, что своевременное удаление апоптотических клеток предотвращает риск активации эндотелия и чрезмерного привлечения моноцитов [54]. Модуляция иммунных реакций происходит в плаценте на протяжении всей беременности, причем макрофаги играют центральную роль в этом процессе [55]. Плацентация в первом и втором триместрах беременности характеризуется провоспалительной средой (благоприятной для поляризации M1), что обеспечивает правильное восстановление эпителия матки и защиту от инфекций.Второй и третий триместры — это периоды быстрого роста плода на поздних стадиях его развития, и преобладающим иммунологическим профилем является противовоспалительный (в пользу альтернативной поляризации M2). Аналогичный иммунологический сдвиг наблюдается для других типов иммунных клеток, включая Т-хелперные 2-клетки (Th3) и подмножество супрессорных CD4 + Т-клеток (регуляторные Т-клетки, Treg). Клетки Th3 и Treg отвечают за поддержание периферической иммунной толерантности во время беременности [56]. Успешное течение беременности сопровождается активацией противовоспалительного Th3 и снижением соотношения цитокинов Th2 / Th3 [57,58,59].Treg-клетки играют основную роль в защите от распознавания полуаллогенного плода иммунной системой материнского организма. Отклонения в количестве Treg-клеток связаны с различными осложнениями беременности [60]. Во время родов иммунный профиль возвращается к провоспалительному состоянию, которое необходимо для сокращения матки и движения плода [61]. Вышеупомянутая поляризационная лабильность макрофагов опосредована способностью реагировать на изменение уровней эстрогена и связанных с эстрогенами. факторы.Он обеспечивает участие макрофагов в поддержании гомеостаза женской репродуктивной системы во время яично-маточного цикла и беременности. Группа эстрогенов включает несколько гормонов: эстрадиол, эстриол и эстрон [62,63]. Постепенное повышение уровня эстрогена в крови во время здоровой беременности в основном определяется увеличением концентрации эстрадиола [62]. В начале беременности эстрогены синтезируются желтым телом. Примерно с 9-й недели беременности плацента становится основным источником эстрадиола; он продуцируется преимущественно синцитиотрофобластом [63] и в гораздо меньшей степени клетками Хофбауэра [64,65].Синтез эстрогена в плаценте зависит от надпочечников матери и плода, поскольку в самой плаценте отсутствуют некоторые ключевые ферменты стероидогенеза [62]. Эстрогены действуют на клетки через два внутриклеточных рецептора эстрогена ESR1 (ERα) и ESR2 (ERβ), а также через рецептор 1 эстрогена, связанный с G-белком (GPER1). В плацентарных макрофагах человека экспрессия Esr1 и Gper1 обнаруживается, но ESR2 и рецептор прогестерона отсутствуют [66]. Хотя рецепторы эстрогена были обнаружены в макрофагах, считается, что эстрогены не вызывают прямого хемотаксиса макрофагов в эндометрий.Скорее, эстроген стимулирует другие клетки (в основном фибробласты) производить цитокины, привлекающие макрофаги [44]. Однако эстрогены оказывают множественное воздействие на макрофаги. Предполагается, что эстрадиол может стимулировать пролиферацию макрофагов напрямую или через другие клетки, продуцирующие митогены (EGF и IGF-1) [44]. Даже в отсутствие медиаторов воспаления эстрогены вызывают экспрессию генов раннего и позднего ответа в макрофагах. При воспалении эстрогены способствуют поляризации макрофагов до фенотипа M2 и стимулируют синтез молекул, участвующих в ремоделировании внеклеточного матрикса (протеаз и их ингибиторов) [67].Эстрогены могут усиливать или подавлять фагоцитарную способность макрофагов в зависимости от преобладающих факторов активации. Макрофаги способны поглощать железо через рецептор трансферрина 1 (TFRC) и CD163; эстрогены усиливают абсорбцию ионов железа за счет активации TFRC, а также за счет подавления синтеза гепсидина в печени [44]. Некоторые авторы предполагают, что эстрогены играют ключевую роль в патогенезе ПЭ, поскольку они регулируют ангиогенез и вызывают расширение сосудов [44]. 62]. Очевидно снижение уровня эстрогена в крови у женщин с преэклампсией [68,69,70,71,72].При ПЭ уровень эстрадиола снижается в крови [69,71,73] и в плаценте [74]. Концентрации эстрона и эстриола в плазме при тяжелой ТЭЛА также снижаются, хотя в некоторых исследованиях такие изменения не были обнаружены [69,71]; есть также данные о снижении уровня эстриола в плаценте [70]. Андрогены — еще одна важная группа гормонов, уровень которых важен для нормального течения беременности. Предполагается, что они ответственны за ремоделирование шейки матки в срок через регуляцию организации фибрилл цервикального коллагена [75].Что касается ПЭ, было показано, что уровень тестостерона у женщин с ПЭ значительно повышен [76]. Однако он не дает ответа на вопрос, как он влияет на макрофаги плаценты. Рецепторы тестостерона были обнаружены на поверхности макрофагов, и было показано, что сигнальный каскад, запускаемый тестостероном, включает колебания цитозольного кальция [77,78]. В другой работе было показано, что андрогены вызывают поляризацию макрофагов легких в сторону фенотипа M2 [79].

Несмотря на большой объем данных по этой теме, трудно найти исследование, посвященное роли эстроген- и андроген-зависимой поляризации макрофагов при ПЭ.Эта область требует дальнейших исследований.

2.4. Моноциты при преэклампсии

При рассмотрении патогенеза ПЭ большое внимание уделяется окислительному стрессу и эндотелиальной дисфункции, происходящим в организме матери. Недостаточная плацентация вызывает аномально регулируемое кровяное давление в сердечно-сосудистой системе матери, за которым следует дефицит кровоснабжения и, как следствие, ишемия / реперфузия плаценты. Считается, что в этих условиях гипоксическая плацента синтезирует и секретирует повышенное количество вазоактивных веществ, способствующих высвобождению ряда сигнальных факторов, таких как остатки плаценты, экзосомы, микровезикулы, бесклеточные нуклеиновые кислоты и провоспалительные цитокины, в материнскую среду. кровоток.Наличие этих маркеров хорошо описано и высоко симптоматично [80,81,82]. Ситуация в конечном итоге приводит к выраженному воспалительному ответу, окислительному стрессу и усилению апоптоза плацентарных клеток [83]. Повышенные уровни провоспалительных цитокинов, продуцируемых различными типами клеток, приводят к резким изменениям структуры поверхностных молекул эндотелия и приводят к системной эндотелиальной дисфункции и последующей гипертензии [84,85,86]. Подробные обзоры относительно хрупкого иммунного баланса при нормальной беременности и при ПЭ доступны в научных базах данных [3,87].Воспаление — ярко выраженный признак ПЭ; в нем участвуют клетки как адаптивного, так и врожденного иммунитета. Поскольку моноциты циркулируют в крови всего несколько дней, их количество и состав отражают тяжесть клинического состояния пациента. Поскольку генерализованное воспаление является хорошо известным признаком ПЭ, следует ожидать изменений в количестве моноцитов и профиле субпопуляции. Действительно, Ван и его коллеги проанализировали истории болезни более трехсот пациентов с ПЭ и обнаружили, что в группе ПЭ абсолютное количество моноцитов и соотношение моноцитов и лимфоцитов были значительно выше по сравнению с контрольной группой (Таблица 1) [88].Как показал ROC-анализ, соотношение моноцитов и лимфоцитов имеет хорошую диагностическую точность, позволяющую отличить нормальное состояние от ПЭ. В работе Brien et al. Также было обнаружено, что увеличение количества моноцитов типично для ПЭ; авторы использовали маркер CD14 для идентификации моноцитов [89]. Характеристика субпопуляций моноцитов при ПЭ стала предметом интереса после 2010 г. [22,23]. Недавние исследования подтверждают предыдущие выводы о его актуальности. В недавней работе Alahakoon и его коллег авторы оценили количество классических, промежуточных и неклассических моноцитов в образцах крови пациентов с преэклампсией (с или без ограничения внутриутробного развития, IUGR) и неосложненных беременностей [92].Авторы наблюдали значительно более низкое содержание классических моноцитов для обеих групп PE (с или без IUGR), в то время как количество воспалительных моноцитов, которые сочетали промежуточные и неклассические подгруппы для этих групп, было значительно увеличено по сравнению с контролем. Аналогичные результаты были получены Jabalie et al. которые наблюдали снижение процента классических моноцитов параллельно с увеличением процента промежуточных и неклассических моноцитов в образцах крови женщин с преэклампсией с метаболическим синдромом или без него [90].Ма и его коллеги проанализировали цитокиновые профили сыворотки женщин с ПЭ, а также оценили процент моноцитов крови, положительных по маркерам макрофагов M1 и M2 [93]. Количество моноцитов CD14 + CD11c + CD163- (M1) в группе PE было значительно увеличено, что коррелировало с повышенным уровнем провоспалительных факторов (IL-1, IL-6 и MCP-1). Однако работ по маркерам макрофагов M1 и M2 в крови женщин с ПЭ немного, что указывает на необходимость дальнейших исследований в этой области.Несколько исследований, посвященных составу пуповинной крови при ПЭ, имеют очевидную научную новизну, поскольку участие плода редко рассматривается в контексте ПЭ. Интересно, что авторы приходят к тому же наблюдению: значительное сокращение классической субпопуляции моноцитов и значительное увеличение неклассической субпопуляции моноцитов наблюдалось для пуповинной крови в группе PE [91]. Обобщая эти данные, можно сделать общий вывод, что наблюдаемые связанные с ПЭ изменения в количестве и составе моноцитов крови в сторону преобладания неклассической подгруппы указывают на прогрессирование симптомов воспаления в организме матери.Обострение воспалительной реакции при ПЭ может быть вызвано внеклеточными агентами, которые появляются в крови, и цитокинами, активирующими моноциты [103]. Поскольку подсчет моноцитов включен в рутинные клинические анализы крови, и учитывая, что фенотипирование моноцитов с помощью проточной цитометрии является простой процедурой, можно ожидать появления тестов на основе моноцитов для прогнозирования ПЭ в качестве рутинной практики. Безусловно, потребуется проспективное исследование для оценки прогностической ценности показателей профиля моноцитов в крови беременной женщины, у которой будет ПЭ, и абсолютная стандартизация всех манипуляций.На сегодняшний день ни один из существующих тестов не дает достоверной оценки рисков ПЭ. В настоящее время достаточно изучены лишь некоторые маркеры, связанные с PE, такие как эндоглин, фактор роста плаценты (PlGF) и sFlt-1 (растворимая fms-подобная тирозинкиназа 1).

2,5. Макрофаги при преэклампсии

Увеличение количества неклассических моноцитов может влиять на состав тканевых макрофагов в эндометрии и быть причиной плохой плацентации при ПЭ [104]. Соответствующий баланс между провоспалительными и противовоспалительными макрофагами в плаценте необходим для здоровой беременности и ее оптимального исхода.Было высказано предположение, что переход к профилю M2, который обычно происходит во втором триместре, блокируется при ПЭ; точнее, его отменяют на ранних стадиях заболевания [105]. Как следствие, ответы M1 остаются не подавленными, а цитокины демонстрируют провоспалительный профиль с повышенными уровнями IFN-γ, TNFalpha, IL6 и пониженными уровнями IL-4 и IL-10 [105, 106].

Поведение резидентных плацентарных макрофагов при ПЭ пока не получило должного внимания исследователей.Возможно, это можно объяснить сложностью сбора биоматериала и длительной процедурой выделения и фенотипирования клеток из этого материала в отличие от легко получаемых образцов крови. Однако эта тема требует всестороннего изучения. В контексте любого осложнения беременности плацентарные макрофаги следует рассматривать как две популяции: клетки Хофбауэра фетальной плаценты и децидуальные макрофаги материнской плацентарной части.

Недавно опубликованные работы содержат несколько противоречивые численные оценки как для клеток Хофбауэра, так и для децидуальных макрофагов в преэкламптической плаценте.Янг и его коллеги наблюдали значительно меньшее количество CD14 + клеток Хофбауэра в PE-плаценте по сравнению со здоровым контролем, но не было обнаружено соответствующей значимой разницы в количестве CD68 + клеток [94]. Tang et al. наблюдали значительное снижение количества CD68 + клеток Хофбауэра в группе PE по сравнению с контрольной группой преждевременных родов того же возраста [95]. Напротив, Evsen с коллегами, напротив, наблюдали повышенное количество клеток Гофбауэра в группе с ПЭ, осложненной синдромом HELLP, по сравнению с контрольной группой; авторы также использовали CD68 в качестве маркера макрофагов [96].Саид и др. сообщают о двукратном увеличении количества клеток Хофбауэра в преэклампсической плаценте по сравнению с беременностью с нормальным давлением [98]. Что касается децидуальных макрофагов, их сравнительное количество в преэкламптической плаценте также является спорным вопросом. Schonkeren и его коллеги сообщили об увеличении количества CD14 + клеток в базальной децидуальной оболочке при преждевременной преэкламптической беременности по сравнению с контрольной недоношенной беременностью [50]. Милошевич-Стеванович и др. наблюдали более высокое количество децидуальных клеток CD68 + в ПЭ по сравнению со здоровыми контрольными плацентами [100].В одном исследовании значительное увеличение количества CD68 + клеток как в фетальной, так и в децидуальной частях плаценты наблюдалось в преэклампсической группе по сравнению с контрольной [97]. В то же время несколько исследовательских групп сообщают, что количество децидуальных макрофагов в PE-плаценте снижено [94,101,102]. Очевидные несоответствия между исследованиями могут быть объяснены использованием разных технических подходов (клеточные маркеры, антитела, протоколы обнаружения сигналов и т. Д.) И различием в формировании исследуемых групп.Проблема поляризации макрофагов в преэкламптической плаценте выглядит менее неоднозначной. Янг и его коллеги показали, что уровень CD163 + клеток Хофбауэра значительно снижается при ПЭ по сравнению со здоровой беременностью [94]. В работе Tang’s и его коллег они также наблюдали снижение количества клеток CD163 + по сравнению с недоношенными контрольными детьми [95]. Przybyl et al. сообщили о снижении количества CD74 + клеток в преэклампсической плаценте; согласно предложенной модели, это может привести к провоспалительной сигнатуре [99].Ma et al. наблюдали увеличение процента ко-меченых CD11b-iNOS клеток и сопутствующее снижение процента ко-меченных CD11b-Arg1 клеток в преэкламптических плацентах по сравнению с нормальными [93]; комбинации маркеров отражают фенотипы M1 и M2 соответственно. Отношение децидуальных клеток CD163 / CD14 также снижается в образцах плаценты, взятых у женщин с ПЭ [50]. Сдвиг баланса макрофагов M2 / M1 в сторону M1 объясняется высоким уровнем провоспалительных цитокинов и низким уровнем уровни противовоспалительных цитокинов в преэкламптической плаценте [107,108].Помимо измененной продукции цитокинов, в процессе поляризации существует также клеточная ось. Ряд исследований предполагает важную роль мезенхимальных стволовых клеток плаценты в поляризации макрофагов и их способность влиять на их активацию [109,110]. Ван и его коллеги раскрыли роль гиалуронана в поддержании нормальной беременности. Их результаты показывают, что высокие уровни гиалуронана вызывают поляризацию M2 и регулируют выработку цитокинов (например, IL-10) децидуальными макрофагами [111].Резюмирующая схема представлена ​​на рисунке 1. Несмотря на большой объем доступных данных, некоторые вопросы все еще остаются без ответа. Когда действительно проявляются наблюдаемые изменения поляризации макрофагов — на ранних сроках беременности или после проявления ПЭ? На каком сроке беременности они могут использоваться в качестве маркеров? Можно ли использовать макрофаги и моноциты в терапевтических целях?

2.6. Возможные терапевтические подходы

Перепрограммирование макрофагов кажется привлекательной терапевтической стратегией.В настоящее время в клинической практике используется ряд одобренных FDA подходов, включающих клеточную и генную терапию [112]. Макрофаги, полученные из моноцитов, можно активировать по-разному, варьируя комбинации внешних раздражителей. Перепрограммирование макрофагов ex vivo традиционно направлено на поляризацию их в сторону противовоспалительного фенотипа, чтобы заставить поляризованные макрофаги M2 противостоять воспалению в организме матери. Идея репрограммирования аутологичных макрофагов ex vivo разрабатывалась с 1980-х годов [113].К настоящему времени перепрограммированные макрофаги успешно используются в ряде терапевтических случаев, включая лечение рака, трансплантацию и стимуляцию регенерации [114,115,116]. Обычными подходами к поляризации макрофагов ex vivo являются стимуляция клеток коктейлями цитокинов, генетические манипуляции или использование специфических низкомолекулярных ингибиторов факторов транскрипции [117,118]. iPS-ML, макрофагоподобные миеломоноцитарные клетки, полученные из индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток, также поддаются поляризации ex vivo [119].Инъекция аутологичных M2-поляризованных макрофагов, полученных из моноцитов, в определенный срок беременности (или на этапе ее планирования с учетом рисков ПЭ) может стать новой стратегией лечения ПЭ. Такая терапия кажется многообещающей из-за сообщений об отсутствии побочных реакций и отдаленных побочных эффектов после трансплантации макрофагов при других заболеваниях [120,121]. Возможным побочным эффектом предлагаемой терапии может быть феномен переноса клеток матери и плода — способность клеток матери и плода проходить через плацентарный барьер [122].Присутствие эмбриональных клеток в материнском кровообращении известно как микрочимерия плода, в то время как присутствие материнских клеток в организме плода известно как материнский микрохимеризм. Действительно, в ряде работ было показано, что у плода с тяжелой врожденной диафрагмальной грыжей повышен уровень материнского микрохимеризма [122, 123]. Однако это не означает, что активированные аутомоноциты ex vivo обязательно проникнут через плаценту. Этот вопрос изучен недостаточно.

Иммунологическая адаптация к беременности у женщин с диабетом 1 типа

Повышенный провоспалительный ответ моноцитов и плазмацитоидных дендритных клеток на инфекцию вирусом гриппа А во время беременности | Журнал инфекционных болезней

Аннотация

Вызванные беременностью изменения иммунитета могут способствовать увеличению заболеваемости, связанной с инфекцией вируса гриппа А во время беременности.Мы охарактеризовали иммунный ответ моноцитов и плазматических дендритных клеток (пДК) на инфекцию вируса гриппа А у 21 беременной и 21 небеременной женщины. У беременных женщин моноциты и пДК демонстрируют усиленный провоспалительный иммунный ответ на 2 штамма вируса гриппа A по сравнению с небеременными женщинами, характеризующийся повышенной экспрессией главного комплекса гистосовместимости класса II (примерно в 2,0 раза), CD69 (примерно в 2,2 раза). , интерферон γ-индуцированный белок 10 (приблизительно 2.0-кратно) и воспалительный белок макрофагов 1β (примерно в 1,5 раза). Этот усиленный врожденный воспалительный ответ во время беременности может способствовать воспалению легких после инфицирования вирусом гриппа А.

Беременные женщины, инфицированные вирусом гриппа A, имеют значительно более высокие показатели заболеваемости и смертности, чем инфицированные вирусом гриппа A небеременные женщины [1]. Повышенная заболеваемость и смертность особенно заметны во время пандемий, но они также возникают при ежегодном сезонном гриппе [2].Степень, в которой изменения в иммунной системе во время беременности способствуют увеличению заболеваемости и смертности, остается неясной.

Некоторые аспекты иммунитета подавляются во время беременности, чтобы обеспечить материнскую толерантность к антигенам плода. Например, естественные киллеры (NK) и Т-клетки беременных женщин имели дефицит интерферона γ (IFN-γ) и продукции макрофагального воспалительного белка 1β (MIP-1β) после стимуляции цитокинами [3]. Однако NK- и Т-клетки беременных женщин демонстрируют усиленные ответы IFN-γ и MIP-1β на вирус гриппа A по сравнению с ответами небеременных женщин [4].Эти противоречивые результаты предполагают, что клеточные иммунные ответы подавляются не всегда, а зависят либо от условий стимуляции (цитокин против вируса гриппа A), либо от контекста стимуляции. Например, в первом исследовании NK- и T-клетки были выделены перед стимуляцией, тогда как во втором NK- и T-клетки стимулировались в контексте инфекции мононуклеарных клеток цельной периферической крови (PBMC), обеспечивая межклеточную коммуникацию. .

Моноциты и плазмацитоидные дендритные клетки (pDC) продуцируют цитокины и хемокины для активации и рекрутирования NK- и T-клеток и играют ключевую роль в уничтожении вируса гриппа A [5, 6].Инфекция вируса гриппа увеличивает экспрессию моноцитов и pDC маркеров активации, таких как CD69 и HLA-DR, главного комплекса гистосовместимости, молекулы класса II, способствуя активации CD4 ⁺ Т-клеток [7]. Моноциты и pDC продуцируют провоспалительные цитокины, такие как интерферон α (IFN-α), и хемокины, такие как IFN-γ-индуцируемый белок 10 (IP-10) и MIP-1β. IP-10 и MIP-1β привлекают и активируют иммунные эффекторные клетки, такие как нейтрофилы, Т-клетки CD8 ⁺ и NK-клетки, способствуя очищению от вируса гриппа A [8, 9].В одном исследовании PBMC от беременных женщин продуцировали меньше IFN-α и IFN-λ, чем PBMC от небеременных женщин, в ответ на вирус гриппа A [10]. Таким образом, возможно, что различные ответы моноцитов и pDC на инфекцию вирусом гриппа A могут способствовать различиям в функции NK и T-клеток.

Здесь, в свете потенциального перекрестного взаимодействия между PBMC, мы оценили, влияет ли беременность на реакцию моноцитов и pDC на A / California / 7/2009 (ph2N1) и A / Victoria / 361/2011 (h4N2) вирус гриппа A в люди.Воспользовавшись возможностью профилировать несколько иммунных параметров в высоком измерении с помощью массовой цитометрии, мы оценили экспрессию маркеров активации и продукцию цитокинов и хемокинов моноцитами и pDC в когорте из 21 беременной и 21 небеременной женщины.

МЕТОДЫ

Участники и дизайн исследования

В период с октября 2013 г. по март 2014 г. была набрана 21 здоровая беременная женщина из акушерской клиники детской больницы Люсиль Паккард.Двадцать одна небеременная женщина была набрана в Стэнфордское отделение клинических и трансляционных исследований. Была собрана венозная кровь. Критерии участников перечислены на Рисунке 1 A . Это исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией и одобрено Наблюдательным советом Стэнфордского университета; Письменное информированное согласие было получено от всех участников.

Рисунок 1.

Моноциты и плазмацитоидные дендритные клетки (pDC). Частота и скорость инфицирования вирусом гриппа A A / California / 7/2009 (ph2N1) и A / Victoria / 361/2011 (h4N2) у беременных (P) и небеременные (НП) женщины.Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) от женщин в группах NP (черные точки) и P (серые точки) были инфицированы вирусом гриппа А ph2N1 или h4N2 при множественности инфицирования 3 в течение 7 часов или были ложно инфицированы (NS). A , Демографические характеристики когорты. B , Частота моноцитов и pDC. C , Частота нуклеопротеидов (NP) вируса гриппа — положительных моноцитов и pDC, соответственно, по данным внутриклеточного окрашивания. Каждая точка представляет частоту клеток от 1 пациента.Столбцы представляют собой среднее значение для каждой совокупности. * P <.05, *** P <.001 и **** P <.0001 для различий между группами P и NP.

Рисунок 1.

Моноциты и плазматические дендритные клетки (pDC). Частота и скорость инфицирования вирусом гриппа A A / California / 7/2009 (ph2N1) и A / Victoria / 361/2011 (h4N2) у беременных (P) и небеременные (НП) женщины. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) от женщин в группах NP (черные точки) и P (серые точки) были инфицированы вирусом гриппа А ph2N1 или h4N2 при множественности инфицирования 3 в течение 7 часов или были ложно инфицированы (NS). A , Демографические характеристики когорты. B , Частота моноцитов и pDC. C , Частота нуклеопротеидов (NP) вируса гриппа — положительных моноцитов и pDC, соответственно, по данным внутриклеточного окрашивания. Каждая точка представляет частоту клеток от 1 пациента. Столбцы представляют собой среднее значение для каждой совокупности. * P <.05, *** P <.001 и **** P <.0001 для различий между группами P и NP.

Изоляция PBMC, подготовка вирусов и заражение

PBMC были выделены из цельной крови с помощью Ficoll-Paque (GE Healthcare) и заморожены в 90% фетальной телячьей сыворотке (Thermo Scientific) / 10% диметилсульфоксиде (Sigma-Aldrich).Вирусы гриппа А дикого типа ph2N1 и h4N2 размножали в куриных яйцах с зародышем. Криоконсервированные PBMC размораживали, промывали и ресуспендировали в бессывороточной среде перед инфицированием ph2N1 или h4N2 при множественности инфицирования 3 в течение 1 часа при 37 ° C, после чего добавляли сыворотку для получения 10% фетальной бычьей сыворотки. Через 2 часа клетки ресуспендировали с 2 мкМ монензина и 3 мкг / мл брефельдина А в течение 4 часов, что дало общую продолжительность стимуляции 7 часов [4].

Окрашивание клеток и получение CyTOF

Подробные протоколы окрашивания описаны в другом месте [11].Панели для окрашивания описаны в дополнительной таблице 1. Все антитела конъюгировали с использованием наборов для мечения MaxPar X8 (DVS Sciences). Окрашенные клетки анализировали на CyTOF-1 (Fluidigm) и анализировали с помощью FloJo v10 (Treestar).

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism, версия 7.0a (GraphPad Software). Характеристики беременных и контрольных участниц сравнивались с использованием тестов Манна-Уитни. A P значение <.05 считали статистически значимым.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Частота и уровни инфицирования вирусом гриппа А в моноцитах и ​​pDC

Мы количественно определили частоты CD14 ⁺ моноцитов и CD4 ⁺ CD123 ⁺ pDC в размороженных PBMC, полученных от 21 беременной и 21 небеременной женщины (см. Схему гейтирования на дополнительном рисунке 1). В пробах с ложной инфекцией (нестимулированными) у беременных женщин частота моноцитов в 1,4 раза выше ( P =.04) и в 1,7 раза более высокую частоту pDC ( P = 0,03) по сравнению с контролем (Рисунок 1 B и дополнительные таблицы 2 и 3) в соответствии с предыдущими исследованиями [12]. После инфицирования вирусами гриппа А ph2N1 и h4N2 значительных различий в частоте моноцитов не наблюдалось. Однако частота pDC оставалась значительно выше у беременных после инфицирования ph2N1 (в 2,1 раза выше; P = 0,02) или h4N2 (в 1,4 раза выше; P = 0,04) (Рисунок 1 B и Дополнительные таблицы 2 и 3).На основании окрашивания на нуклеопротеин внутриклеточного вируса гриппа A не было значительных различий в скорости инфицирования моноцитов или pDC от беременных и небеременных женщин, инфицированных ph2N1 или h4N2 вирусом гриппа A (рис. 1 C ).

Влияние вируса гриппа A на активацию моноцитов и pDC во время беременности

Чтобы оценить, изменяется ли иммунный ответ моноцитов и pDC на вирус гриппа A во время беременности, мы измерили экспрессию маркеров активации HLA-DR и CD69.Инфекция вирусом гриппа А ph2N1 и h4N2 значительно увеличивала экспрессию CD69 в моноцитах и ​​pDC как у беременных, так и у контрольных женщин (фигура 2 A , дополнительная фигура 4 и дополнительные таблицы 3 и 4). Однако активация моноцитов во время беременности была значительно более значительной. Экспрессия CD69 была в 1,9 раза выше в h2N1-инфицированных моноцитах ( P = 0,05) и в 2,4 раза выше в h4N2-инфицированных моноцитах ( P = 0,005) от беременных женщин по сравнению с контрольными (рис. 2). А ).Аналогичным образом, экспрессия HLA-DR на инфицированных моноцитах была в 1,4 раза (для ph2N1; P = 0,01) и в 1,8 раза (для h4N2; P = 0,01) выше у беременных женщин (рис. 2 B и Дополнительный рисунок 4 B ). В pDC не было значительных различий в повышении активности CD69 между беременными и контрольными женщинами (фигура 2 A и дополнительная фигура 4 A ). Однако экспрессия HLA-DR была в 8,9 раза выше на исходном уровне ( P, = 0,0001) и 2.В 1 раз выше после инфицирования h2N1 ( P = 0,01) у беременных женщин (Рисунок 2 A, и 2 B и дополнительный Рисунок 4 B ). Не было различий в частоте HLA-DR– и CD69-экспрессирующих моноцитов или pDC во втором и третьем триместрах беременности (дополнительный рисунок 3).

Рисунок 2.

Иммунные ответы моноцитов и плазматических дендритных клеток (pDC) на A / California / 7/2009 (ph2N1) и A / Victoria / 361/2011 (h4N2) вирусную инфекцию гриппа A у беременных (P) и небеременных ( НП) женщины.Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) от женщин в группах NP (черные точки) и P (серые точки) были инфицированы вирусом гриппа А ph2N1 или h4N2 при множественности инфицирования 3 в течение 7 часов или были ложно инфицированы (NS). A , Частота CD69-экспрессирующих моноцитов (слева) и pDC (справа). B , Частота экспрессии HLA-DR на моноцитах и ​​pDC. C и D , Частота моноцитов и pDC, продуцирующих индуцированный интерфероном γ-индуцированный белок 10 (IP-10) и воспалительный белок макрофагов 1β (MIP-1β), соответственно.Каждая точка представляет частоту клеток для 1 пациента. * P <.05, ** P <.01, *** P <.001 и **** P <.0001 для различий между группами P и NP.

Рисунок 2.

Иммунные ответы моноцитов и плазматических дендритных клеток (pDC) на A / California / 7/2009 (ph2N1) и A / Victoria / 361/2011 (h4N2) вирусную инфекцию гриппа A у беременных (P) и небеременных (НП) женщины. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) от женщин в группах NP (черные точки) и P (серые точки) были инфицированы вирусом гриппа А ph2N1 или h4N2 при множественности инфицирования 3 в течение 7 часов или были ложно инфицированы (NS). A , Частота CD69-экспрессирующих моноцитов (слева) и pDC (справа). B , Частота экспрессии HLA-DR на моноцитах и ​​pDC. C и D , Частота моноцитов и pDC, продуцирующих индуцированный интерфероном γ-индуцированный белок 10 (IP-10) и воспалительный белок макрофагов 1β (MIP-1β), соответственно. Каждая точка представляет частоту клеток для 1 пациента. * P <.05, ** P <.01, *** P <.001 и **** P <.0001 для различий между группами P и NP.

Влияние вируса гриппа А на функцию моноцитов и ПКК во время беременности

Чтобы оценить функциональные ответы моноцитов и пДК на вирус гриппа А у беременных и небеременных женщин, мы оценили внутриклеточные уровни провоспалительного цитокина IFN-α и хемокинов MIP-1β и IP-10. И у беременных, и у небеременных женщин инфекция вируса гриппа A привела к значительно более высокой частоте моноцитов и pDC, продуцирующих IFN-α, IP-10 и MIP-1β (Рисунок 2 C и 2 D , дополнительные рисунки 2 и 2). 4 и дополнительные таблицы 3 и 4).Не было значительных различий в частоте IFN-α-продуцирующих моноцитов и pDC между беременными и небеременными женщинами (дополнительный рисунок 3), хотя наблюдалось значительное увеличение средней интенсивности сигнала IFN-α (MSI) среди беременных женщин в ответ. к вирусу гриппа А (дополнительный рисунок 4). После инфекции ph2N1 и h4N2 у беременных женщин была значительно более высокая частота моноцитов и pDC, продуцирующих IP-10, чем у небеременных женщин, с 2,0-кратным увеличением частоты моноцитов, продуцирующих IP-10 и 1.6-кратное увеличение частоты pDC, продуцирующих IP-10 (Рисунок 2 C ). Кроме того, у беременных женщин процент pDC, продуцирующих MIP-1β, увеличивался в 1,5 раза после инфицирования как ph2N1, так и h4N2 вирусом гриппа A (фигура 2 D ). Таким образом, ответы моноцитов и pDC на вирус гриппа А ph2N1 и h4N2 усиливаются во время беременности.

ОБСУЖДЕНИЕ

Во время беременности иммунная система сталкивается с проблемой предотвращения отторжения плода при одновременной защите от патогенов.Эта проблема может способствовать необычной восприимчивости беременных женщин к осложнениям, вызванным инфекцией, вызванной вирусом гриппа А. Моноциты и pDC являются ключевыми клетками врожденного иммунитета в защите от инфекции вирусом гриппа А. Здесь мы оценили иммунный фенотип и функцию моноцитов и pDC беременных женщин при инфицировании PBMC вирусами гриппа ph2N1 и h4N2. Моноциты и клетки pDC демонстрируют повышенную экспрессию маркеров активации HLA-DR и CD69, повышенную продукцию IP-10 и повышенную продукцию MIP-1β pDC у беременных женщин.Эти данные подтверждают идею о том, что моноциты и pDC проявляют повышенную активацию и провоспалительный фенотип при инфицировании вирусом гриппа A во время беременности. Эта чрезмерная активация может исказить иммунный ответ от здорового ответа к разрушительной, если не смертельной реакции.

Эти наблюдения соответствуют критической роли, которую статус активации моноцитов и пДК играет в иммунном ответе на вирус гриппа А [5, 6]. Повышенная частота и статус активации моноцитов и пДК в ответ на инфекцию вирусом гриппа А может увеличивать прайминг и активацию других иммунных клеток, особенно CD4 ⁺ Т-клеток, распознающих HLA-DR.Это может объяснить усиленный Т-клеточный ответ CD4 ⁺ беременных женщин на инфицирование вирусом гриппа смешанных культур PBMC, о котором мы сообщали ранее [4].

Еще более драматичным, чем повышенный статус активации, было повышение продукции IP-10 и MIP-1β, отмеченное в моноцитах и ​​pDC от беременных женщин в ответ на инфекцию вирусом гриппа А. Хемокины, такие как IP-10 и MIP-1β, играют важную роль в привлечении эффекторных клеток, таких как нейтрофилы, NK-клетки и Т-клетки, для ускорения выведения вируса гриппа.Однако несколько линий доказательств подтверждают идею о том, что повышенное количество хемокинов во время инфицирования вирусом гриппа связано с повышенными уровнями заболеваемости и смертности [13]. Например, системные уровни IP-10 были значительно повышены в сыворотке крови пациентов с острым респираторным дистресс-синдромом (ARDS), вызванным вирусом сезонного гриппа A (h2N1) 2009 г., по сравнению с пациентами без осложнений [14]. Кроме того, в модели на мышах ось IP-10 и CXCR3 усиливает развитие ОРДС за счет рекрутирования нейтрофилов после инфицирования вирусом гриппа ph2N1 [15].Наши результаты и эти предыдущие открытия предполагают, что во время беременности инфекция вирусом гриппа A приводит к острой и чрезмерной выработке IP-10 и MIP-1β моноцитами и pDC, что может способствовать развитию ОРДС и других респираторных осложнений, повышая риск заражения гриппом. сопутствующая смертность среди беременных.

Моноциты и pDC являются наиболее мощными продуцентами IFN-α в человеческих PBMC. Forbes и др. Сообщили, что продукция IFN-α нарушена в PBMC у беременных женщин по сравнению с контрольной группой при инфицировании вирусом гриппа [10].Здесь мы не обнаружили разницы в частоте моноцитов, продуцирующих IFN-α, и pDC между беременными и контрольными женщинами. Причины этого несоответствия не ясны, но важно отметить, что есть несколько различий в дизайне исследования, которые могут объяснить результаты. Во-первых, после проведения анализа динамики изменений для определения времени пика активности клеток врожденного иммунитета, мы использовали массовую цитометрию для оценки частоты цитокин-продуцирующих клеток через 7 часов после заражения. В предыдущих исследованиях изучали концентрацию цитокинов через 48 часов культивирования, время, когда мы наблюдали значительные уровни гибели клеток в моноцитах и ​​pDC в инфицированных культурах.Таким образом, возможно, что моноциты и pDC у беременных женщин продуцируют меньшие уровни цитокинов на клетку или что различия во времени ответа повлияли на результаты. Необходимы дальнейшие исследования для выяснения конкретных типов клеток и механизмов, нарушающих продукцию IFN-α из полных PBMC во время беременности во время инфицирования вирусом гриппа А. Кроме того, во всех исследованиях участвовали относительно небольшие группы субъектов с различным предыдущим иммунизационным статусом и различиями в расовом составе, что могло в дальнейшем повлиять на результаты.

Эффективный противовирусный ответ обеспечивается взаимодействием между иммунными клетками как языком для достижения надлежащего и здорового иммунного ответа. Следует отметить, что несколько предыдущих исследований иммунитета против гриппа во время беременности, особенно те, которые были сосредоточены на NK и T-клетках, изучали эти клетки изолированно и обнаружили, что их ответы подавлены [3]. Такие исследования исключили перекрестные разговоры с другими иммунными клетками. Наше открытие, что моноциты и pDC имеют повышенный хемокиновый ответ на вирус гриппа A во время беременности, может объяснить наши предыдущие открытия с использованием смешанных инфекций, что ответы NK-клеток и T-клеток были усилены, поскольку лимфоциты могли быть активированы моноцитами и pDC. [4].Степень, в которой клетки врожденного и адаптивного иммунитета взаимодействуют во время инфицирования вирусом гриппа, может дать дополнительное представление о патогенезе гриппа.

Таким образом, мы сообщаем здесь, что моноциты и pDC во время беременности демонстрируют выраженный провоспалительный фенотип во время инфицирования вирусом гриппа A in vitro. Эти данные вместе с нашей предыдущей работой, подчеркивающей повышенную чувствительность Т-клеток и NK-клеток к инфекции вируса гриппа А ph2N1, предоставляют дополнительные доказательства, подтверждающие усиленный и непропорциональный воспалительный ответ на вирус гриппа А во время беременности.Такой усиленный ответ может способствовать повышению заболеваемости и смертности во время беременности и может предоставить возможности для терапевтического вмешательства.

Банкноты

Благодарности. Благодарим беременных и добровольцев из контрольной группы за их участие; Канта Суббарао, MBBS, MPH (Национальные институты здравоохранения) за предоставление вируса гриппа; Джоан Лау за ее выдающуюся помощь в регистрации беременных; и Салли Макки (менеджер по нормативным требованиям и данным), Сью Свуп, RN (менеджер клиники), Тони Трела и Нэнси Мастман (медсестры-исследователи), Ашима Гоэль, Ракель Флейшманн, Кирстен Спанн и Сушил Батра (ассистенты клинических исследований, которые обеспечивали нормативную поддержку , планирование и ввод данных) и Мишель Угур (флеботомист; все участники программы вакцины Stanford – LPCH) за набор добровольцев из контрольной группы.

Финансовая поддержка. Эта работа была поддержана Благотворительным фондом Дорис Дьюк (премия 2013 года в области клинических исследований 2013099 для CAB), Стэнфордским исследовательским институтом детского здоровья (награда факультета Талии и Джона Моргриджа для CAB), Премией факультета Маккормика (для CAB), Стэнфордский консорциум проекта иммунологии человека (Фонд инфраструктуры и возможностей для CAB и гранты U19AI0